谢琳
- 作品数：15 被引量：45H指数：5
- 供职机构：宁夏医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“春晖计划”宁夏回族自治区教育厅基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- miR-30a在同型半胱氨酸致足细胞凋亡中的作用被引量：5
- 2019年
- 目的探讨miR-30a在同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)诱导足细胞凋亡中的作用。方法体外培养小鼠肾小球足细胞,分为Control组(0μmol/L Hcy)与Hcy组(80μmol/L Hcy),干预细胞48 h后,流式细胞术检测足细胞凋亡水平;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-30a的表达水平;巢式甲基化特异性PCR(nMS-PCR)检测miR-30a启动子区DNA甲基化水平;透射电镜观察感染miR-30a前体(miR-30a mimic)和抑制物(miR-30a inhibitor)后足细胞凋亡及超微结构的变化。结果与Control组相比,Hcy组足细胞凋亡水平增加(P<0.05),而miR-30a表达水平降低(P<0.01);同时,miR-30a启动子区DNA甲基化程度升高(P<0.05);感染miR-30a mimic后,足细胞损伤明显减轻,凋亡形态的细胞数量减少,而感染miR-30a inhibitor后足细胞损伤程度加剧,凋亡形态的细胞数量增加。结论 miR-30a可抑制足细胞凋亡,其机制可能是miR-30a启动子区DNA低甲基化发挥重要作用。
- 丁宁郭凤英谢琳曹军王青青张玲马胜超卢冠军张鸣号姜怡邓杨晓玲
- 关键词：同型半胱氨酸足细胞凋亡DNA甲基化
- FoxO1 DNA甲基化在同型半胱氨酸致肝细胞凋亡中的作用被引量：12
- 2018年
- 目的探讨叉头状转录因子O1(Fox O1)及其DNA甲基化在同型半胱氨酸(Hcy)诱导的内质网应激致肝细胞凋亡中的作用。方法将人肝细胞分为对照组(0μmol/L Hcy)、Hcy组(100μmol/LHcy)、干预组(100μmol/L Hcy+叶酸+维生素B12),干预细胞48 h后,流式细胞术检测肝细胞凋亡水平;实时荧光定量PCR(q PCR)检测内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、激活转录因子6(ATF6)、X盒结合蛋白-1(XBP-1)及C/EPB同源蛋白(CHOP)的表达水平;q PCR和Western blot分别检测Fox O1m RNA及蛋白的表达水平;巢式甲基化特异性PCR(n MS-PCR)检测Fox O1 DNA甲基化水平。结果与对照组相比,Hcy组肝细胞凋亡水平增加(P<0.05),GRP78、ATF6、XBP-1、CHOP m RNA水平升高(P<0.001,P<0.01,P<0.001,P<0.001),同时Fox O1 m RNA及蛋白水平升高(P<0.01,P>0.05),而其DNA甲基化水平降低(P<0.05);干预组较Hcy组凋亡水平降低(P<0.05),GRP78、ATF6、XBP-1、CHOP m RNA水平降低(P<0.001,P<0.01,P<0.01,P<0.001),Fox O1 m RNA及蛋白水平降低(P<0.001,P>0.05),而其DNA甲基化水平升高(P<0.05)。结论 Fox O1 DNA高甲基化可能在同型半胱氨酸诱导的内质网应激致肝细胞凋亡中发挥重要作用。
- 谢琳丁宁徐灵博姜怡邓杨晓玲马胜超焦运
- 关键词：同型半胱氨酸肝细胞凋亡内质网应激FOXO1DNA甲基化
- 脂肪酸结合蛋白4在同型半胱氨酸致肝细胞脂质沉积中的作用被引量：2
- 2020年
- 目的探讨脂肪酸结合蛋白4(fatty acid binding protein 4,FABP4)对同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)致肝细胞脂质沉积的促进作用。方法胱硫醚β-合成酶(cystathionineβ-synthase,CBS)基因缺陷杂合体(CBS+/-)小鼠CBS基因正常(CBS+/+)小鼠给予高蛋氨酸饮食12周,设CBS+/+Met组(CBS+/+小鼠高蛋氨酸饮食)和CBS+/-Met组(CBS+/-小鼠高蛋氨酸饮食);体外培养人正常肝细胞HL-7702并给予100μmol·L^-1Hcy干预,FABP4过表达腺病毒转染肝细胞。免疫荧光双染观察小鼠肝脏组织中脂质分化相关蛋白(adipose differentiation-related protein,ADFP)表达;实时定量PCR(RT-qPCR)和Western blot分别检测小鼠肝脏和人肝细胞HL-7702中FABP4的表达;肝细胞HL-7702油红O染色观察肝细胞内脂质状况。结果 CBS+/+Met和CBS+/-Met组小鼠的肝脏组织中肝细胞表面标记物Cytokeratin18呈现绿色荧光,与CBS+/+Met组相比,CBS+/-Met组小鼠肝脏中ADFP表达明显增多(P<0.01);肝脏中FABP4的mRNA(P<0.01)和蛋白(P<0.05)表达均升高。Hcy干预肝细胞HL-7702后胞质中红色脂质颗粒明显增多(P<0.05),FABP4的表达趋势与动物水平一致,均明显升高(P<0.01);在有或无Hcy干预肝细胞的情况下转染FABP4过表达腺病毒后肝细胞胞质内红色脂质颗粒均明显增多(P均<0.01)。结论 FABP4的上调可能促进Hcy诱导的肝细胞脂质沉积。
- 邓梅李桂忠李桂忠张辉谢琳丁宁张辉孙卓成郭伟张鸣号杨晓玲姜怡邓
- 关键词：同型半胱氨酸肝细胞脂质沉积
- ASPP2调控GRP78在L-NAME诱导胎盘滋养细胞凋亡中的作用被引量：4
- 2019年
- 目的探讨p53凋亡刺激蛋白2(apoptosis stimulating protein 2 of p53,ASPP2)调控葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)在N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-nitroarginine methyl ester,L-NAME)诱导胎盘滋养细胞凋亡中的作用,为临床研究妊娠期高血压疾病提供理论依据。方法体外培养HTR-8/SVneo人胎盘滋养细胞,分为对照组(0μmol·L^(-1)L-NAME)和L-NAME组(100μmol·L^(-1)LNAME),干预48 h后,分别采用Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术和吖啶橙/溴化乙锭染色,检测胎盘滋养细胞凋亡水平的变化;运用Western blot检测caspase-12、GRP78和ASPP2的蛋白变化; ASPP2干扰腺病毒感染人胎盘滋养细胞后,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测ASPP2的mRNA表达水平,Western blot检测GRP78的蛋白表达水平;给予100μmol·L^(-1) L-NAME干预48 h后,Western blot和免疫荧光分别检测caspase-12和GRP78的蛋白表达。结果与对照组相比,L-NAME组胎盘滋养细胞凋亡水平明显增加(P <0. 05);吖啶橙染色显示,与对照组相比,L-NAME组细胞多数呈现鲜亮的橙色,晚期凋亡细胞数明显增加;同时caspase-12、GRP78和ASPP2蛋白的表达明显增加(P <0. 05,P <0. 01);干扰ASPP2后,caspase-12和GRP78蛋白表达明显降低(P <0. 05)。结论下调ASPP2可降低GRP78的表达,进而抑制L-NAME诱导的胎盘滋养细胞凋亡。
- 谢琳张辉丁宁王艳华吴凯吴凯王青青刘昆张慧萍张慧萍
- 关键词：葡萄糖调节蛋白78N-硝基-L-精氨酸甲酯胎盘滋养细胞细胞凋亡
- G9a在L-NAME诱导胎盘滋养细胞自噬中的作用被引量：1
- 2020年
- 目的探讨组蛋白甲基转移酶G9a在胎盘滋养细胞自噬中的作用。方法体外培养人胎盘滋养细胞,加入100μmol/L N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)干预48 h后,Western blot检测自噬相关蛋白LC3II/I,p62以及G9a的蛋白表达,感染自噬流双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3双标腺病毒)观察自噬流的改变,了解L-NAME对滋养细胞自噬的影响及G9a的表达改变;在细胞中转染G9a过表达腺病毒及干扰质粒,Western blot和qRT-PCR对G9a自身表达进行验证,同时给予100μmol/L L-NAME后,Western blot检测自噬相关蛋白LC3II/I和p62的蛋白表达,阐明G9a在L-NAME介导的滋养细胞自噬中的作用。结果与对照组比较,L-NAME组LC3II/I增加1.4倍,p62表达降低40%,G9a表达降低38%,差异均有统计学意义(P<0.05);且观察到滋养细胞内自噬体及自噬溶酶体均增多,自噬增强。过表达G9a后自噬相关蛋白LC3II/I表达降低降22%,p62表达升高2.12倍,差异有统计学意义(P<0.05);干扰G9a后,p62表达降低62%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论G9a可抑制L-NAME诱导的胎盘滋养细胞自噬的发生。
- 高源张辉谢琳谢琳马晓莉王艳华杨晓玲丁宁丁宁
- 关键词：自噬滋养细胞
- FoxO1在同型半胱氨酸诱导的肾脏足细胞损伤及凋亡中的作用研究被引量：2
- 2022年
- 目的探讨叉头状转录因子O1(FoxO1)在同型半胱氨酸(Hcy)诱导的肾脏足细胞损伤及凋亡中的作用。方法采用高蛋氨酸饮食喂养胱硫醚β-合成酶(Cbs)基因正常Cbs+/+小鼠和单基因敲除Cbs+/-小鼠各10只。8周后处死,收集肾组织,PAS染色观察小鼠肾小球形态学变化。体外培养足细胞,分为Control组和Hcy组(用含80μmol/L Hcy的细胞培养液干预48 h)。将携带绿色荧光蛋白(GFP)的过表达FoxO1腺病毒(Ad-FoxO1)和干扰FoxO1腺病毒(Sh-FoxO1)转染足细胞,分为对照组、Ad-GFP组、Ad-FoxO1组、Sh-NC组、Sh-FoxO1组、Ad-GFP+Hcy组、AdFoxO1+Hcy组、Sh-NC+Hcy组、Sh-FoxO1+Hcy组。Western blot检测小鼠肾组织和足细胞裂隙膜蛋白(Podocin和Nephrin)、FoxO1及凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶12(Caspase12)蛋白表达;qPCR检测小鼠肾组织和足细胞中FoxO1 mRNA的表达。结果PAS染色结果显示,Cbs+/+组小鼠肾小球结构正常,基底膜清晰且分布均匀,而Cbs+/-组小鼠肾小球基底膜则呈现节段性增厚,系膜基质增多;与Cbs+/+组小鼠比较,Cbs+/-组小鼠肾组织中Podocin、Nephrin和FoxO1蛋白、FoxO1 mRNA的表达明显降低(P<0.01)。与Control组比较,Hcy组FoxO1 m RNA和蛋白表达显著降低(P<0.01);过表达FoxO1后,与Ad-GFP+Hcy组相比,Ad-FoxO1+Hcy组Podocin和Nephrin蛋白表达均明显升高,Bax/Bcl-2比值、Caspase12蛋白表达均明显降低(P<0.05);而干扰FoxO1后,与Sh-NC+Hcy组相比,Sh-FoxO1+Hcy组Podocin和Nephrin蛋白表达均明显降低,Bax/Bcl-2比值、Caspase12蛋白表达均明显增高(P<0.05)。结论FoxO1可减轻Hcy诱导的小鼠肾脏足细胞损伤及凋亡。
- 张宏红谢琳盛思琪卢冠军姜怡邓卢冠军姜怡邓
- 关键词：足细胞胱硫醚Β合酶同型半胱氨酸肾损伤
- 衰老心肌细胞缺氧后处理中miR-204的作用被引量：5
- 2017年
- 目的探索miR-204在衰老心肌细胞缺氧后处理中的作用。方法经D-半乳糖诱导心肌细胞衰老后,随机分为对照组(ONC组)、缺氧复氧组(OAR组)、后处理组(OIPO组)。采用ELISA法检测培养基中c Tn-Ι的含量;微板法检测LDH的含量;XTT法检测细胞活性;荧光定量PCR法检测miR-204的mRNA表达,并确定miR-204与c Tn-Ι、LDH的相关性。结果与ONC组相比,OAR、OIPO组c Tn-Ι、LDH的含量均增加(P<0.05,P<0.01);与OAR组相比,OIPO组c Tn-Ι、LDH的含量无显著性改变。与ONC组相比,OAR、OIPO组miR-204的表达均降低(P<0.01);相关性分析显示miR-204与c Tn-Ι、LDH呈现负相关。结论缺氧后处理对缺氧复氧所致的衰老心肌细胞损伤的保护作用减弱与miR-204有关。
- 徐灵博郝银菊丁宁谢琳马胜超车双双杨晓玲姜怡邓张鸣号
- 关键词：衰老
- 高同型半胱氨酸血症诱导Cbs^+/-小鼠肾损伤的作用机制被引量：5
- 2021年
- 背景:在慢性肾脏病中常常伴有同型半胱氨酸水平升高,导致足细胞凋亡,但是其具体机制还尚未清楚。目的:探讨高同型半胱氨酸血症诱导Cbs^+/-小鼠肾损伤的作用机制。方法:选取体质量相近的Cbs^+/+小鼠(对照组)和Cbs^+/-小鼠(模型组),每组10只,两组小鼠均饲以高蛋氨酸饮食,8周后处死,分离血清,留取肾脏组织。采用全自动生化分析仪检测血清同型半胱氨酸、尿素氮、肌酐水平;糖原染色法及透射电镜观察肾脏损伤情况;TUNEL染色观察肾小球中细胞凋亡情况;Western blot检测Bax、Bcl-2和caspase12的蛋白表达水平。结果与结论:①与Cbs^+/+小鼠比较,Cbs^+/-小鼠血清同型半胱氨酸、尿素氮及肌酐水平均明显升高(P<0.01);②糖原染色结果显示,Cbs^+/+小鼠肾小球基底膜清楚,粗细均匀,而Cbs^+/-小鼠肾小球基底膜则呈现不同程度的粗细不均,膜区增宽、基质增厚;③透射电镜显示,Cbs^+/+小鼠肾小球基底膜清晰,足突规则,而Cbs^+/-小鼠肾小球基底膜局灶性增厚,足突不规则融合;④TUNEL染色结果显示,与Cbs^+/+小鼠比较,Cbs^+/-小鼠肾小球内凋亡细胞数量明显增加;⑤Western blot检测结果显示,Bax/Bcl-2和caspase12的蛋白水平均升高(P<0.05);⑥结果表明:足细胞凋亡在高同型半胱氨酸血症诱导Cbs^+/-小鼠肾损伤中发挥着重要的作用。
- 吴凯刘昆谢琳谢琳马胜超卢冠军曹军马胜超姜怡邓李桂忠
- 关键词：肾损伤高同型半胱氨酸血症足细胞同型半胱氨酸尿素氮小鼠
- miR-195-3p在同型半胱氨酸诱导的肝氧化应激损伤中的调控作用研究被引量：4
- 2022年
- 目的 探讨miR-195-3p在同型半胱氨酸(Hcy)诱导的肝氧化应激损伤中的作用。方法 小鼠分为CBS^(+/+)组、CBS^(+/-)组、Lv-miR-195-3p组(CBS^(+/-)小鼠经尾静脉注射病毒滴度为2×10~7 TU·mL^(-1)的miR-195-3p重组慢病毒)、Lv-GFP组(CBS^(+/-)小鼠经尾静脉注射等体积病毒滴度为1×10~8 TU·mL^(-1)的绿色荧光蛋白慢病毒)和PBS组(CBS^(+/-)小鼠经尾静脉注射等体积磷酸盐缓冲液),每组10只。体外培养人源肝细胞(HL-7702),分为对照组(0μmol·L^(-1) Hcy)、Hcy组(100μmol·L^(-1) Hcy)、mimic-NC组(转染模拟物对照组)、mimic-NC+Hcy组(转染模拟物对照组+100μmol·L^(-1) Hcy)、miR-195-3p-mimic组(转染miR-195-3p模拟物)、miR-195-3p-mimic+Hcy组(转染miR-195-3p模拟物+100μmol·L^(-1) Hcy)、inhibitor-NC组(转染抑制物对照组)、inhibitor-NC+Hcy组(转染抑制物对照组+100μmol·L^(-1) Hcy)、miR-195-3p-inhibitor组(转染miR-195-3p抑制物)、miR-195-3p-inhibitor+Hcy组(转染miR-195-3p抑制物+100μmol·L^(-1) Hcy)。用实时荧光定量聚合酶链反应检测肝组织和肝细胞中miR-195-3p的表达水平,用试剂盒检测肝组织及肝细胞中丙二醛(MDA)含量和总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性。结果 Lv-miR-195-3p组、Lv-GFP组和PBS组肝组织中miR-195-3p相对表达量分别为2.29±0.67,0.73±0.09和0.57±0.27,MDA含量分别为(1.82±0.19),(0.99±0.13)和(1.19±0.18)nmol·mg^(-1) prot,T-SOD活性分别为(229.64±63.62),(377.08±75.58)和(336.19±71.49)U·mg^(-1) prot,Lv-miR-195-3p组的上述指标与Lv-GFP组或PBS组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。对照组和Hcy组的miR-195-3p相对表达量分别为2.88±0.41和6.51±2.21,差异有统计学意义(P<0.05)。mimic-NC+Hcy组、miR-195-3p-mimic+Hcy组、inhibitor-NC+Hcy组和miR-195-3p-inhibitor+Hcy组的MDA含量分别为(1.18±0.17),(2.58±0.24),(1.92±0.11)和(0.97±0.10)nmol·mg^(-1) prot,T-SOD活性分别为(50.37±5.61),(31.74±2.50),(32.45±2.30)和(41.18±2.55)U·mg^(-1) prot,miR-195-3p-mimic+Hcy组的�
- 张宏红谢琳谢琳焦运焦运姜怡邓杨安宁
- 关键词：微小RNA同型半胱氨酸氧化应激肝损伤
- 环状RNA circ_BRAF_2在子痫前期胎盘滋养细胞自噬中的作用被引量：1
- 2022年
- 目的研究子痫前期(PE)患者胎盘组织中环状RNA circ_BRAF_2的表达及其对胎盘滋养细胞自噬的影响。方法选取妊娠对照组与PE组胎盘组织各22例;将HTR-8/SVneo细胞分为对照组(常规培养)、pLV-NC组(转染空载体)、pLV-circ_BRAF_2组(转染circ_BRAF_2)、缺氧组(缺氧处理)、pLV-NC+缺氧组(转染空载并进行缺氧处理)、pLV-circ_BRAF_2+缺氧组(转染circ_BRAF_2并进行缺氧处理)。用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测胎盘组织及HTR-8/SVneo细胞中circ_BRAF_2的表达,用PCR及Sanger测序对HTR-8/SVneo细胞中circ_BRAF_2进行鉴定,用核质分离法检测circ_BRAF_2在HTR-8/SVneo细胞胞质和细胞核中的表达,用透射电镜观察细胞自噬体的形成,用蛋白质印迹法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、P62的表达。用qRT-PCR检测miR-15a-5p的表达水平。结果妊娠对照组、PE组、对照组及缺氧组circ_BRAF_2的相对表达水平分别为0.89±0.05,0.32±0.03,0.04±0.05×10^(-1)和0.02±0.03×10^(-1),PE组与妊娠对照组相比,缺氧组与对照组相比,差异均有统计学意义(均P<0.01);通过外扩型引物只能在cDNA中扩增出circ_BRAF_2,而采用内扩型引物能同时在cDNA和gDNA中扩增出其线性转录本BRAF;circ_BRAF_2在HTR-8/SVneo细胞胞质中的表达(0.02±0.02×10^(-1))显著高于在胞核中的表达(0.02×10^(-2)±0.03×10^(-3),P<0.01);对照组、pLV-NC组、pLV-circ_BRAF_2组、缺氧组、pLV-NC+缺氧组、pLV-circ_BRAF_2+缺氧组LC3-Ⅱ蛋白相对表达水平分别为0.75±0.25,0.73±0.23,0.75±0.23,1.17±0.30,1.19±0.32和0.42±0.06,P62蛋白相对表达水平分别为0.72±0.07,0.75±0.09,0.72±0.08,0.45±0.11,0.44±0.10和0.62±0.07,缺氧组的上述指标与对照组相比,pLV-circ_BRAF_2+缺氧组的上述指标与pLV-NC+缺氧组相比,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05);这6组的单个细胞内自噬体数量变化及miR-15a-5p的相对表达水平变化与LC3-Ⅱ蛋白表达变化水平相同。结论过表达circ_B
- 朱亚飞朱亚飞谢琳谢琳谢琳吴凯姜怡邓吴凯
- 关键词：子痫前期滋养细胞自噬
