丁宁
- 作品数：10 被引量：50H指数：5
- 供职机构：宁夏医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金宁夏回族自治区教育厅基金教育部“春晖计划”更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- miR-30a在同型半胱氨酸致足细胞凋亡中的作用被引量：5
- 2019年
- 目的探讨miR-30a在同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)诱导足细胞凋亡中的作用。方法体外培养小鼠肾小球足细胞,分为Control组(0μmol/L Hcy)与Hcy组(80μmol/L Hcy),干预细胞48 h后,流式细胞术检测足细胞凋亡水平;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-30a的表达水平;巢式甲基化特异性PCR(nMS-PCR)检测miR-30a启动子区DNA甲基化水平;透射电镜观察感染miR-30a前体(miR-30a mimic)和抑制物(miR-30a inhibitor)后足细胞凋亡及超微结构的变化。结果与Control组相比,Hcy组足细胞凋亡水平增加(P<0.05),而miR-30a表达水平降低(P<0.01);同时,miR-30a启动子区DNA甲基化程度升高(P<0.05);感染miR-30a mimic后,足细胞损伤明显减轻,凋亡形态的细胞数量减少,而感染miR-30a inhibitor后足细胞损伤程度加剧,凋亡形态的细胞数量增加。结论 miR-30a可抑制足细胞凋亡,其机制可能是miR-30a启动子区DNA低甲基化发挥重要作用。
- 丁宁郭凤英谢琳曹军王青青张玲马胜超卢冠军张鸣号姜怡邓杨晓玲
- 关键词：同型半胱氨酸足细胞凋亡DNA甲基化
- FoxO1 DNA甲基化在同型半胱氨酸致肝细胞凋亡中的作用被引量：12
- 2018年
- 目的探讨叉头状转录因子O1(Fox O1)及其DNA甲基化在同型半胱氨酸(Hcy)诱导的内质网应激致肝细胞凋亡中的作用。方法将人肝细胞分为对照组(0μmol/L Hcy)、Hcy组(100μmol/LHcy)、干预组(100μmol/L Hcy+叶酸+维生素B12),干预细胞48 h后,流式细胞术检测肝细胞凋亡水平;实时荧光定量PCR(q PCR)检测内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、激活转录因子6(ATF6)、X盒结合蛋白-1(XBP-1)及C/EPB同源蛋白(CHOP)的表达水平;q PCR和Western blot分别检测Fox O1m RNA及蛋白的表达水平;巢式甲基化特异性PCR(n MS-PCR)检测Fox O1 DNA甲基化水平。结果与对照组相比,Hcy组肝细胞凋亡水平增加(P<0.05),GRP78、ATF6、XBP-1、CHOP m RNA水平升高(P<0.001,P<0.01,P<0.001,P<0.001),同时Fox O1 m RNA及蛋白水平升高(P<0.01,P>0.05),而其DNA甲基化水平降低(P<0.05);干预组较Hcy组凋亡水平降低(P<0.05),GRP78、ATF6、XBP-1、CHOP m RNA水平降低(P<0.001,P<0.01,P<0.01,P<0.001),Fox O1 m RNA及蛋白水平降低(P<0.001,P>0.05),而其DNA甲基化水平升高(P<0.05)。结论 Fox O1 DNA高甲基化可能在同型半胱氨酸诱导的内质网应激致肝细胞凋亡中发挥重要作用。
- 谢琳丁宁徐灵博姜怡邓杨晓玲马胜超焦运
- 关键词：同型半胱氨酸肝细胞凋亡内质网应激FOXO1DNA甲基化
- 衰老心肌细胞缺氧后处理中miR-204的作用被引量：5
- 2017年
- 目的探索miR-204在衰老心肌细胞缺氧后处理中的作用。方法经D-半乳糖诱导心肌细胞衰老后,随机分为对照组(ONC组)、缺氧复氧组(OAR组)、后处理组(OIPO组)。采用ELISA法检测培养基中c Tn-Ι的含量;微板法检测LDH的含量;XTT法检测细胞活性;荧光定量PCR法检测miR-204的mRNA表达,并确定miR-204与c Tn-Ι、LDH的相关性。结果与ONC组相比,OAR、OIPO组c Tn-Ι、LDH的含量均增加(P<0.05,P<0.01);与OAR组相比,OIPO组c Tn-Ι、LDH的含量无显著性改变。与ONC组相比,OAR、OIPO组miR-204的表达均降低(P<0.01);相关性分析显示miR-204与c Tn-Ι、LDH呈现负相关。结论缺氧后处理对缺氧复氧所致的衰老心肌细胞损伤的保护作用减弱与miR-204有关。
- 徐灵博郝银菊丁宁谢琳马胜超车双双杨晓玲姜怡邓张鸣号
- 关键词：衰老
- D-半乳糖对大鼠肺组织MMP-2表达水平及HA、LN和COL3含量的影响及相关性分析被引量：2
- 2017年
- 目的探讨D-半乳糖诱导大鼠衰老过程中对大鼠肺纤维化、肺组织基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达水平及透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)和Ⅲ型胶原(COL3)含量的影响,并分析MMP-2与HA、LN和COL3的相关性。方法将健康成年雄性SD大鼠随机分为对照组和D-半乳糖组。采用HE染色法观察两组大鼠肺组织形态学变化;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法分别检测两组大鼠肺组织MMP-2 mRNA和蛋白表达水平的改变;免疫组织化学法分析肺组织MMP2蛋白的表达水平;ELISA法检测大鼠肺组织中HA、LN和COL3的含量,并分析相关性。结果 HE染色结果发现D-半乳糖组大鼠肺组织发生明显的纤维化改变;qRT-PCR结果显示肺组织中MMP-2 mRNA表达水平高于对照组(P<0.05);免疫组织化学法和Western blot结果显示肺组织中MMP-2蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.05);COL3和LN含量高于对照组,而HA含量低于对照组(P<0.05)。相关性分析结果显示,大鼠肺组织中MMP-2表达水平与COL3、LN呈正相关(r=0.2741,P<0.05;r=0.2841,P<0.05),而与HA呈负相关(r=-0.1782,P<0.05)。结论 D-半乳糖诱导大鼠衰老过程中可以引起肺组织发生纤维化改变,同时增加大鼠肺组织MMP-2表达及COL3和LN含量,降低HA的含量,且MMP-2与COL3、LN和HA之间具有相关性,可能为肺纤维化的早期诊断提供实验依据。
- 杨松昊朱光荣丁宁杨安宁蒋袁絮田珏姜怡邓杨晓玲
- 关键词：D-半乳糖基质金属蛋白酶2层粘连蛋白
- ASPP2调控GRP78在L-NAME诱导胎盘滋养细胞凋亡中的作用被引量：4
- 2019年
- 目的探讨p53凋亡刺激蛋白2(apoptosis stimulating protein 2 of p53,ASPP2)调控葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)在N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-nitroarginine methyl ester,L-NAME)诱导胎盘滋养细胞凋亡中的作用,为临床研究妊娠期高血压疾病提供理论依据。方法体外培养HTR-8/SVneo人胎盘滋养细胞,分为对照组(0μmol·L^(-1)L-NAME)和L-NAME组(100μmol·L^(-1)LNAME),干预48 h后,分别采用Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术和吖啶橙/溴化乙锭染色,检测胎盘滋养细胞凋亡水平的变化;运用Western blot检测caspase-12、GRP78和ASPP2的蛋白变化; ASPP2干扰腺病毒感染人胎盘滋养细胞后,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测ASPP2的mRNA表达水平,Western blot检测GRP78的蛋白表达水平;给予100μmol·L^(-1) L-NAME干预48 h后,Western blot和免疫荧光分别检测caspase-12和GRP78的蛋白表达。结果与对照组相比,L-NAME组胎盘滋养细胞凋亡水平明显增加(P <0. 05);吖啶橙染色显示,与对照组相比,L-NAME组细胞多数呈现鲜亮的橙色,晚期凋亡细胞数明显增加;同时caspase-12、GRP78和ASPP2蛋白的表达明显增加(P <0. 05,P <0. 01);干扰ASPP2后,caspase-12和GRP78蛋白表达明显降低(P <0. 05)。结论下调ASPP2可降低GRP78的表达,进而抑制L-NAME诱导的胎盘滋养细胞凋亡。
- 谢琳张辉丁宁王艳华吴凯吴凯王青青刘昆张慧萍张慧萍
- 关键词：葡萄糖调节蛋白78N-硝基-L-精氨酸甲酯胎盘滋养细胞细胞凋亡
- FABP4在妊娠期高血压疾病胎盘滋养细胞免疫炎症反应中的作用研究被引量：14
- 2017年
- 目的探讨脂肪酸结合蛋白4(fatty acid binding protein 4,FABP4)在妊娠期高血压疾病胎盘滋养细胞免疫炎症反应中的作用。方法体外培养人胎盘滋养细胞株(HTR-8),分别加入0、10、100、500、1 000μmol·L^(-1)N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME),孵育48 h后,采用ELISA检测炎症因子IL-6、TNF-α改变;qRT-PCR、Western blot检测FABP4 mRNA和蛋白表达;构建FABP4腺病毒过表达载体转染细胞后,采用100μmol·L^(-1)L-NAME干预,ELISA分析炎症因子IL-6、TNF-α的变化。结果与对照组比较,L-NAME干预组IL-6、TNF-α及FABP4表达量明显增高(P<0.01);过表达FABP4组与对照组相比,炎症因子IL-6、TNF-α明显增加(P<0.01)。结论 FABP4参与了妊娠期高血压疾病胎盘滋养细胞免疫炎症反应的调控。
- 毛彩艳张辉李旭生杨松昊邓梅丁宁吴凯杨晓玲张慧萍姜怡邓
- 关键词：妊娠期高血压疾病滋养细胞N-硝基-L-精氨酸甲酯
- G9a在L-NAME诱导胎盘滋养细胞自噬中的作用被引量：1
- 2020年
- 目的探讨组蛋白甲基转移酶G9a在胎盘滋养细胞自噬中的作用。方法体外培养人胎盘滋养细胞,加入100μmol/L N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)干预48 h后,Western blot检测自噬相关蛋白LC3II/I,p62以及G9a的蛋白表达,感染自噬流双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3双标腺病毒)观察自噬流的改变,了解L-NAME对滋养细胞自噬的影响及G9a的表达改变;在细胞中转染G9a过表达腺病毒及干扰质粒,Western blot和qRT-PCR对G9a自身表达进行验证,同时给予100μmol/L L-NAME后,Western blot检测自噬相关蛋白LC3II/I和p62的蛋白表达,阐明G9a在L-NAME介导的滋养细胞自噬中的作用。结果与对照组比较,L-NAME组LC3II/I增加1.4倍,p62表达降低40%,G9a表达降低38%,差异均有统计学意义(P<0.05);且观察到滋养细胞内自噬体及自噬溶酶体均增多,自噬增强。过表达G9a后自噬相关蛋白LC3II/I表达降低降22%,p62表达升高2.12倍,差异有统计学意义(P<0.05);干扰G9a后,p62表达降低62%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论G9a可抑制L-NAME诱导的胎盘滋养细胞自噬的发生。
- 高源张辉谢琳谢琳马晓莉王艳华杨晓玲丁宁丁宁
- 关键词：自噬滋养细胞
- D-半乳糖诱导的心肌细胞自噬下降与microRNA的表达变化有关被引量：4
- 2017年
- 目的探讨microRNA(miRNA)和衰老心肌细胞自噬之间的关系。方法使用0、4、8、16、20 g/L D-半乳糖刺激大鼠心肌细胞H9c2衰老,刺激3、6、9天后,β-半乳糖苷酶染色法检测细胞衰老水平;电镜观察D-半乳糖刺激衰老大鼠心肌细胞自噬体形成;分别采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及蛋白质印迹法(Western blot)检测衰老大鼠心肌细胞与正常H9c2细胞中miRNA-30a、miRNA-126、miRNA-204及自噬蛋白LC3B II/LC3B I表达水平。结果与对照组比较,随着药物浓度的升高及刺激天数的增加,细胞染色逐渐加深,在D-半乳糖浓度为8 g/L刺激9天时,细胞染色最明显;电镜结果显示,D-半乳糖诱导衰老心肌细胞自噬体减少;Western blot结果显示,衰老心肌细胞LC3B II/LC3B I水平降低;实时荧光定量PCR结果显示,诱导衰老组心肌细胞中,miRNA-30a、miRNA-126表达水平明显下降,miRNA-204表达水平明显上升。结论 D-半乳糖诱导的衰老心肌细胞自噬水平降低的过程中,存在miRNA-30a、miRNA-126表达水平的降低以及miRNA-204表达水平的增加,miRNA的差异表达可能是衰老心肌细胞自噬水平变化的重要机制。
- 朱光荣丁宁杨安宁杨松昊王楠侯苗苗谢琳蒋袁絮田珏姜怡邓杨晓玲
- 关键词：自噬MICRORNA
- 老年大鼠肾脏损伤中ASPP2蛋白调控与内质网应激的作用及相关性分析
- 2017年
- 目的探讨P53凋亡刺激蛋白(ASPP)家族成员ASPP2蛋白及内质网应激在老年大鼠肾脏损伤中的作用机制。方法以6月龄SD大鼠为成年组,18月龄SD大鼠为老年组,苏木精-伊红染色(HE)观察各组大鼠肾脏结构的改变;qRT-PCR检测内质网应激相关指标C/EPB同源蛋白(CHOP)、活化转录因子6(ATF6)、X盒结合蛋白-1(XBP-1)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的mRNA表达水平;Western blot法检测各组大鼠ASPP2蛋白的表达水平,并对ASPP2的表达水平与内质网应激相关指标CHOP、ATF6、XBP-1、GRP78的表达水平作相关性分析。结果与成年组SD大鼠相比,老年组SD大鼠肾脏结构明显改变,CHOP、ATF6、XBP-1、GRP78的mRNA表达水平及ASPP2蛋白表达水平显著增高,且ASPP2水平与CHOP和XBP-1呈正相关,ASPP2水平与ATF6呈负相关。结论在老年SD大鼠中,ASPP2调控内质网应激可能是引起肾脏损伤的重要机制之一。
- 杨松昊张辉杨安宁侯苗苗朱光荣王楠谢琳丁宁蒋袁絮田珏杨晓玲姜怡邓
- 关键词：内质网应激老年大鼠肾脏ASPP2
- 同型半胱氨酸致足细胞凋亡中FoxO1 DNA甲基化水平增高被引量：5
- 2021年
- 背景:同型半胱氨酸增多会引起肾损伤并导致足细胞凋亡,但是其具体机制还尚不清楚。目的:探讨叉头框转录因子O1(forkhead box O,FoxO1)及其DNA甲基化在同型半胱氨酸致足细胞凋亡中的作用。方法:体外培养小鼠肾脏足细胞(MPC-5),将其分为对照组(0μmol/L同型半胱氨酸)和同型半胱氨酸组(80μmol/L同型半胱氨酸)。干预细胞48 h后,采用免疫荧光技术检验足细胞凋亡相关蛋白Bax、caspase12和Bcl-2的表达情况;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测FoxO1 mRNA水平;采用Western blot检测FoxO1和DNMT1蛋白表达水平;采用巢式降落式特异性PCR(nMS-PCR)测验FoxO1的DNA甲基化水平。结果与结论:①与对照组相比,同型半胱氨酸组足细胞中Bax和caspase12表达明显增高,Bcl-2表达明显降低;②FoxO1的mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01);③与对照组相比,同型半胱氨酸组FoxO1 DNA甲基化水平明显升高(P<0.01),同型半胱氨酸组足细胞中DNMT1蛋白表达明显增高(P<0.01);④结果表明:FoxO1 DNA高甲基化在同型半胱氨酸致足细胞凋亡中作用显著,而DNMT1参与同型半胱氨酸诱导的足细胞凋亡过程。
- 刘昆谢琳谢琳丁宁曹军丁宁丁宁姜怡邓马胜超
- 关键词：肾小球同型半胱氨酸足细胞甲基化
