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王长丽

作品数：9 被引量：19H指数：2
供职机构：黑龙江大学生命科学学院更多>>
发文基金：国家自然科学基金黑龙江省自然科学基金广西壮族自治区自然科学基金更多>>
相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程理学更多>>

合作作者

文献类型

  • 9篇中文期刊文章

领域

  • 5篇生物学
  • 2篇轻工技术与工...
  • 1篇化学工程
  • 1篇农业科学
  • 1篇理学

主题

  • 6篇酿酒
  • 6篇酿酒酵母
  • 6篇酵母
  • 5篇基因
  • 4篇2,3-丁二...
  • 3篇生物信息
  • 3篇生物信息学
  • 3篇生物信息学分...
  • 3篇脱羧酶
  • 3篇酶基因
  • 3篇克隆
  • 3篇丙酮酸脱羧酶
  • 2篇单倍体
  • 2篇基因克隆
  • 2篇倍体
  • 2篇丙酮酸脱羧酶...
  • 1篇代谢工程
  • 1篇电转化
  • 1篇电转化法
  • 1篇丁二醇

机构

  • 9篇黑龙江大学
  • 1篇教育部
  • 1篇右江民族医学...

作者

  • 9篇葛菁萍
  • 9篇王长丽
  • 2篇黄守锋
  • 2篇孙雯
  • 1篇宋刚
  • 1篇平文祥
  • 1篇宾晓芸

传媒

  • 4篇中国农学通报
  • 2篇生物技术通讯
  • 1篇黑龙江大学自...
  • 1篇中国酿造
  • 1篇食品安全质量...

年份

  • 1篇2021
  • 2篇2020
  • 2篇2019
  • 2篇2018
  • 1篇2016
  • 1篇2015
共 9 条 记 录，以下是 1-9
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排序方式：
酿酒酵母W5核酸内切酶基因HO的克隆及生物信息学分析被引量：2
2019年
目的:以酿酒酵母W5为出发菌株,对其核酸内切酶基因HO进行克隆及生物信息学分析。方法:首先运用Primer 5.0软件,设计一对扩增HO基因序列的引物,并以酿酒酵母W5全基因组为模板进行PCR扩增,获得酿酒酵母W5核酸内切酶HO基因片段,利用生物信息学技术对该序列进行验证及分析。结果:测序显示HO基因长度为1760 bp,无碱基缺失,且该基因序列具有完整的开放读框。该基因编码的HO蛋白包含586个氨基酸残基,强酸性和强碱性氨基酸残基数量有明显差异;HO蛋白等电点为9.56,存在激酶位点,疏水性最大值为1.722,亚细胞定位预测其位于细胞核内,属于碱性胞内蛋白质,并构建了其空间结构模型。结论:对酿酒酵母W5核酸内切酶HO基因序列进行了克隆及生物信息学分析,所得数据可为酿酒酵母遗传背景研究提供一定的理论支持。
尹紫良王长丽王长丽
关键词：生物信息学分析核酸内切酶基因克隆
Cre-loxP重组酶技术敲除酿酒酵母丙酮酸脱羧酶编码基因pdc1和pdc5被引量：2
2019年
目的:分别构建含有酿酒酵母丙酮酸脱羧酶基因pdc1和pdc5同源序列loxP-kanMX-loxP的质粒,敲除丙酮酸脱羧酶基因。方法:以两端含40 bp pdc1或pdc5的同源序列为引物,以pUG6质粒DNA为模板,通过PCR扩增loxP-kanMX-loxP基因敲除片段,将其分别插入pMD18-T、pEASY-T3,构建表达载体pTWCL-PDC1与pTWCL-PDC5并测序,构建后的质粒利用醋酸锂转化法转化酿酒酵母H5,经筛选鉴定后进行摇瓶发酵试验。结果:分别含有1693、1672 bp目的片段pdc1-loxP-kanMX、pdc5-loxP-kanMX的质粒pTWCL-PDC1与pTWCL-PDC5构建成功,发酵试验显示重组酿酒酵母H5-01与H5-02较原始菌株的乙醇产量分别下降了14.53%与17.54%,证明pdc1或pdc5基因被敲除。结论:利用Cre-loxP重组酶技术分别敲除了酿酒酵母pdc1和pdc5基因,为后续在酿酒酵母中连续敲除pdc1和pdc5奠定了良好的技术基础。
刘磊王长丽王长丽
关键词：酿酒酵母丙酮酸脱羧酶2,3-丁二醇
酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)WBG3菌株发酵特性研究被引量：2
2018年
通过对酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)WBG3进行菌株发酵特性的研究,旨在获得一株性能良好的2,3-丁二醇(2,3-BD)生产菌株。本研究采用摇瓶发酵法,改变发酵过程中的底物浓度、溶氧量和酸碱浓度,紫外分光光度法和高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)检测2,3-BD合成途径中关键中间产物(丙酮酸、α-乙酰乳酸、乙偶姻)含量和发酵产物浓度。结果表明:S. cerevisiae WBG3菌株生长良好,在80 g/L葡萄糖、30℃和200 r/min条件下,丙酮酸、α-乙酰乳酸和乙偶姻含量分别达到0.10±0.03 g/L、3.38±0.06 g/L和0.17±0.02 g/L,乙醇转化率最低为0.44±0.02 g/g。添加乙酸后,甘油产量和乙醇转化率分别较对照组降低了9.5%和10%,2,3-BD的最终产量为0.36±0.02 g/L。因此,S. cerevisiae WBG3具备生产2,3-BD的潜力。
佟天奇裴芳艺王长丽孙健葛菁萍
关键词：酿酒酵母HPLC2,3-丁二醇乙酸发酵特性
利用酿酒酵母工程菌株生产2,3-丁二醇的研究进展被引量：11
2015年
2,3-丁二醇在食品、化妆品、医药和运输燃料等行业具有广泛的应用,因而提高2,3-丁二醇的产量一直备受研究者们关注。目前,研究的热点主要集中于利用微生物发酵可再生资源生产2,3-丁二醇以取代传统的化学合成法,并取得了较大的进展。常见的2,3-丁二醇产生菌有克雷伯氏菌属和芽孢杆菌属,它们能有效利用可再生资源高效生产2,3-丁二醇。然而这些细菌被认为是潜在的病原菌,难以应用于大规模生产。因此,研究者们又将目光转向了酿酒酵母。就安全性和工业化生产要求而言,酿酒酵母是生产2,3-丁二醇的理想菌种。本文对国内外的相关研究进行了总结,介绍了酿酒酵母产2,3-丁二醇的优势和不足,2,3-丁二醇合成代谢途径及其基因工程菌株构建的方向,以及通过代谢工程将酿酒酵母改造成能高效、高质、高量产生2,3-丁二醇的理想菌株的研究关键。
黄守锋裴芳艺王长丽平文祥葛菁萍
关键词：2,3-丁二醇基因工程酿酒酵母代谢工程
2,3-丁二醇脱氢酶基因(BudC)过表达菌株的构建和初步鉴定
2018年
旨在过表达Bud C进而上调2,3-丁二醇(2,3-Butanediol,2,3-BD)的合成,通过基因工程手段构建整合载体p R1SW-Bud C,经PCR和酶切双重验证后将其电转化至产酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)HD79。结果经卡那霉素筛选,获得一株菌株K.oxytoca HD79-01。以原始菌株为对照,摇瓶发酵检测2,3-BD含量和相关酶活,q RT-PCR检测Bud C表达差异,最终Bud C在HD79-01中转录水平的表达量为HD79的45.25倍(P<0.01)。摇瓶发酵显示2,3-BD的最高产量、转化率和生产强度分别提高了24.54%、10.97%、45.08%[分别为30.818±0.003 g/L、0.253±0.013 g/g、0.43±0.01 g/(L·h)],酶活提高了3.61倍(0.563±0.003 U/mg)。因此,2,3-丁二醇脱氢酶基因(Bud C)过表达菌株构建不仅成功的提高了2,3-BD的产量也为实现2,3-BD的工业化生产奠定基础。
王长丽孙雯宋刚葛菁萍
关键词：2,3-丁二醇荧光定量PCR电转化法
单倍体酿酒酵母的丙酮酸脱羧酶基因(pdc1)的敲除与鉴定被引量：1
2020年
为了抑制单倍体酿酒酵母H14的副产物乙醇的合成,使得2,3-丁二醇产量的提升。利用基因工程手段构建载体pWCL-pdc1,获得两端含40 bp pdc1的同源重组片段-loxP-kanMX-loxP。利用Cre/loxP技术获得pdc1缺失菌株S.cerevisiae H14-01(△pdc1)。并以野生型菌株S.cerevisiae H14为对照,进行摇瓶发酵试验。S.cerevisiae H14-01长势明显略低于原始菌株。在整个发酵期间,2,3-丁二醇的最高产量和转化率分别为0.373±0.016 g/L和0.005 g/g,分别较原始菌株提高了37.30%和4.66%,但原始菌株没有检测到乙偶姻和2,3-BD生成。另外S.cerevisiae H14-01的乙醇转化率降低了33.24%,但甘油产量提高了15.76%。说明了碳流流向乙醇被阻断之后,会增加2,3-丁二醇的产量,同时会使此部分碳流流向甘油。因此,并为进一步获得高产2,3-丁二醇的工程微生物群体奠定了基础。
康杰王长丽王长丽
关键词：酿酒酵母丙酮酸脱羧酶基因敲除
MAT-α型单倍体酿酒酵母Z5的制备及其发酵特性分析被引量：2
2020年
为制备一株具有明显代谢特征的MAT-α型单倍体酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)菌株,该研究采用随机孢子分离、MAT-聚合酶链式反应(MAT-PCR)、倍性杂交实验和连续传代培养等方法对二倍体S.cerevisiae W5(MATa/α)进行单倍体菌株的分离鉴定和制备,并从其代谢产物和代谢关键酶活性水平分析了该菌株的发酵性能。结果表明,在相同发酵条件下单倍体菌株Z5(MAT-α)的乙醇最大质量浓度为(37.66±1.34)g/L,较菌株W5的乙醇最大质量浓度(48.65±2.39)g/L下降了22.59%,但乙酸和乙偶姻的质量浓度却分别提高了57.89%和66.67%。虽然菌株Z5较W5的乙醇脱氢酶(ADH)酶活性明显下调了12.12%,但菌株ILV2和BDH1的酶活性却分别提高了25.0%和33.33%,获得了理想的单倍体菌株。
尹紫良王长丽王长丽
关键词：酿酒酵母关键酶活性
编码酿酒酵母丙酮酸脱羧酶(Pdc6)基因克隆及其生物信息学分析
2021年
旨在从生物信息学角度更好地研究酿酒酵母丙酮酸脱羧酶(Pdc6)的结构和功能,克隆酿酒酵母H5的丙酮酸脱羧酶基因pdc6。利用Primer 5.0软件设计1对20 bp引物,以H5基因组DNA为模板克隆获得pdc6,并利用生物信息学分析方法对其序列进行验证及分析。该序列长度为1692 bp,无碱基缺失,且该基因具有完整的开放阅读框,该基因编码的Pdc6包含563个氨基酸残基,该蛋白质中酸性氨基酸残基数量和碱性氨基酸残基数量大致相同;Pdc6理论等电点5.8,疏水性最大值为2.32,亚细胞定位预测其位于细胞外基质,属于酸性蛋白质,并预测了空间结构模型。本研究说明该蛋白结构与Pdc1和Pdc5结构类似,对酿酒酵母H5编码丙酮酸脱羧酶(Pdc6)基因序列克隆和生物信息学分析后,可为后续单基因敲除选取基因顺序的研究提供一定的理论基础。
王长丽王长丽叶广彬葛菁萍葛菁萍马毓坚黄霞宾晓芸
关键词：酿酒酵母生物信息学分析克隆丙酮酸脱羧酶基因开放阅读框
产酸克雷伯氏菌(K.oxytoca) α-乙酰乳酸脱羧酶基因(BudA)的克隆及生物信息学分析被引量：2
2016年
以Klebsiella oxytoca(K.oxytoca)HD79为出发菌株,根据α-乙酰乳酸脱羧酶基因序列相似的特点,利用Primer5.0设计一对引物,以K.oxytoca HD79为模板,PCR扩增,获得K.oxytoca HD79基因片段Bud A,此片段经测序显示长度为780 bp,无碱基缺失。利用生物信息学软件对该序列进行了同源性分析、氨基酸组成分析、疏水性分析、磷酸化位点预测、亚细胞定位分析及二、三级结构预测。结果表明,该片段为K.oxytoca HD79的α-乙酰乳酸脱羧酶基因序列。对该酶进行的生物信息学特异性分析为其构建产2,3-丁二醇的工程菌株提供一定的理论参考。
王长丽孙雯黄守锋葛菁萍
关键词：KLEBSIELLAΑ-乙酰乳酸脱羧酶生物信息学分析
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