徐钰
- 作品数：1 被引量：6H指数：1
- 供职机构：江南大学生物工程学院生物制药系更多>>
- 发文基金：江苏省卫生厅科研基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 人GCSF-白蛋白融合蛋白的构建及在毕赤酵母中的表达被引量：6
- 2008年
- 制备人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)与人血清白蛋白(HSA)的融合蛋白。从新鲜人外周血中分离单核细胞,给予大肠杆菌脂多糖刺激后,RT-PCR制备G-CSF cDNA,以其为模板扩增得到人G-CSF的编码区序列(525 bp)。重叠PCR拼接HSA-GCSF融合基因(2277 bp),序列测定正确,中间未加入任何连接肽。插入表达载体pPIC9K中α交配因子的开放阅读框内,构建分泌型表达重组质粒pPIC9K-HSA-GCSF。电击转化毕赤酵母菌KM71,G418筛选得到高拷贝转化子。甲醇诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE鉴定融合蛋白的相对分子质量约为84 k,Western blot分析融合蛋白为G-CSF与HSA的杂合分子,NFS-60细胞/MTT比色法测定融合蛋白具有G-CSF的生物学活性。结果:构建了可分泌表达HSA-GCSF融合蛋白的毕赤酵母工程菌,为进一步对其进行药学研究奠定了基础。
- 徐钰孙钧铭张莲芬窦文芳李洁朱威朱书峰金坚
- 关键词：人粒细胞集落刺激因子人血清白蛋白融合蛋白毕赤酵母
