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罗晓亮
作品数:
3
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供职机构:
中国农业科学院生物技术研究所
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发文基金:
国家自然科学基金
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相关领域:
生物学
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合作作者
初晓宇
中国农业科学院生物技术研究所
田健
中国农业科学院生物技术研究所
伍宁丰
中国农业科学院生物技术研究所
王平
中国农业科学院生物技术研究所
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组合突变提高甲基对硫磷水解酶MPH热稳定性的研究
2015年
来源于苍白杆菌Ochrobactrum sp.M231的甲基对硫磷水解酶MPH-Och具有优良的催化水解甲基对硫磷农药的能力,针对其热稳定性较差的缺点,通过组合3种提高蛋白热稳定性的突变策略,最终获得热稳定性改良的突变酶MPHM7,其T50达到65℃,在之前研究热稳定性提高的四点突变酶(S274Q/T183E/K197L/S192M)的基础上又提高了5℃。同时,该突变酶的催化效率也获得了一定的提高,其kcat/Km值是四点突变酶的3.8倍。热稳定性改良突变酶的获得证实了这些提高热稳定性的方法是有效的,并且其作用具有加合性,这为分子设计改良酶蛋白热稳定性提供了新的研究思路。
罗晓亮
顾杏露
田健
初晓宇
伍宁丰
关键词:
甲基对硫磷水解酶
热稳定性
一种新的定向进化技术SNDS及所获得耐热高效甲基对硫磷水解杂合酶
本发明公开了一种新的定向进化技术SNDS及所获得耐热高效甲基对硫磷水解杂合酶。本发明以两个亲本酶基因的互补单链DNA为出发序列分别进行酶切消化,消化后产物不经回收直接混合进行无引物PCR、构建突变体库并筛选有益突变体。本...
初晓宇
伍宁丰
王平
罗晓亮
田健
一种新的定向进化技术SNDS及所获得耐热高效甲基对硫磷水解杂合酶
本发明公开了一种新的定向进化技术SNDS及所获得耐热高效甲基对硫磷水解杂合酶。本发明以两个亲本酶基因的互补单链DNA为出发序列分别进行酶切消化,消化后产物不经回收直接混合进行无引物PCR、构建突变体库并筛选有益突变体。本...
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