张伟强
- 作品数：5 被引量：4H指数：1
- 供职机构：河南农业大学更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划转基因生物新品种培育专项国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学轻工技术与工程更多>>
- 新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶蛋白的可溶性超表达与免疫活性检测被引量：1
- 2016年
- 目的检测新城疫病毒(NDV)血凝素-神经氨酸酶(HN)蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达量,及其免疫活性。方法采用融合表达的方法将HN蛋白基因分别与Grifin、谷胱甘肽S移酶(GST)、麦芽糖结合蛋白(MBP)、Nus A、小泛素样相关修饰物(SUMO)、硫氧还蛋白(thioredoxin)、蛋白G(protein G)、γ-晶状体蛋白(γ-crystallin)、Ars C、Ppi B 10种融合标签基因采用柔性接头进行连接,构建10个重组表达质粒,经酶切及测序鉴定正确后,将这10个重组质粒分别转入大肠杆菌BL21中,用不同条件进行诱导表达,经SDS-PAGE检测并选出最佳诱导蛋白表达的条件,筛选出能够显著促进HN蛋白可溶性表达的标签,并用Western blotting对所表达蛋白的含量进行定性分析,同时纯化的重组蛋白用Western blotting和间接ELISA验证其免疫原性。结果成功构建了10个不同融合标签的HN融合蛋白表达载体,筛选出融合标签麦芽糖结合蛋白(MBP)能够显著促进HN蛋白可溶性表达,且Western blotting显示所表达重组蛋白的表达量是最多的。经Western blotting和间接ELISA验证重组HN蛋白具有良好的免疫原性。结论融合标签MBP可以显著提高HN蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达量。
- 张伟强郭豫杰李赛赛王月影陈丽颖杨国宇
- 关键词：新城疫病毒融合标签柔性接头免疫印迹法间接ELISA
- 双重PCR检测生鲜猪肉中大肠杆菌O157∶H7和沙门菌方法的建立与应用被引量：2
- 2015年
- 目的建立生鲜猪肉中大肠杆菌和沙门菌的双重PCR检测方法,并初步调查生鲜猪肉中大肠杆菌和沙门菌的污染情况。方法以大肠杆菌O157∶H7 rfb E基因和沙门菌inv A基因为靶基因设计引物。通过对单个基因PCR和多重基因PCR扩增进行特异性、敏感性试验以及优化反应体系,建立快速检测大肠杆菌和沙门菌的双重PCR法。在郑州市不同地区的综合性超市、冷鲜肉专卖店和农贸市场随机抽检144份生鲜猪肉样品,分别进行了PCR检测和常规微生物学检验。结果建立的双重PCR方法特异性好,抗干扰能力强,灵敏度可达到10 pg/μl。在144份样品中检测出大肠杆菌的样品数为10份,检出率为6.94%;检出沙门菌的样品数为13份,检出率为9.03%;大肠杆菌和沙门菌同时检出的有2份,占总样品的1.39%。结论初步建立了同步、简便、快速、灵敏地检测生鲜猪肉中大肠杆菌、沙门菌的双重PCR方法;生鲜猪肉中存在致病菌的污染问题,将威胁到食品安全和人体健康,不容忽视。
- 张秀方武二丽刘肖张伟强胡慧邵刘云王亚宾陈丽颖
- 关键词：沙门菌双重PCR食源性致病菌食品安全
- 靶向akirin2基因shRNA真核表达载体的构建及其干扰效率的测定被引量：1
- 2016年
- 为了抑制C2C12细胞中akirin2基因的表达,试验采用siRNA表达载体法构建了靶向akirin2基因的RNA干扰(RNAi)真核表达载体。首先针对akirin2基因设计并合成了相应的干扰序列,退火后将其与RNAi表达载体psiRNA-h7SKGFPzeo进行连接,构建成干扰载体akirin2-pshRNA0、akirin2-pshRNA1。将构建好的载体通过Turbofect转染试剂转染小鼠成肌细胞C2C12,通过荧光定量PCR检测其干扰效率,经酶切和测序鉴定所构建的akirin2基因RNA干扰载体与设计序列完全相符。结果表明:重组干扰载体akirin2-pshRNA0和akirin2-pshRNA1构建成功。将重组RNAi载体转染C2C12细胞,与正常对照组相比,转染akirin2-pshRNA1组的akirin2基因mRNA相对表达量显著降低,表达量下调了60.62%(P<0.05)。说明试验构建的靶向akirin2基因的RNAi载体akirin2-pshRNA1可以有效地抑制C2C12细胞中akirin2基因的表达。
- 郭豫杰张伟强李赛赛王月影鲁维飞高会贞李宏基杨国宇
- 关键词：RNA干扰(RNAI)SHRNA
- 检测生鲜猪肉中大肠杆菌O157∶H7和沙门氏菌的双重PCR方法建立与应用
- 引言几年来,食源性致病菌是食源性疾病的首要因素。其多数爆发案例是通过致病性细菌污染食品而引起的。其中,大肠杆菌(Escherichia coli)和沙门氏菌(Salmonella)是两种重要的致病菌。猪肉作为我国消费量最...
- 张秀方武二丽刘肖张伟强胡慧邵刘云王亚宾陈丽颖
- 检测猪源粪肠球菌抗体的间接ELISA方法建立
- 根据GenBank已发表粪肠球菌Ace基因(Genbank NO.AF260879)的核苷酸序列设计l对引物,通过PCR扩增ace基因保守序列A片段部分序列,将其克隆到pET-32a(+)裁体中,构建了原核表达载j-pE...
- 陈丽颖张祥刘肖张秀方武二丽张伟强胡慧王亚宾
- 关键词：粪肠球菌原核表达ELISA
