李月华
- 作品数：3 被引量：32H指数：2
- 供职机构：河北省食品检验研究院更多>>
- 发文基金：河北省科技计划项目国家科技支撑计划国家公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程更多>>
- 酸乳中葡糖杆菌的LAMP检测方法研究被引量：2
- 2016年
- 为了给酸乳生产企业提供一种快捷、简便、灵敏的葡糖杆菌的LAMP检测方法,本研究选取葡糖杆菌属的模式菌株氧化葡糖杆菌为代表菌株。根据Gen Bank中公布的氧化葡糖杆菌的16S r RNA(X73820)基因的强特异性序列设计四条引物,优化引物、Mg2+、温度等反应条件,建立了环介导等温扩增技术检测酸乳中葡糖杆菌的方法。对该方法的特异性和灵敏度进行评价,并与PCR方法的灵敏度进行比较。结果显示,该组引物的特异性强,对反应产物进行酶切分析,酶切产物的片段与理论值相符;该LAMP方法检测纯菌的灵敏度为7.5×101 CFU/m L,是PCR检测方法的10倍;用纯菌液对酸奶进行人工污染,提取模拟变质酸奶的DNA进行LAMP扩增,其最低检出限为7.5×102 CFU/m L。综上所述,本研究建立的LAMP检测方法特异性强、灵敏度高,耗时短,实现了对葡糖杆菌的快速检测,在食品检测行业具有很好的应用前景。
- 李月华张翠侠王爽章晶晶杨岚周巍张岩
- 关键词：葡糖杆菌属环介导等温扩增酸乳
- 葡糖杆菌的SYBR Green Ι荧光定量PCR方法的建立被引量：4
- 2015年
- 基于Gen Bank提供的葡糖杆菌的16S r RNA保守序列设计PCR引物,利用SYBR GreenΙ荧光定量PCR技术建立一种快速灵敏检测酸乳制品中葡糖杆菌的方法。用本研究建立的SYBR GreenΙ荧光PCR方法对3株葡糖杆菌以及18株非葡糖杆菌进行特异性检测,并用凝胶电泳验证其可靠性,结果显示,本研究所设计的引物具有良好的特异性。对扩增结束后的PCR产物进行溶解曲线分析,证实此引物的扩增产物存在引物二聚体,但可通过溶解曲线的出峰时间排除非特异性扩增。利用SYBR GreenΙ荧光定量PCR检测葡糖杆菌建立的标准曲线相关性良好,R2=0.9968,对葡糖杆菌进行灵敏度检测,最低检出限可达75 CFU/m L。利用该方法可成功检测出5份人工污染样品中的葡糖杆菌,研究表明,该方法灵敏度高、操作简便快捷,适用于酸乳制品的定量检测。
- 李月华周巍杨岚章晶晶王爽刘涛张岩张伟
- 关键词：SYBR实时定量PCR酸乳
- 微滴式数字PCR技术定量检测发酵乳中金黄色葡萄球菌被引量：26
- 2017年
- 基于微滴式数字聚合酶链式反应(droplet digital polymerase chain reaction,dd PCR)技术,建立发酵乳中金黄色葡萄球菌定量检测方法。以金黄色葡萄球菌nuc基因为目的片段设计特异性的引物和探针,优化反应体系,通过活菌提取和ddPCR方法对靶标基因的检测特异性和灵敏度进行实验,并对定量结果进行分析。本研究建立了发酵乳中ddPCR技术定量检测金黄色葡萄球菌的方法,检测特异性良好,检测灵敏度为3.3×10~1 CFU/g,定量的偏差率为+10.18%,证明了ddPCR用于绝对定量检测的可行性,为其他食品污染菌和致病菌标准化控制体系提供有益的示范作用。
- 周巍李月华孙勇李永波张涛刘琼张岩王丽霞
- 关键词：发酵乳金黄色葡萄球菌
