高辉
- 作品数：3 被引量：6H指数：1
- 供职机构：暨南大学药学院基因组药物研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 红树林植物杯萼海桑法呢基焦磷酸合酶的基因克隆及序列分析被引量：4
- 2013年
- 目的对杯萼海桑Sonneratia alba萜类化合物生物合成途径的关键酶法呢基焦磷酸合成酶(Farnesyl pyrophosphate synthase,FPS)基因的编码cDNA序列进行克隆,为研究杯萼海桑萜类化合物生物合成与基因调控奠定基础。方法结合杯萼海桑根的转录组注释,根据编码区序列设计引物,通过PCR方法克隆杯萼海桑FPS(SaFPS)基因的编码区cDNA。结果PCR扩增了一个长1 029 bp的基因片段,该片段编码由342个氨基酸组成的SaFPS。同源性比对结果显示基因编码蛋白与甘草的FPS具有氨基酸一致性达86%。其具有异戊烯基转移酶的2个典型保守功能域。进化树分析结果显示,与甘草Glycyrrhiza uralensis、苜蓿Medicago truncatula、羽扇豆Lupinus albu具有较近的亲缘关系。实时荧光定量PCR结果显示SaFPS基因在花中表达量较高,果实、茎、叶中表达量相对较低。结论首次从红树林植物杯萼海桑中克隆FPS基因获得其编码区序列,SaFPS基因具有组织表达特异性。本研究为分析基因表达特性及其在生物合成中的功能奠定基础。
- 王峰吴秋红高辉张自德李秀英张光
- 关键词：基因克隆PCR
- 阳春砂二酮辅酶A合成酶的基因克隆及序列分析被引量：1
- 2013年
- 目的对阳春砂姜黄素生物合成途径的关键酶二酮辅酶A合成酶（diketideCoAsynthase，DCS）基因的编码cDNA序列进行克隆，为研究阳春砂姜黄素生物合成与基因调控奠定基础。方法结合阳春砂的转录组注释，根据编码区序列设计引物，通过PCR方法克隆阳春砂DCS基因的编码区cDNA。结果PCR扩增了一个长1170bp的基因片段，该片段编码由389个氨基酸组成的DCS。同源性比对结果显示基因编码蛋白与姜黄的DCS具有氨基酸一致性达96％，与水仙等植物的查耳酮合酶（chalconesynthase，CHS）氨基酸一致性达66％-69％。进化树分析结果显示，与姜黄CurcumaeLongae具有较近的亲缘关系。结论首次从阳春砂中克隆DCS基因获得其编码区序列，为分析基因表达特性及其在姜黄素生物合成中的功能奠定基础。
- 杨恩泽高辉吴秋红王峰
- 关键词：阳春砂姜黄素
- 人锰超氧化物歧化酶hSOD2-Q46K突变体的表达与功能分析被引量：1
- 2017年
- 目的:构建人锰超氧化物歧化酶(hSOD2)-Q46K突变体,简化获得hSOD2突变体的步骤,探讨hSOD2结构与功能的关系.方法:通过聚合酶链式反应(PCR)体外定点突变技术将hSOD2的46位Q氨基酸突变为K氨基酸,经测序鉴定正确后将p ET15b-hSOD2-Q46K突变体重组质粒转化Rosetta-gami大肠杆菌,通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白表达.利用SWISS-MODEL Workspace对hSOD2-Q46K突变体进行同源建模,利用Swiss-Pdb-Viewer软件对建模结果进行分析.利用Ni-NTA亲和层析纯化目的蛋白后用超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒检测目的蛋白的SOD活力.利用浓度为0.1 mmol/L百草枯(PQ)压力下生长情况测定表达hSOD2-Q46K和hSOD2蛋白的Rosetta-gami大肠杆菌的抗氧化能力.结果:测序结果表明46位密码子已由CAG突变为AAG.经过IPTG诱导后野生型和突变体均能表达出大小约为25 k Da的蛋白.SOD活性检测表明hSOD2-Q46K突变体的活力为899 U/mg,比野生型蛋白活性下降了65.4%.三维结构分析显示,突变点周围氨基酸间氢键被部分打破.结论:成功构建hSOD2-Q46K突变体并成功得到了纯化的突变体蛋白,hSOD2-Q46K的SOD活力比野生型降低了65.4%,且百草枯压力下表达hSOD2-Q46K蛋白的大肠杆菌A600达到0.84,而野生型蛋白的大肠杆菌A600达到1.14.这可能是因为突变点与周围氨基酸间氢键打破,突变点周围失去了原来的稳定结构,底物通道入口处氨基酸排列疏散,影响电子在氨基酸间的传递,影响静电导向机制,从而阻碍氧自由基在底物通道的通行,使hSOD2的催化活力下降.
- 谢珺牛得伟李艳冰高可高辉李帅广沈良华王峰
- 关键词：锰超氧化物歧化酶超氧化物歧化酶活性突变体
