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冯洁: 作品数：13 被引量：30H指数：4; 供职机构：扬州大学兽医学院更多>>; 发文基金：上海市“科技创新行动计划”国家科技重大专项上海市科学技术发展基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>

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脑部特异表达SV40Tag转基因动物模型的建立被引量：4: 2007年; 将猿猴病毒抗原蛋白(SV40Tag)片段克隆进脑部特异表达载体pMM279中,通过显微注射法制作转基因小鼠。采用PCR和Southern blotting检测目的基因整合,并通过RT-PCR检测目的基因的表达。结果表明:共出生29只仔鼠,经PCR检测出3只阳性,Southern blotting检测出2只阳性。RT-PCR检测到SV40Tag仅在前脑部皮层和海马表达。成功获得的脑部特异表达SV40Tag转基因小鼠模型,为SV40Tag的致病机制及脑肿瘤的治疗等研究提供工具。; 冯洁孙强邢华高诚李厚达; 关键词：脑肿瘤转基因

啮齿柠檬酸杆菌SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立被引量：2: 2017年; 为建立快速检测啮齿柠檬酸杆菌(C.rodentium)esp B基因的方法,本研究根据Gen Bank中登录的C.rodentium esp B基因序列设计1对特异性引物,建立了C.rodentium SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法。结果显示,在102拷贝/μL^108拷贝/μL浓度范围内标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系。该方法仅对C.rodentium进行特异性扩增,而对牛棒状杆菌、鼠伤寒沙门菌、嗜肺巴斯德杆菌、支气管鲍特杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、肺炎克雷伯杆菌扩增结果均为阴性,具有良好的特异性。其检测灵敏度可达24拷贝/μL。组内和组间试验变异系数均小于1%,重复性良好。临床样品初步应用结果显示,荧光定量PCR阳性检出率为56.36%(31/55),常规PCR阳性检出率为30.91%(17/55),二者符合率为74.55%。本研究建立的C.rodentium SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法为实验动物C.rodentium的检测和流行病学调查提供了技术支撑。; 冯洁谢建云张泉魏晓锋胡建华高诚; 关键词：SYBR 荧光定量PCR

肝螺杆菌LAMP快速检测方法的建立及初步应用被引量：4: 2019年; 根据肝螺杆菌fla B基因保守区域设计一组特异性引物,经过条件优化、特异性和敏感性分析,成功建立了肝螺杆菌LAMP快速检测方法。结果显示,建立的LAMP扩增方法仅能检测出肝螺杆菌,其他常见细菌未见特异性扩增。检出肝螺杆菌最低模板量为86.9fg/L,是普通PCR所需模板量的1/10。本研究建立的LAMP快速检测方法具备操作简单、特异性好、灵敏度高的优点,结果易于观察,对仪器设备要求低,适宜推广应用。; 冯洁张泉张泉谢建云胡建华高诚高崧; 关键词：肝螺杆菌环介导等温扩增

四种消毒剂对小鼠肝炎病毒MHV-A59的杀灭效果被引量：4: 2007年; 目的研究过氧乙酸等4种常规消毒剂对小鼠肝炎病毒MHV-A59的杀灭效果。方法按照2002版《消毒技术规范》中规定的试验方法进行中和剂鉴定试验以及病毒灭活试验。结果与病毒作用5 min和10 min后,3%的过氧乙酸、250 mg/L的碘伏、含有效氯25 mg/L的复方二氯异氰尿酸钠对MHV-A59的杀灭对数值均≥4,具备杀灭作用,而新洁尔灭的杀灭对数值则<4,杀灭能力较低,对该病毒的灭活效果很难达到规范中的要求。结论过氧乙酸、碘伏以及复方二氯异氰尿酸钠对小鼠肝炎病毒的杀灭效果确实,适用于对小鼠肝炎病毒的消毒。; 冯洁王胜昌胡建华高骏孙凤萍吴祖立; 关键词：肝炎病毒消毒剂病毒灭活

实验大鼠和小鼠多种细菌PCR检测与分析被引量：5: 2018年; 目的调查上海市实验动物生产设施大鼠、小鼠细菌携带状况。方法比较国内外实验动物细菌监测方案,选取螺杆菌、啮齿柠檬酸杆菌、牛棒状杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和肺炎克雷伯杆菌作为检测项目,分别于2014年和2016年收集样品共计848份,采用PCR方法对上述6种病原体进行检测。结果 SPF级设施均无金黄色葡萄球菌污染,清洁级设施2014年无肺炎克雷伯杆菌污染,其它病原体在不同级别设施内均有不同程度的污染,所有清洁级设施均存在螺杆菌和牛棒状杆菌污染。螺杆菌、啮齿柠檬酸杆菌和牛棒状杆菌在不同级别动物上均检出阳性。螺杆菌、绿脓杆菌阳性率呈下降趋势,而啮齿柠檬酸杆菌、牛棒状杆菌、肺炎克雷伯杆菌阳性率则呈上升趋势。结论本研究全面、系统地分析了上海地区实验大鼠、小鼠细菌携带状况,为提高实验动物质量和饲养管理水平起促进作用,为我国实验动物国家标准的修订和完善提供依据和参考。; 冯洁谢建云魏晓锋冯丽萍张泉张泉; 关键词：小鼠细菌 PCR

东方田鼠三个脂肪肝相关基因的克隆及分析被引量：1: 2010年; 目的克隆CYP2E1、CYP2D5、ECHS1三个与非酒精性脂肪肝可能相关基因的cDNA全长基因,为进一步研究非酒精性脂肪肝的发病机制提供依据。方法利用SMART技术构建东方田鼠肝脏cDNA质粒文库,通过PCR方法筛选文库,获得目的菌落,用pBluescript Ⅱ SK通用引物M13R测序,获得基因全长序列,并进行序列分析比较。结果筛选了CYP2E1、CYP2D5、ECHS1三个基因,并获得了它们的全长cDNA序列:CYP2E1基因cDNA全长为1685bp,有1482 bp的完整开放阅读框,编码494个氨基酸;CYP2D5基因cDNA全长为1690 bp,有1514 bp的完整开放阅读框,编码504个氨基酸;ECHS1基因cDNA全长为1013 bp,有873 bp的完整开放阅读框,编码290个氨基酸。这三个基因的核酸序列及其推测的氨基酸序列与人、大小鼠序列高度同源。结论获得了东方田鼠CYP2E1、CYP2D5、ECHS1三个基因全长cDNA序列,并已在Genbank中登录(GQ507485、GQ507486、GQ845171),为东方田鼠非酒精性脂肪肝模型的研究奠定了基础。; 杨玉琴冯洁王学斌谢建云高诚胡建华; 关键词：东方田鼠 CDNA序列非酒精性脂肪肝

共刺激分子配体B7-H1基因真核表达载体和转基因细胞的构建被引量：2: 2005年; 以PHA刺激的小鼠外周血单核细胞中抽提的总RNA为模板,通过RT-PCR技术,扩增出B 7-H 1基因。按常规方法克隆进pEF 6V 5H is A载体,重组质粒经鉴定后采用脂质体法转染CHO细胞,48 h后进行间接免疫荧光试验,72 h后用B lastic id in进行筛选,挑选出能稳定表达B 7-H 1的细胞株。结果表明:成功地克隆小鼠B 7-H 1基因并构建了用于表达B 7-H 1基因的真核表达载体,经间接免疫荧光试验证明,该基因在CHO细胞中得到表达。经W estern-b lotting检测表明筛选出的转基因细胞稳定表达了B 7-H 1基因。; 冯洁王光凤孙强邢华李厚达; 关键词：肿瘤细胞共刺激分子真核表达

上海地区实验用兔线粒体DNA-RFLP分析被引量：4: 2007年; 提取3个品种实验用兔肝组织中的线粒体DNA,并用ApaI等21种限制性内切酶进行消化。分析上海地区实验用兔mtDNA的多态性。酶切产物经琼脂糖凝胶电泳检测,共检出8种不同的限制性单倍型,少数个体出现的差异,可能来源于几个位点发生偶然突变,但不同兔群的限制性无规律性。结果表明上海地区实验用兔群体mtDNA的遗传多样性贫乏,遗传结构单一,提示所研究的兔种可能有共同祖先,或人工饲养繁殖出现血缘杂交现象。; 冯洁谢建云胡建华高诚; 关键词：线粒体DNA

东方田鼠肝脏cDNA文库的构建及部分克隆序列分析: 2009年; The plasmid cDNA library from the liver of Microtus fortis was constructed by using SMART technology. The titers of this cDNA library were 1076 pfu /μL,the recombination rate was about 94%,the library capacity was 1.08×106. 22 cDNAs chosen at random were sequenced. After BLAST analysis of these sequences,it was found that these cDNAs showed more than 75% similarity to the functional known genes of mice,rats and humans in the Genbank. The cDNA library was very important to the research of fatty liver-related gene screening and clones. These provided a base for further study on the molecular biology,fatty liver model development and pathogenesis research of Microtus fortis.; 冯洁谢建云孙强杨玉琴胡建华高诚; 关键词：CDNA文库东方田鼠肝脏

大、小鼠绿脓杆菌脉冲场凝胶电泳分型研究: 2016年; 目的对近年来上海及江苏地区部分单位大、小鼠绿脓杆菌进行分离鉴定，采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）分子分型技术作基因型分析，以了解绿脓杆菌流行菌株与宿主之间的相关性。方法无菌采集上海及江苏地区部分单位实验大、小鼠回盲部内容物进行绿脓杆菌分离培养，采用形态学观察、生化试验对分离菌进行鉴定。提取绿脓杆菌分离株基因组DNA，经XbaI酶切后进行脉冲场凝胶电泳。结果共分离到67株绿脓杆菌，PFGE图谱可分为39种不同带型，14个基因簇（A—N），优势簇分别为I、H、B和G，分别占17．9％（12／67）、14．9％（10／67）、13．4％（9／67）和11．9％（8／67）。同一来源地的分离株大多呈现不同的基因簇。结论67株细菌具有很大的基因多态性，呈散在分布，未见明显的流行特征。; 冯洁谢建云魏晓锋胡建华高诚; 关键词：绿脓杆菌分子分型

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