吴志敏
- 作品数：10 被引量：35H指数：5
- 供职机构：江西农业大学动物科学技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- GM-CSF与生长抑素融合表达基因疫苗的构建及其免疫效果的研究
- 吴志敏
- 关键词：生长抑素粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子免疫效果
- 以减毒沙门氏菌为载体的GM-CSF与生长抑素DNA疫苗的安全性和稳定性被引量：2
- 2007年
- 将含GM-CSF基因与生长抑素（SS）的融合真核表达质粒pGM—CSF／SS转入减毒沙门氏菌株CS022。选择40只22～24g的雌性小鼠，随机分成4组，其中1组为对照组，口服生理盐水；2～4组为试验组，分别用上述重组减毒沙门氏菌株CS022以10^8、10^9、10^10CFU的剂量口服免疫小鼠，2周后以相同的剂量加强免疫，研究pGM-CSF／SS真核表达质粒在体内的稳定性和减毒沙门氏菌对小鼠的安全性。同时通过体外传代，研究该真核表达质粒在体外的稳定性。结果表明：10^8、10^9CFU剂量口服小鼠，成活率达100％，而10^10CFU剂量口服小鼠成活率降低至90％，腹泻率达50％。体外传10代和口服免疫4周后从小鼠肝脏和脾脏分离的减毒菌用琼脂糖凝胶电泳和酶切鉴定法证实，减毒菌中的重组质粒在体外和侵入小鼠体内过程中具有较好的稳定性。质粒DNA在传10代以后，虽然每代的质粒DNA含量有些变化，但总体趋势基本是恒定的，第10代时，质粒DNA的含量与第1代的含量差异不显著。上述结果提示，利用该减毒沙门菌作为载体传递pGM—CSF／SSDNA疫苗免疫小鼠具有相对安全性和稳定性，为进一步有效激发机体的免疫应答提供了前提。
- 舒邓群陈荣达茆达干吴志敏杨利国
- 关键词：减毒沙门氏菌CSF安全性稳定性
- GM-CSF与SS融合表达质粒对小鼠淋巴细胞增殖及GH和IGF-1分泌的影响被引量：6
- 2008年
- 以小白鼠为试验对象,分别肌肉注射生理盐水及pcS/2SS、pGM-CSF/SS、pGM-CSF+pcS/2SS质粒,每只50μg,免疫后第3周以相同剂量加强免疫1次,测定不同质粒对小鼠淋巴细胞增殖反应及血浆生长激素(GH)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)分泌水平,探讨GM-CSF对生长抑素DNA疫苗的免疫增强作用。结果表明:GM-CSF可增强小鼠脾脏淋巴细胞的增殖反应,以pGM-CSF+pcS/2SS组的增殖能力最强,显著高于pcS/2SS组和生理盐水组;同时注射2种表达质粒(pGM-CSF+pcS/2SS)的GH分泌水平和融合表达质粒(pGM-CSF/SS)的IGF-1分泌水平明显高于生理盐水组和pcS/2SS免疫组。这证明GM-CSF对生长抑素DNA疫苗有一定的免疫增强作用,可促进生长抑素DNA疫苗的免疫反应,提高血浆GH和IGF-1的分泌水平。
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- 关键词：小鼠GM-CSF淋巴细胞增殖胰岛素样生长因子-1
- 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子与生长抑素融合表达质粒对断奶仔猪生长及相关激素的影响被引量：9
- 2007年
- 选择40头断奶的长大二元杂交仔猪,随机分为4组,每组10头,公母各半,其中Ⅰ组为对照组,Ⅱ-Ⅳ组分别口服以减毒沙门氏菌为载体的DNA疫苗pcS/2SS、pGM-CSF/SS和pGM-CSF＋pcS/2SS,分析这些DNA疫苗对断奶仔猪的生产性能和相关激素分泌的影响。结果显示,与Ⅱ组和Ⅳ组相比,Ⅲ组平均日增重分别提高了8.37%（P〉0.05）和17.2%（P〈0.05）,饲料利用率分别提高了14.8%和6.7%。Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组血浆中GH的含量有升高的趋势。Ⅱ组IGF-Ⅰ的含量一直处于较高的水平,Ⅲ和Ⅳ组在第2周后处于较低的分泌水平,Ⅲ组IGF-Ⅰ的峰值高于其他组。Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ组T3的含量呈下降的趋势,而Ⅲ组呈上升趋势,免疫后第8周,Ⅲ组的T3分泌水平显著高于Ⅱ和Ⅳ组（P〈0.05）,而与对照组差异不显著。Ⅰ组T4的含量不断降低,而Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组有不断升高的趋势,Ⅱ组和Ⅲ组T4的分泌一直保持在较高的水平。上述结果表明,粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）对SS DNA疫苗有一定的免疫增强作用,pGM-CSF/SS的免疫效果要优于pGM-CSF＋pcS/2SS共免疫。
- 舒邓群茆达干陈荣达吴志敏杨利国
- 关键词：仔猪
- 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子与生长抑素融合表达基因疫苗的免疫对断奶仔猪某些代谢物浓度的影响被引量：4
- 2008年
- 选择40头断奶的长×大二元杂交仔猪，随机分为4组，每组10头，公母各半。其中1组为对照组。2～4组分别口服以减毒沙门氏菌为载体的基因疫苗pcS／2SS、pGM—CSF／SS和pCM—CSF＋pcS／2SS。研究这些基因疫苗对断奶仔猪血浆代谢物浓度的影响。结果显示。对照组和pcS／2SS基因疫苗免疫组仔猪血浆葡萄糖浓度没有明显变化，pGM—CSF＋pcS／2SS免疫组呈现下降的趋势。融合表达质粒pGM—CSF／SS的免疫则可提高血浆葡萄糖的浓度；血浆游离脂肪酸的分泌水平各免疫组间无明显差异；血浆尿素氮的浓度pGM—CSF／SS免疫组有上升的趋势。在第2周、4周和6周血浆尿素氮的浓度高于其它3个组（P〉0．05）。pcS／2SS免疫组则随免疫时间的延长而逐渐下降。对照组和pGM—CSF＋pcS／2SS免疫组一直保持比较平稳的态势。结果表明。GM—CSF提高了SS基因疫苗的免疫效果。pGM—CSF／SS要优于pGM—CSF＋pcS／2SS共同免疫。
- 舒邓群陈荣达茆达干吴志敏杨利国
- 关键词：粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子生长抑素代谢物
- 猪粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因的克隆和序列分析及其基因表达被引量：12
- 2007年
- 采取三元杂交猪的外周血,提取单核细胞总RNA,采用RT-PCR克隆猪粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)cDNA(GenBank登录号为DQ108393)。以pcDNA3.1(-)为质粒载体,构建猪GM-CSF基因真核表达质粒pGM-CSF,对克隆片段进行测序,并进行不同物种间同源性的比较。将重组质粒转染COS-7细胞,Western blotting鉴定表达蛋白的特异性。序列分析表明,GM-CSF的cDNA开放阅读框为435 bp,编码144个氨基酸和大部分信号肽,与用作PCR引物设计的参考序列比较,其核苷酸的同源性为97.5%,氨基酸的同源性为95.1%,同绵羊、人、牛、小鼠和犬的GM-CSF序列比较,其核苷酸的同源性分别为86.2%、80.5%、81.7%、69.7%和81.8%,氨基酸的同源性分别为78.5%、71.3%、70.3%、55.9%和71.5%。Western blotting证实目的基因可以在真核细胞中特异性的表达GM-CSF蛋白。以上结果表明,猪的GM-CSF基因被成功克隆,它存在着种属特异性。这为进一步研究该基因的生物学作用特别是利用GM-CSF增强DNA疫苗的免疫效果奠定了基础。
- 舒邓群茆达干曹少先吴志敏陈荣达杨利国
- 关键词：粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因克隆基因表达
- 以减毒沙门氏菌为载体的GM-CSF与生长抑素融合表达质粒对小鼠淋巴细胞增殖和GH及IGF-Ⅰ分泌的影响被引量：7
- 2006年
- 40只22日龄小鼠，雌雄各半，平均分为4组。其中第1组为对照组，第2～4组分别经口给予以减毒沙门氏菌为载体的pcS／2SS、pGM—CSF／SS和pGM—CSF＋pcS／2SS DNA疫苗，剂量10^9CFU／只，2周后以相同剂量加强免疫一次，分析不同DNA疫苗对小鼠淋巴细胞增殖和GH、IGF-Ⅰ分泌的影响。结果表明GM—CSF可增强免疫鼠脾淋巴细胞对特异性抗原刺激的增殖能力，以pGM—CSF／SS免疫组最强；DNA疫苗免疫组的GH和IGF-Ⅰ分泌水平都高于对照组。这些结果证明，GM—CSF对生长抑素DNA疫苗有一定的免疫增强作用，以减毒沙门氏菌为载体介导DNA疫苗通过口服途径免疫动物是一种较好的免疫方式。pGM—CSF／SS的免疫效果优于pGM—CSF＋pcS／2SS。
- 舒邓群茆达干吴志敏程宝杨利国
- 关键词：生长抑素减毒沙门氏菌淋巴细胞增殖GH
- 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因佐剂对DNA疫苗的免疫调节作用被引量：4
- 2007年
- DNA疫苗具有制备简单,不需要蛋白质的合成、提取与纯化,免疫效果维持时间长,稳定性好,易保存等特点。但由于种与种之间免疫遗传差异,DNA疫苗往往对大动物特别是对哺乳动物的免疫效果不理想。细胞因子常作为基因佐剂用以增强DNA疫苗的免疫原性。粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)是一个具有多项潜能的造血生长因子,在免疫反应中具有重要作用,编码GM-CSF的质粒能增强DNA疫苗的免疫效果。本文就GM-CSF的分子结构、对增强疫苗免疫原性、协同其他因子作用等方面作一综述。同时介绍了基因佐剂与目的基因表达质粒的构建方案。
- 舒邓群茆达干吴志敏杨利国
- 关键词：基因佐剂GM-CSFDNA疫苗免疫调节
- GM-CSF与生长抑素融合表达质粒对小鼠生长抑素抗体及IgG亚型的影响被引量：2
- 2008年
- 将70只小鼠,随机分为7组,每组10只,雌雄各半。第1组为对照组,第2～4组分别肌肉注射pcS/2SS、pGM-CSF/SS和pGM-CSF加pcS/2SSDNA疫苗;第5～7组分别口服以减毒沙门氏菌为载体的pcS/2SS、pGM-CSF/SS和pGM-CSF加pcS/2SSDNA疫苗。结果表明:肌肉注射和口服pGM-CSF/SS和pGM-CSF加pcS/2SSDNA免疫小鼠均能有效激发免疫系统产生较强的免疫应答,与对照组相比,生长抑素抗体P/N值都有提高,且随着免疫时间的延长,呈现不断增高的趋势;同种疫苗以肌肉注射或口服途径免疫小鼠,血浆生长抑素抗体P/N值变化不显著;阳性鼠的比例以肌注pGM-CSF/SS为最高,达60%,pcS/2SS肌注组仅30%,其他各组分别为40%～60%,对照组没有出现阳性鼠;试验各组IgG1抗体的免疫反应高于IgG2a抗体,且IgG1的免疫反应,pcS/2SS和pGM-CSF/SS组高于pGM-CSF加pcS/2SS组;IgG2a的免疫反应,pGM-CSF/SS组高于pcS/2SS和pGM-CSF加pcS/2SS组。口服免疫组的IgG1和IgG2a免疫反应强于肌肉注射免疫组。说明基因佐剂GM-CSF可增强生长抑素基因疫苗的免疫反应,口服免疫pGM-CSF/SS、pGM-CSF加pcS/2SS可同时激发Th1型和Th2型免疫应答,GM-CSF和SS的融合表达质粒的免疫反应优于pGM-CSF和pcS/2SS的共免疫。
- 舒邓群茆达干杨利国吴志敏程宝
- 关键词：GM-CSF基因疫苗IGG亚型
