张欣
- 作品数：6 被引量：5H指数：1
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：上海市自然科学基金国家自然科学基金上海市科学技术委员会科研基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 日本血吸虫小RNA let-7对虫体生殖发育影响的研究被引量：1
- 2017年
- 为检测日本血吸虫小RNA let-7(Sja-let-7)对虫体生殖发育的影响,本研究在日本血吸虫尾蚴感染BALB/c小鼠后的11 d^42 d,将Sja-let-7的同系物(Sja-let-7 mimics)注射入宿主体内对血吸虫Sja-let-7的表达进行干扰,结果显示Sja-let-7 mimics干扰组小鼠肝脏虫卵孵化率显著升高;小鼠肝脏肉芽肿病变减轻十分明显,病灶周围炎性细胞浸润半径变小,空泡变性较对照组轻微,周围正常组织完整性也优于对照组。扫描电镜和透射电镜未观察到虫体的明显变化。利用荧光定量PCR检测Sja-let-7的候选靶基因干扰虫体的表达情况,结果表明Sja-let-7 mimics对大部分候选基因存在不同程度的抑制作用。本研究为后续深入研究小RNA Sja-let-7的功能奠定了基础。
- 冯金涛韩愉乔洪宾张欣李浩陆珂林矫矫刘金明金亚美
- 关键词：日本血吸虫
- 阪崎克罗诺杆菌RPA-LF检测方法的建立
- 2022年
- 以阪崎克罗诺杆菌特异性基因16S rRNA和外膜蛋白基因ompA为靶序列,设计适用于重组酶聚合酶扩增-侧流层析技术(RPA-LF)的引物和探针,并优化反应条件。结果表明,RPA反应可在25~45℃进行,10~20 min即可完成。优化条件后,RPA-LF总反应时间仅为20 min,包括RPA在39℃反应15 min,RPA反应产物在LF试纸条上反应5 min,即可用肉眼判断结果。该方法具有较高的灵敏度,最低检测限可以达到80 pg/反应,约为960 CFU/反应。与7种常见的食源性病原菌都没有交叉反应,表明该方法具有较好的特异性。此外,该方法能够同时识别6种阪崎克罗诺杆菌同属菌,表明该方法广谱性好。本研究中建立的针对阪崎克罗诺杆菌的RPA-LF检测方法,具有操作简便、快速敏感的优点,为该菌的现场快速检测打下了基础。
- 张欣张欣王权祁克宗韩先干韩先干
- 阳性水牛、黄牛IgG筛选日本血吸虫成虫噬菌体展示cDNA文库被引量：1
- 2016年
- 为寻找有效的家畜日本血吸虫病诊断抗原,从感染日本血吸虫的水牛、黄牛血清中纯化IgG,以亲和淘洗方法筛选日本血吸虫成虫(44日龄)噬菌体展示c DNA文库。经每种动物IgG三轮(总计六轮)筛选后,随机挑取53个阳性噬菌体克隆进行序列测定及生物信息学分析。获得了9个EST序列,其中7个EST序列与已知基因或表达序列标签同源,2个EST序列与已知基因或表达序列标签均无同源性,以噬菌体展示载体的10B衣壳蛋白开放阅读框(open reading frame,ORF)为依据,对上述7个与Gen Bank数据库资料同源的EST进行对码分析,结果 7个EST序列能和噬菌体展示载体阅读框对码,为有效展示序列。其中3个EST具有较高的重复度,在51个有效克隆中,25个为HSP70 homolog基因,15个为Keratin9基因有重复,6个为Ornithine--oxo-acid transaminase基因。研究结果显示,HSP70 homolog基因、Keratin9基因和Ornithine--oxo-acid transaminase基因作为诊断家畜血吸虫病候选抗原基因,值得进一步开展克隆、表达和诊断效果评估方面的研究。
- 冯金涛韩愉袁炜张欣许瑞李浩陆珂金亚美林矫矫程国锋刘金明
- 关键词：日本血吸虫水牛黄牛DNA文库
- 一种用于检测阪琦肠杆菌的试剂盒、引物对、探针及方法
- 本发明公开了一种用于检测阪琦肠杆菌的试剂盒、引物对、探针及方法。所述的试剂盒包括RPA反应体系，所述的RPA反应体系包括RPA引物探针混合液，所述RPA引物探针混合液包括一引物对和探针，所述引物对中上游引物的核苷酸序列如...
- 蒋蔚韩先干王权张欣
- 文献传递
- 阪崎克罗诺杆菌双抗夹心酶联免疫吸附检测方法的建立被引量：2
- 2024年
- 为建立阪崎克罗诺杆菌(Cronobacter sakazakii)的免疫学快速检测方法,分别制备了阪崎克罗诺杆菌的特异性单抗和多抗,建立阪崎克罗诺杆菌的双抗夹心酶联免疫吸附DAS-ELISA检测方法。结果:获得4株抗阪崎克罗诺杆菌单克隆抗体阳性细胞株,分泌抗体效价分别是1∶128000、1∶32000、1∶256000和1∶256000,抗阪崎克罗诺杆菌兔多克隆抗体效价是1∶128000。建立的阪崎克罗诺杆菌DAS-ELISA检测方法,分别以抗阪崎克罗诺杆菌兔多抗和单抗作为捕获抗体和检测抗体,兔多抗的最佳稀释度为1∶4000,单克隆抗体最佳稀释度为1∶1000,灵敏性可达1×106 CFU/mL;该检测方法具有良好的特异性,与常见的6种食源性病原菌都没有交叉反应,且能够同时检测6种克罗诺杆菌属细菌;重复性结果显示,该检测方法的批内批间变异系数均小于15%,具有良好的重复性。综上,利用抗阪崎克罗诺杆菌的单抗和兔多抗成功建立了DAS-ELISA方法,该方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,可为阪崎克罗诺杆菌的快速检测提供技术支撑。
- 张欣王福成张欣祁克宗韩先干祁克宗蒋蔚
- 关键词：单克隆抗体双抗体夹心ELISA
- 副溶血弧菌外膜蛋白A(VP0764)的分析表达及其免疫保护效果初步评价被引量：1
- 2020年
- 外膜蛋白A(OmpA)为副溶血弧菌主要表面蛋白之一,具有较强的免疫原性,在疫苗上有很好的应用前景。为评价副溶血弧菌OmpA的免疫效果,本研究通过PCR方法获得副溶血弧菌SH112株的ompA(VP0764)基因的全长片段,测序结果显示该蛋白编码区全长990 bp。对其编码蛋白质进行生物信息学分析,结果显示该蛋白是含有信号肽的稳定蛋白,无跨膜结构,有11个抗原决定簇,具有较高免疫原性。扩增去除信号肽序列的成熟蛋白基因903 bp,并构建重组表达载体pET28a-ompA进行原核表达,结果显示,获得分子量约为39 ku的重组蛋白HisOmpA(VP0764)。采用该蛋白免疫ICR小鼠(0.1 mg/只)3次后收集血清制备鼠多克隆抗血清,利用ELISA检测抗血清效价,结果显示制备的鼠多克隆抗血清效价达132 000以上。利用western blot检测制备的鼠多克隆抗血清,结果显示该血清可与表达蛋白和全菌蛋白发生特异性反应,表明所表达的目的蛋白具有良好免疫原性,能识别天然OmpA蛋白。将45只8周龄ICR小鼠随机分成3组,分别免疫灭活的SH112全菌疫苗(1×108cfu/只)、His-OmpA(VP0764)重组蛋白(0.1 mg/只)及PBS(200μL/只),每两周免疫一次,三免后10 d采用副溶血弧菌SH112株(2×107cfu/只)攻毒,结果显示免疫SH112全菌和His-OmpA(VP0764)重组蛋白的实验组小鼠免疫保护率分别是73%和40%,与对照组差异显著。本研究为副溶血弧菌OmpA的功能与疫苗开发研究奠定了基础。
- 张欣张欣韩先干张海洋王权王权祁克宗蒋蔚
- 关键词：副溶血弧菌外膜蛋白A免疫原性免疫保护性
