祝健
- 作品数：6 被引量：10H指数：2
- 供职机构：广西大学更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区自然科学基金广西大学科研基金广西大学博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 小鼠TLR3基因双敲除打靶载体构建及巨噬细胞RAW264.7^(TLR3-/-)细胞系的建立被引量：1
- 2018年
- 【目的】建立Toll样受体3(TLR3)基因缺失的小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞系,为探索狂犬病毒感染机体过程中TLR3在固有免疫反应中的作用机制提供理论依据。【方法】采用Golden Gate Kit试剂盒组装转录激活样效应因子核酸酶(TALEN)打靶载体p TALEN-TLR3,经酶切和测序验证其连接正确后,通过脂质体瞬时转染RAW264.7细胞,转染后提取细胞DNA,用T7核酸内切酶酶切验证TALEN质粒剪切活性。【结果】TALENs左右臂分两部分连接,首先完成A、B部分的各自连接,然后分别将T1LA与T1LB、T1RA与T1RB、T2LA与T2LB、T2RA与T2RB连接,TALEN模块经过两次连接后的PCR鉴定结果显示,T1L、T1R和T2L的4个克隆均呈阳性,T2R有3个克隆呈阳性。T2L和T2R质粒共转染RAW264.7细胞后提取DNA为模板,经PCR扩增后用T7核酸内切酶进行酶切,酶切后的DNA电泳结果显示TALEN2剪切活性较强,共获得3条条带(931、555和376 bp)。TALEN打靶载体p TALEN-TLR3转染RAW264.7细胞24 h后用胰酶进行消化,并加入800μg/m L G418进行筛选,7 d后获得细胞单克隆;挑选阳性细胞克隆进行T7核酸内切酶酶切鉴定及测序,结果发现4-1和4-40号细胞克隆为双敲细胞系,均缺失7 bp的核苷酸碱基,为非3整数倍碱基缺失,可造成后续基因移码突变,使细胞基因功能失活。【结论】通过TALEN技术可成功构建TLR3基因双敲除的小鼠巨噬细胞RAW264.7TLR3-/-细胞系,且可用于狂犬病毒感染细胞后细胞因子和TLR3间的关系研究。
- 韦显凯韦显凯祝健唐海波祝健李晓宁唐海波
- 关键词：狂犬病毒RAW264.7细胞
- 一例猪瘟病毒、蓝耳病毒和圆环病毒混合感染的病例调查
- 2017年
- 1基本情况以培育中猪为主要业务的某养猪场,分别于2016年4月1日（130头）和4月20日（80头）从不同猪场购进仔猪210头进行饲养,在购进后委托村兽医对仔猪进行免疫接种,免疫程序如表1。2临床症状2016年6月6日猪群开始发病,仔猪陆续出现腹部和臀部皮肤发红症状,体温升高达41℃以上,食欲下降或废绝,发病后期病猪皮肤、耳朵颜色逐渐发紫,病猪怕冷,喜欢扎推,拉水样绿色粪便,病程一般3~5天。6月22日进行采样送检。
- 张红云陈秋英何宏勇申雪钊甘一波高慧李汝韦汝贤祝健
- 关键词：蓝耳病毒圆环病毒猪瘟病毒免疫程序病例调查猪瘟疫苗
- 一例猪急性传染性胸膜肺炎和圆环病毒混合感染病例的诊治被引量：1
- 2017年
- 2016年5月份，广西玉林市福绵某自繁自养的6000头规模猪场中部分100—130日龄中大猪陆续出现高热、咳嗽症状，随即出现呼吸困难，迅速死亡的现象，最初使用青霉素、庆大霉素、鱼腥草等药物治疗，并在饲料中添加了一些柴胡、穿心莲之类的中成药，效果不明显。
- 王永妮张红云李茂宁祝健
- 关键词：规模猪场传染性胸膜肺炎感染病例圆环病毒诊治
- 两株H1N1亚型重组流感病毒的猪致病性研究被引量：3
- 2019年
- 选取2种不同宿主来源的新型甲型重组H1N1亚型流感病毒(犬流感病毒(A/canine/Guangxi/QZ5/2013)(简称CIV-QZ5)和猪流感病毒(A/swine/Guangxi/QZ5/2014)(简称SIV-QZ5),以猪为动物模型,分别以106 PFU/mL病毒剂量和气管攻毒的方式感染3周龄仔猪,从而探究新型甲型重组犬流感病毒对猪的致病性。试验发现CIV-QZ5及SIV-QZ5均能有效感染仔猪,攻毒仔猪均出现发热(≥39.5℃)、流鼻涕、食欲减退、活动减少等流感症状,其中CIV组出现1头仔猪(A3)死亡。通过对肺脏灌洗液进行病毒滴定,发现CIV组在攻毒后3d和5d在肺脏的复制能力较SIV组强,最高达到3.12log10PFU/mL。病理剖检发现,肺脏出现不同程度的实变。肺脏病理切片发现两组均出现不同病变,其中以死亡仔猪(A3)最为明显,主要以支气管上皮细胞坏死脱落,肺泡壁增厚,肺泡腔以及支气管内有大量的弥漫性浸润的单核细胞为主要特征。结果表明,猪源甲型重组CIV不仅能引发猪出现明显流感症状,而且能有效地在肺脏复制,为了解潜在的猪-犬跨宿主传播机制奠定了基础。
- 何剑桥何平赵卫锋周华波丁仰保梁明丽梁明丽祝健莫彦宁韦祖樟韦祖樟欧阳康黄伟坚
- 关键词：重组病毒
- 猫杯状病毒的分离鉴定及其全基因组的序列分析被引量：5
- 2016年
- 本研究采用MDCK细胞从养殖场患病猪的鼻拭子样品中分离获得1株猫的杯状病毒（Feline calicivirus,FCV）,命名为GX01-2013。采用RT-PCR方法扩增了该毒株的全基因组,并进行了序列测定和分析。结果表明,该毒株基因组全长7704 bp,与哈尔滨分离株HRB-SS较为相近,其核苷酸同源性为82.3%。根据FCV衣壳蛋白构建的遗传进化树分析,发现该病毒与F9、F4、225和2024疫苗株均不在同一分支,氨基酸同源性为84.2%～87.7%,各毒株间无明显地域差异。此外,VP1蛋白的E区（426～521aa）发现有4个中和性抗原位点发生改变。
- 何平杨文娟李法凯赵卫锋周华波李瑞凯梁明丽韦红云何剑桥祝健韦祖樟黄伟坚陈樱
- 关键词：全基因组遗传进化分析
- 狂犬病病毒感染IFNAR基因敲除小鼠对脑内细胞因子产生的影响初探
- 狂犬病病毒（Rabiesvirus，RV）是弹状病毒科的一种不分节段的负链RNA病毒，可导致人类和动物致命的神经系统疾病。嗜神经性和神经功能损伤是狂犬病病毒感染的主要特征。尽管狂犬病预防和控制方面取得了显著进展，但该病仍...
- 祝健
- 关键词：狂犬病病毒细胞因子
