樊浩
- 作品数：2 被引量：6H指数：1
- 供职机构：重庆医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：重庆市卫生局医学科研项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 乙型肝炎病毒X蛋白及其截短体与损伤DNA结合蛋白1在HBV复制中的作用被引量：1
- 2013年
- 目的探讨乙型肝炎病毒x蛋白（HBx）及其两个截短体（HBx、HBx43～154）与损伤DNA结合蛋白（DDB）1在HBV复制中的作用。方法用质粒瞬时转染HepG2细胞，72h后分别提取细胞总蛋白质和总RNA，通过Westernblot分析验证DDB1蛋白表达，逆转录实时定量PCR在基因的mRNA水平观察HBx蛋白及其截短体对DDB1蛋白表达的影响。提取转染72h后细胞胞质DNA，收集细胞的培养上清液，通过实时定量PCR及酶联免疫吸附试验检测各组细胞胞质HBVDNA复制及培养上清液中病毒标志物HBsAg、HBeAg表达水平，从而观察HBx蛋白及其两个截短体与DDB1对HBV复制的影响。对数据进行单因素方差分析及检验。结果在有HBV复制的HepG2细胞中，缺失HBx转染组细胞中DDB1蛋白在mRNA水平明显下降（相对表达水平为野生型转染组的52．74％±8．95％，f=9．143，P〈0．05），胞质DNA的复制及培养上清液中病毒标志物HBsAg、HBeAg表达水平也明显下降（相对表达水平分别为野生型转染组的55．49％±1．19％、48．05％±2．90％、46．22％±2．20％，P值均〈0．05）。共转染HBxN-端截短体HBx4。后细胞中DDB1蛋白mRNA水平恢复到野生型水平，且能使缺失HBx蛋白的HepG2细胞中胞质HBVDNA的复制及培养上清液中病毒标志物HBsAg、HBeAg的表达恢复到野生型水平。但共转染HBxC-端截短体HBx的细胞中DDB1蛋白在mRNA水平较野生组明显下降（相对表达水平为野生型转染组的59．95％±9．09％，f=7．629，P〈0．05），且不能使转染缺失HBx蛋白的HepG2细胞中胞质HBVDNA的复制及培养上清液中病毒标志物HBsAg、HBeAg的表达恢复到野生型水平（相对表达水平分别为野生型转染组的62．53％±0．67％、63．13％±2．14／0、55．40％±0．99％，P值均〈0．05）。并且各转染组DDB1蛋白mRNA水平变化与胞质HBVDNA复制和培养上清液中病毒标志物HBsAg、HBeAg表达水平是一致的。结论C-�
- 杨旋何松罗娜罗莉樊浩龚倩
- 关键词：肝炎病毒乙型乙型
- NF-κB沉默联合苦参碱诱导人肝癌细胞HepG2凋亡和相关分子的表达被引量：5
- 2013年
- 目的探讨NF-κB沉默联合苦参碱(matrine,MT)诱导人肝癌细胞HepG2凋亡及相关分子的表达。方法构建NF-κB/P65 siRNA真核表达载体转染人肝癌细胞HepG2,RT-PCR检测NF-κB/P65基因沉默效果,并筛选出NF-κB/P65基因沉默稳定转染细胞株。将实验分为对照组、苦参碱组(1.5 g/L)、稳转细胞组和联合组(稳转细胞+苦参碱),流式细胞仪检测细胞凋亡率;分别用RT-PCR法和蛋白质印迹法检测细胞NF-κB/P65、CD95(Fas)、Smac、Survivin的mRNA和蛋白水平表达。结果苦参碱组NF-κB/P65、CD95、Smac和Survivin的表达上调,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05);稳转细胞组CD95和Smac的表达上调,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),NF-κB/P65和Survivin的表达下调,与对照组、苦参碱组比较差异有统计学意义(P<0.05);联合组CD95和Smac的表达上调,与对照组、苦参碱组、稳转细胞组比较差异有统计学意义(P<0.05),NF-κB/P65和Survivin的表达下调,与苦参碱组比较差异有统计学意义(P<0.05)。各组细胞凋亡率分别为3.21%、6.25%、11.82%、21.06%,组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 NF-κB沉默联合苦参碱诱导人肝癌细胞HepG2凋亡可能与CD95和Smac的表达上调及NF-κB/P65和Survivin的表达下调有关。
- 樊浩何松汤为学
- 关键词：苦参碱NF-ΚBCD95SMAC
