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嗜酸乳杆菌胞外蛋白调控MAPK和PI3K-AKT信号途径关键蛋白活化水平被引量：3: 2017年; 探讨并揭示嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)CICC6005分泌的相关蛋白质促进肠道健康及分子机制具有重要研究价值。本实验在确定了L.acidophilus CICC6005分泌的胞外蛋白抑制HT-29结肠癌细胞增殖的基础上,进一步探讨67 ku和37 ku的胞外蛋白通过何种途径发挥抑制结肠癌细胞增殖。研究以HT-29细胞作为靶细胞,用丝裂原激活的蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)和磷脂酰肌醇-3激酶-丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(phosphatidylinositol 3-kinase-protein kinase B,PI3K-AKT)信号通路为考察对象,以Western Blotting为手段,分析两个通路中关键的靶点蛋白p38、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)、磷酸化p38(phosphorylated p38,p-p38)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(phosphorylated c-Jun N-terminal kinase,p-JNK)、磷酸化的细胞外信号调节蛋白激酶(phosphorylated extracellular signal-regulated kinase,p-ERK)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated AKT,p-AKT)、PI3K的表达水平,以探讨并阐述源于L.acidophilus CICC6005胞外蛋白调控结肠癌细胞增殖状况的分子机制。结果表明,不同质量浓度的67 ku和37 ku胞外蛋白分别作用HT-29细胞一定时间后,两种胞外蛋白均具有下调两个信号通路途径中p-ERK1/2、p-p38、p-AKT、PI3K蛋白的表达,且存在浓度依赖关系;但对p-JNK、ERK1/2、p38、JNK蛋白的表达没有影响。因此,源于L.acidophilus CICC6005分泌的37 ku和67 ku胞外蛋白表现出显著的抑制HT-29细胞增殖的功能,其机制可能与调控MAPK和PI3K-AKT两个信号通路中几个关键的靶点蛋白的活化水平相关。该研究结果提示,食用嗜酸乳杆菌其分泌的胞外蛋白质将达到维护肠道健康的目标。; 王泳贾彦任效东明珠江岩赵培庞广昌阎亚丽陈庆森; 关键词：胞外蛋白

乳源酪蛋白糖巨肽对NF-κB信号通路中关键蛋白的调控作用: 2017年; 以结肠癌细胞HT-29为细胞系,在确定乳源性酪蛋白糖巨肽(casein glycomacropeptide,CGMP)对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的HT-29细胞核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)亚单位p65蛋白影响的基础上,在最适作用时间条件下,利用Western blotting技术进一步检测乳源CGMP对NF-κB信号通路上关键蛋白IκBα、p-IκBα、E3RSIκB、UBC5表达水平的影响,以阐述乳源CGMP调控NF-κB信号通路中关键蛋白的作用机制。结果表明:乳源CGMP组的3种质量浓度(0.001、0.010、0.100?μg/m L)均可在一定程度上抑制LPS诱导的HT-29细胞NF-κB信号通路上IκBα蛋白的降解,0.100?μg/m L作用较为明显,与空白对照组比较有显著性差异(P<0.01)。研究明确地证实了乳源CGMP可通过抑制p-IκBα、E3RSIκB、UBC5蛋白的表达来抑制IκBα蛋白的降解,进而抑制NF-κB信号通路的激活。结论:乳源CGMP可显著降低NF-κB信号通路关键蛋白IκBα的降解,其机制是抑制了IκBα的磷酸化和泛素化,使p-IκBα和泛素化关键蛋白E3RSIκB和UBC5的表达均有所下降,进而减少了IκBα的降解,增加了IκBα-p65-p50蛋白三聚体的数量,使p65蛋白核移位效应降低,进而减少下游基因的表达。因此,研究结果科学地阐释了乳源CGMP是通过调控NF-κB信号通路发挥抗炎的作用。; 王泳龚建苗贾彦赵培庞广昌阎亚丽陈庆森; 关键词：酪蛋白糖巨肽结肠癌细胞核因子-ΚB

瑞士乳杆菌TS206对小鼠血脂及粪便胆汁酸水平的调控影响被引量：2: 2017年; 探讨瑞士乳杆菌TS206(Lactobacillus helveticus TS206)对小鼠血脂水平的影响。以健康BABL/c小鼠为对象,设置实验组和对照组,分别以L.helveticus TS206菌悬液和生理盐水(0.2 m L/d)连续灌胃7周,监测小鼠体质量和血脂(总胆固醇(total serum cholesterol,TC)、甘油三酯(triglycerides,TG)水平、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C))以及粪便总胆汁酸(total bile acid,TBA)水平的变化。灌胃L.helveticus TS206后,小鼠体质量增量显著高于对照组(P<0.05,P<0.01);血清中TC、TG和LDL-C水平均显著降低(P<0.05),灌胃停止1周后基本恢复到对照组水平;L.helveticus TS206菌悬液和生理盐水小鼠血清中HDL-C含量均无显著性变化;TBA水平呈先下降后上升趋势,且3周后TBA水平显著低于对照组(P<0.05)。研究结果表明,L.helveticus TS206能促进健康小鼠体质量增加,并有效调控其血脂水平,提示口服L.helveticus TS206菌剂可能会降低患心脑血管疾病的风险。; 王泳叶雷贾彦庞广昌赵培闫亚丽陈庆森; 关键词：血脂总胆汁酸心脑血管疾病

高质量人体粪便细菌16S rDNA V3区扩增方法被引量：2: 2016年; [目的]为获得应用于二代测序的高质量16S r DNA V3区PCR产物。[方法]以从人体粪便中提取微生物总DNA为模板,通过梯度PCR和touchdown PCR技术确定了循环条件,并通过调整反应体系中的相关浓度参数以使扩增结果得到优化。[结果]最终确定的循环条件为预变性95℃3 min,变性95℃30 s,退火69℃-62℃每个循环退火温度降0.5℃,退火时间30 s,延伸72℃60 s,共15个循环;变性95℃30 s,退火62℃30 s,延伸72℃60 s,共15个循环,最后72℃延伸5 min。反应体系为：在50μL体系中DNA模板量10-25 ng,pfu酶0.25-0.5 U,正反向引物均为0.06-0.1μmol/L,d NTPs浓度0.2-0.4 mmol/L,Mg2＋浓度2-2.5 mmol/L。[结论]梯度PCR与touchdown PCR相结合可快速确定最佳的退火温度以及循环条件,通过调整反应体系中浓度参数可以解决扩增中一些问题。; 贾彦江岩明珠赵培庞广昌闫亚丽陈庆森; 关键词：肠道细菌 RDNA

乳源酪蛋白糖巨肽作用人结肠癌细胞HT-29调控炎症活力研究: 2017年; 为进一步阐释乳源酪蛋白糖巨肽(casein glycomacropeptide,CGMP)的抗炎及修复肠道炎症的功效,本研究在确定了乳源CGMP对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的结肠癌细胞HT-29NF-κB亚单位p65蛋白的影响和乳源CGMP调控核转录因子(nuclear factor,NF)-κB信号通路的基础上,通过构建表达乳源CGMP和NF-κB必需调节蛋白(NF-κB essential modulator,NEMO)的质粒,共转HT-29细胞,免疫共沉淀测定两个蛋白的相互作用。最后采用线粒体膜电位法测定乳源CGMP对HT-29细胞的促凋亡作用。结果表明,乳源CGMP与NEMO(NF-κB essential modulator)30 h共转HT-29细胞中,乳源CGMP与NEMO蛋白均表达,且表现出二者的相互作用。乳源CGMP可与NEMO相互作用影响NF-κB信号通路;同时乳源CGMP还促进HT-29细胞凋亡,呈时间依赖性,其中0.1μg/m L的CGMP作用效果最好。乳源CGMP与NEMO相互作用是间接作用于IκB激酶(IκB kinase,IKK)而作用于?IκB,进而影响NF-κB信号通路。研究揭示了乳源CGMP调控NF-κB信号通路的另一种途径,也充分说明乳源CGMP可通过作用多种抗炎途径发挥其调控作用。; 王泳龚建苗贾彦阎亚丽庞广昌赵培陈庆森; 关键词：酪蛋白糖巨肽结肠癌细胞HT-29 细胞凋亡

杜仲水提液对嗜酸乳杆菌生长及发酵产物的影响被引量：8: 2016年; 制备5种不同质量浓度的杜仲水提液添加到MRS培养基中对嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)CICC6005进行培养,旨在探究不同质量浓度的杜仲水提液对L.acidophilus CICC6005增殖情况及对发酵过程中胞外和胞内蛋白含量变化的影响,并对其蛋白组分进行分析。发酵所得胞外和胞内蛋白分别用三氯乙酸-丙酮沉淀法和试剂盒法获得,采用Sephadex G-100凝胶层析分离技术对胞外和胞内蛋白分离纯化,用二喹啉甲酸法和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分别测得各组分蛋白的含量及分子质量。结果显示:当培养基中添加的杜仲水提液质量浓度为0.125 0 g/m L时,对菌体增殖有明显的促进作用,菌体生物量最大(4.38×108 CFU/m L),同时在此质量浓度时菌体胞外和胞内蛋白含量也达到最大值;胞外和胞内蛋白经过Sephadex G-100凝胶层析分离后均得到2个明显的蛋白峰,胞外蛋白两组分分子质量分别为67、31 ku,胞内蛋白两组分分子质量分别为57、17 ku。综上,添加适宜质量浓度的杜仲水提液对L.acidophilus CICC6005的增殖起到了一定的促进作用,并对其发酵产物组成产生了一定的影响。; 贾彦李毛毛陈蕊江岩明珠赵培庞广昌阎亚丽陈庆森; 关键词：增殖胞外蛋白胞内蛋白

嗜酸乳杆菌胞外蛋白的分离纯化及抑制HT-29细胞增殖作用的研究被引量：3: 2016年; 为探讨嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)分泌的相关蛋白质及其促进肠道稳态的功能作用,本研究以L.acidophilus作为研究对象,固体培养获得胞外蛋白粗提液,采用Sephadex G-100凝胶层析纯化,收集胞外蛋白各组分,用考马斯亮蓝法和SDS-PAGE方法分别测定各蛋白组分的含量及分子量,然后采用四氮唑蓝比色分析法(MTT法)鉴定各蛋白组分抑制HT-29细胞增殖的能力。研究显示,分离L.acidophilus胞外蛋白获得两个蛋白峰,分子量分别为67 ku和37 ku,含量分别为0.066 mg/m L和0.021mg/m L,不同浓度(0.001μg/m L、0.01μg/m L、0.1μg/m L和1μg/m L)的67 ku和37 ku胞外蛋白分别对HT-29细胞作用12 h、24 h、48 h和72 h,均显示抑制细胞增殖的作用,且呈现明显的量效关系和时间依赖效应,其中1μg/m L的67 ku和37 ku胞外蛋白对HT-29细胞作用48 h的抑制率分别为(38.41±1.94)%和(45.06±1.58)%。综上所述,固体培养L.acidophilus可获得两种胞外蛋白(即37 ku和67 ku),其对HT-29细胞增殖具有不同程度的抑制作用,其中37 ku胞外蛋白的抑制作用较强。; 贾彦任效东江岩明珠赵培庞广昌阎亚丽陈庆森; 关键词：嗜酸乳杆菌胞外蛋白

瑞士乳杆菌调控小鼠肠道菌群变化规律的研究被引量：10: 2018年; 为探究瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)TS206对小鼠肠道菌群的调控规律,更好地阐述益生菌维持肠道菌群稳态的机制,本研究以雄性BALB/c小鼠为实验对象,将其分为L.helveticus TS206组、对照组、空白组。L.helveticus TS206组和对照组分别每天灌胃L.helveticus TS206菌悬液和等量的生理盐水,连续灌胃7周,空白组不灌胃。每周采集小鼠新鲜粪便样品,通过试剂盒提取粪便细菌总DNA,利用Ion torrent个人化操作基因组测序平台测序技术对16S r RNA基因的V6区进行高通量测序,最后通过生物信息学和多变量统计学方法对测序数据进行分析。结果显示:所有测序序列在97%相似水平划分得到1 617个操作分类单位(operational taxonomic units,OTUs),被划分为8个门,硬壁菌门(Firmicutes)和拟杆菌门(Bacteroidetes)为各组小鼠中的优势菌门,占总序列数的97.49%,且硬壁菌门丰度最高,超过70%;优势菌科主要为S24-7、毛螺菌科(Lachnospiraceae)、瘤胃球菌科(Ruminococcaceae)、理研菌科(Rikenellaceae)和拟杆菌科(Bacteroidaceae),且与对照组相比L.helveticus TS206组肠杆菌科细菌数量较低并呈下降趋势。经LEf Se分析有53个关键OTUs与2组小鼠肠道粪便菌群结构显著相关,其中27个OTUs在对照组中富集,分属于肠杆菌科、瘤胃球菌科、毛螺菌科和梭菌目;26个OTUs在L.helveticus TS206组中富集,分属于梭菌目、毛螺菌科和拟杆菌属,其中与对照组相比,梭菌目丰度水平高。经主成分分析,两组样品完全分离,菌群的整体结构存在差异,且富集的OTUs之间呈负相关关系。综上所述,在实验阶段,灌胃雄性BALB/c小鼠一定剂量的L.helveticus TS206后,经扩增子测序分析获得的初步结论为L.helveticus TS206能改变肠道菌群整体结构的功效,表现出了抑制肠道有害微生物生长的作用,并通过促进部分有益菌的增殖来维持肠道菌群结构的稳态。; 臧凯丽贾彦崔文静马新颖王泳赵林森赵培叶雷阎亚丽陈庆森; 关键词：生物信息学

魔芋葡甘露聚糖和香蕉抗性淀粉对小鼠肠道短链脂肪酸分泌及血脂影响的研究被引量：9: 2016年; 本研究意在探索一种KGM与BRS复合的益生元,最终获得一种较好的有维持及增强肠道和心血管健康的益生元制剂。以健康雄性BALB/c小鼠为模型,设定对照组和6个试验组,设计制造三组不同添加剂量的BRS和三组不同配比BRS+KGM的AIN93纯化饲料饲喂小鼠,4周后测定小鼠盲肠SCFA含量和血脂指标。在SCFA分泌水平研究中,BRS组1、组2和BRS+KGM组2小鼠盲肠内容物中丙酸的分泌量显著增加(p<0.05),而BRS组3和BRS+KGM组2乙酸、丁酸和总SCFA的分泌增加量极显著(p<0.01),BRS+KGM组3丁酸分泌量明显增加(p<0.01)。在血脂水平研究中,BRS组3HDL-C的含量极显著升高(p<0.01),在BRS+KGM组2和组3中,均为TG、TC含量分别极显著(p<0.01)、显著(p<0.05)降低,HDL-C含量显著升高(p<0.05)。BRS和KGM对SCFA的分泌水平和血脂水平均表现明显的剂量依赖性。综合比较,BRS+KGM组2复合制剂(5%KGM+23.5%BRS)为本研究中最佳复合益生元。; 贾彦魏秀秀赵培阎亚丽陈庆森; 关键词：魔芋葡甘露聚糖香蕉抗性淀粉短链脂肪酸丁酸血脂水平

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