孟琴
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：哈尔滨医科大学药学院更多>>
- 发文基金：哈尔滨市科技创新人才研究专项资金项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 高免疫原性骨桥蛋白的构建、表达及鉴定
- 2013年
- 目的重组及表达高免疫原性骨桥蛋白（OPN）的融合蛋白。方法使用Lasergene软件分析OPN基因，选取出免疫原性高的区域作为目的片段。提取总RNA，应用逆转录、PCR等技术扩增OPN基因目的片段，将其分别与带有His标签的pET-32a及GST标签的pGEX-4T-1载体连接。构建表达载体，诱导表达OPN融合蛋白（分别含有His，GST—Tag），并进行SDS—PAGE及Western blotting鉴定。结果扩增后获得一条351bp的DNA片段，经测序鉴定为目的片段序列，并实现了可溶性高表达，经Western blotting鉴定为高免疫原性OPN融合蛋白。结论采用原核表达经纯化后可获得高纯度高免疫原性的OPN融合蛋白，为进一步开发OPN诊断试剂打下基础。
- 汤伟松孟琴刘亮李淑珍唐晓波
- 关键词：骨桥蛋白肝癌
- 人结合珠蛋白cDNA克隆及其在大肠杆菌中的表达和鉴定
- 2014年
- 目的:克隆人结合珠蛋白(haptoglobin,Hp)cDNA,并在大肠杆菌中表达和鉴定。方法:从Hela细胞中分离总RNA,采用RT-PCR方法获得人Hp cDNA,分别克隆至原核表达载体pET-32a和PGEX-4T-1,转化至大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,并进行SDS-PAGE及Western blot鉴定。结果:成功构建了高效原核表达质粒PET-32a-Hp和PGEX-4T1-Hp;Western印迹结果表明,经IPTG诱导,在大肠杆菌中表达了分子量约30 kD和37 kD的目的蛋白;表达产物经Ni2+-NTA离子交换树脂纯化,纯度>90%。结论:在E.coli成功表达和纯化了人Hp融合蛋白,为进一步开发人Hp诊断试剂打下基础。
- 孟琴汤伟松刘亮李淑珍唐晓波
- 关键词：卵巢癌克隆纯化
