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口蹄疫病毒3C蛋白多克隆抗体的制备与鉴定被引量：1: 2019年; 扩增口蹄疫病毒(FMDV) 3C蛋白编码基因,将其克隆到原核表达载体,并转化至大肠杆菌BL21中进行诱导表达; 3C重组蛋白纯化后免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,通过ELISA和Western blot检测多克隆抗体的效价和特异性,并将该抗体通过间接免疫荧光(IFA)和Western blot应用于3C的检测。ELISA结果显示,制备的3C蛋白多克隆抗体效价达1∶256 000; IFA结果显示,该抗体能够检测到3C蛋白在细胞中的定位; Western blot结果显示,该多克隆抗体能够检测到在细胞中过表达的3C蛋白。本研究制备的FMDV 3C蛋白多克隆抗体为FMDV及其3C蛋白的相关研究提供了重要的物质基础。; 陈飞吴香菊吴香菊齐静齐静; 关键词：FMDV 原核表达蛋白纯化多克隆抗体

口蹄疫病毒3B蛋白的表达纯化及其多克隆抗体的制备: 2021年; 为了深入研究口蹄疫病毒3B蛋白的结构及功能,本研究原核表达了3B蛋白并制备了针对3B蛋白的多克隆抗体。试验采用PCR方法扩增了口蹄疫病毒3B蛋白基因,并将其克隆到pET28a载体上,构建了重组质粒pET28a-3B,将其转化到大肠杆菌BL21感受态细胞中进行诱导表达。经过Ni-NTA琼脂糖亲和层析法初步纯化及Millipore超滤浓缩进一步纯化,将其免疫试验动物新西兰大白兔后制备出了抗3B蛋白的多克隆抗体。通过ELISA检测了该多抗的效价,Western blot试验检测了其反应性,通过间接免疫荧光(IFA)和Western blot试验检测了该多抗的应用性。结果表明:该抗体的效价为1∶512000,反应性良好;IFA试验和Western blot试验中可以检测到过表达后定位于细胞核和细胞质中的3B蛋白,也可以检测到在真核细胞中过表达的3B蛋白。说明本研究制备的口蹄疫病毒3B蛋白多克隆抗体可以作为开展该病毒相关研究的重要材料。; 辛旭吴香菊齐静齐静齐静杜正国单虎杜以军; 关键词：口蹄疫病毒原核表达蛋白纯化多克隆抗体

猪Mx1基因及分段基因真核表达载体的构建和鉴定: 2019年; 试验旨在通过对猪Mx1基因及其分段基因的真核表达载体的构建和鉴定,为进一步研究Mx1基因的功能奠定基础。试验以猪Mx1的基因序列为基础,以真核表达质粒pXJ41为载体,依据Mx1的蛋白结构进行分段,添加了Flag标签,构建了Mx1及Mx1分段基因的真核表达质粒,分别命名为pXJ41-Flag-Mx1、pXJ41-Flag-G、pXJ41-Flag-GMD、pXJ41-Flag-MDL4、pXJ41-Flag-GED。然后通过免疫印迹试验检测上述质粒在HEK-293T细胞中的表达情况,通过间接免疫荧光试验鉴定目的蛋白在细胞内的定位情况。免疫印迹试验成功检测到了Mx1及Mx1分段基因的蛋白条带,间接免疫荧光试验检测到各目的蛋白定位于细胞质。上述真核表达质粒可在HEK-293T细胞中成功表达,Mx1及其分段真核表达质粒的构建和成功表达及定位对进一步探索Mx1的功能及机制奠定了基础。; 田云飞胡悦齐静吴香菊孙吉谦崔云前刘新利杜以军; 关键词：真核表达抗病毒蛋白免疫印迹

猪RNase L与PRRSV nsp4缺失突变体的构建及其互作研究: 2021年; RNase L是一种独特的核糖核酸内切酶,在机体的抗病毒过程中发挥重要作用。猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)非结构蛋白4(nsp4)具有3C样丝氨酸蛋白酶活性,是参与病毒多聚蛋白前体切割的主要蛋白酶,是影响病毒粒子成熟的重要蛋白。课题组前期研究发现猪RNase L(sRNase L)能够与nsp4互作发挥抗PRRSV作用。为了筛选sRNase L与nsp4互作的区段或位点,本研究分别构建了sRNase L与nsp4的截短体或突变体,通过免疫共沉淀试验进行筛选,结果显示突变体sRNase L R460A、sRNase L R675A、sRNase L Y720A、sRNase L F724A都能够与nsp4发生互作,只有缺失体sRNase L 1~586 aa不与nsp4互作,表明sRNase L第3结构域(587~744 aa)为与nsp4互作区段,但该区段不包括第675位精氨酸、第720位酪氨酸、第724位苯丙氨酸;分别包含nsp4三个结构域的截短体nsp4-D1(1~80 aa)、nsp4-D2(60~156 aa)、nsp4-D3(157~204 aa)中,只有nsp4-D1与sRNase L发生互作,表明nsp4的1~60 aa为与sRNase L互作区段。本研究为进一步探究sRNase L与nsp4互作抗PRRSV机制奠定了基础,为预防和控制PRRSV感染提供了新的思路和方法。; 于莹李均同丛晓燕齐静刘思当郑乾坤孙文博孙文博郑龙祥吴香菊吴香菊单虎; 关键词：免疫共沉淀

96点阵琼脂稀释法与微量肉汤稀释法药敏试验结果的对比被引量：12: 2018年; 目的为了验证96点阵琼脂稀释法进行药敏试验的可靠性和有效性,与国际通用的微量肉汤稀释法进行对比。方法用微量肉汤稀释法和96点阵琼脂稀释法分别对质控菌株E.coli ATCC25922、临床分离E.coli进行4种不同药物(头孢噻呋、庆大霉素、氟苯尼考和多西环素)的药敏试验,并经过多次重复和对比。结果这两种检测方法所测定的菌株的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)完全相同者占30%~50%,相差1个梯度占80%,3个梯度以内的吻合率高达96%以上,96点阵琼脂稀释法具有很好的重复性和稳定性。结论 96点阵琼脂稀释法与微量肉汤稀释法两种方法测定的MIC没有显著差异,可共用一个质控标准。96点阵琼脂稀释法的标准化和规范化,有利于高通量药敏检测的进行,推动建立完善的抗药性监测技术体系。; 胡明李璐璐赵敏赵敏张印骆延波张印齐静; 关键词：药敏试验微量肉汤稀释法

共表达猪α、γ干扰素和PRRSV GP3、GP5蛋白的DNA疫苗产生的针对高致病性PRRSV的短期和长期保护: 猪繁殖与呼吸综合征已经成为危害全球养猪业的最重要的疾病之一.目前的疫苗免疫不尽理想只能提供有限的保护.在本研究中,我们构建了共表达猪α、γ干扰素和高致病性PRRSV GP3、GP5蛋白的DNA疫苗pVAXl(C)-α-γ...; 杜以军齐静吴家强王金宝

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齐静