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盐生杜氏藻(Dunaliella salina)cDNA文库构建及功能基因筛选(英文)被引量：10: 2004年; 采用Qiagen公司的植物总RNA提取技术、Clontech公司的CreatorTM技术平台以及SMARTTM技术进行cDNA文库构建。从杜氏藻中提取出了高质量的总RNA,通过PowerScript反转录酶反转录杜氏藻的总RNA,采用LD-PCR、酶处理等方法对cDNA进行等比例扩增、纯化,同时使用CHROMASPIN-400柱子将cDNA分段化,最后将长片段连入pDNR-LIB质粒,1.5kV,25μF电转化大肠杆菌JM109,得到含1.5×106个克隆子的原始文库,滴度为1.5×106cfuml-1。结合酶切和PCR,对该文库的质量进行了鉴定和统计,文库的平均片段插入长度为1.5kb。采用烯醇酶和UDP葡萄糖脱氢酶的EST作为同源探针,对文库中的功能基因进行筛选,并采用放射性原位杂交法,对扩增文库进行了初筛和复筛,得到了含这两条基因全编码序列的cDNA,烯醇酶为1.8kb,UDP葡萄糖脱氢酶为1.9kb,为今后对该种进行大规模功能基因组学研究奠定基础。; 李钢刘敏蒋彦乔代蓉曹毅; 关键词：盐生杜氏藻 CDNA文库功能基因组学

抗α-苦瓜素单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2: 2011年; 用α-苦瓜素(α-MMC)免疫小鼠(BALB/c),分离免疫脾细胞,采用聚乙二醇(PEG)法将免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,筛选出分泌抗α-MMC素的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株;采用小鼠体内诱生法制备腹水,Mabselect亲和层析纯化McAb,所得McAb经亚类鉴定为IgG2b亚类,通过间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot检测,所得McAb与α-MMC特异反应,与相同来源的MAP30无交叉反应,为深入研究α-MMC的结构与功能提供了检测手段。; 孟尧姚兴川王殊睿刘敏王红宁孟延发赵晓军; 关键词：酶联免疫吸附试验单克隆抗体 WESTERN BLOT检测

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刘敏