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盐生杜氏藻(Dunaliella salina)cDNA文库构建及功能基因筛选(英文)被引量：10: 2004年; 采用Qiagen公司的植物总RNA提取技术、Clontech公司的CreatorTM技术平台以及SMARTTM技术进行cDNA文库构建。从杜氏藻中提取出了高质量的总RNA,通过PowerScript反转录酶反转录杜氏藻的总RNA,采用LD-PCR、酶处理等方法对cDNA进行等比例扩增、纯化,同时使用CHROMASPIN-400柱子将cDNA分段化,最后将长片段连入pDNR-LIB质粒,1.5kV,25μF电转化大肠杆菌JM109,得到含1.5×106个克隆子的原始文库,滴度为1.5×106cfuml-1。结合酶切和PCR,对该文库的质量进行了鉴定和统计,文库的平均片段插入长度为1.5kb。采用烯醇酶和UDP葡萄糖脱氢酶的EST作为同源探针,对文库中的功能基因进行筛选,并采用放射性原位杂交法,对扩增文库进行了初筛和复筛,得到了含这两条基因全编码序列的cDNA,烯醇酶为1.8kb,UDP葡萄糖脱氢酶为1.9kb,为今后对该种进行大规模功能基因组学研究奠定基础。; 李钢刘敏蒋彦乔代蓉曹毅; 关键词：盐生杜氏藻 CDNA文库功能基因组学

利用 RAPD分析杜氏藻属 (Dunaliella)嗜盐种间遗传多样性被引量：11: 2002年; 本研究首次运用随机引物对杜氏藻属 (Dunaliella)中 6个嗜盐种的基因组 DNA进行RAPD分析。筛选获得的 6个有效引物共扩增出 98个可重复的 DNA片段 ,其中 95条带具有多态性 ,多态性条带的频率为 96 .9%。根据系统进化树图将杜氏藻属 6个种分别归于亲缘关系相对较远的 2个类群中 ,且; 李钢蒋彦乔代蓉曹毅; 关键词：RAPD分析

盐生杜氏藻3-磷酸甘油脱氢酶基因克隆及其蛋白质结构预测被引量：2: 2006年; 本文通过对盐生杜氏藻(Dunaliellasalina)cDNA文库进行大规模EST测序并结合RACE实验克隆了盐生杜氏藻3-磷酸甘油脱氢酶基因,并且通过Southernblotting实验确定了该基因在这个物种中拷贝数。通过生物信息学的方法,预测该基因所编码的蛋白质结构,验证了该蛋白质具有3-磷酸甘油脱氢酶完整的功能性结构域和磷酸水解酶类结构域。本实验为解释盐生杜氏藻在面临高渗胁迫下快速合成甘油的机制提供了帮助。; 李钢邓运涛任刚杨滔王小行; 关键词：3-磷酸甘油脱氢酶结构域盐生杜氏藻

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李钢