南通大学医学院诊断学教研室
- 作品数：10 被引量：14H指数：2
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- GGT亚组分及基因亚型与肝癌的特异性诊断被引量：1
- 2007年
- 肝病及肝外肿瘤患者血γ-谷氨酰移换酶(GGT,EC 2.3.2.2)总活性均异常,肝癌患者血清经聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳,可将GGT分出十多种亚组分(Ⅰ,Ⅰ′,Ⅱ,Ⅱ′,β,δ,ε,φA,ⅦB,φC,γA,γB),而其中Ⅰ′,Ⅱ,Ⅱ′为肝癌所特有,被称为肝癌特异性GGT(HS-GGT).肝GGT基因表达与肝癌发展密切相关,其基因亚型有胎肝型(F)、胎盘型(P)和肝癌细胞型(H),基因型H主要见于肝癌组织.众多的基础及临床研究证实HS-GGT和基因H亚型为肝癌特异标志,具有较高的特异性和敏感性,其分析有助于肝癌诊断与鉴别.
- 姚登福董志珍顾青青姚敏
- 关键词：肝癌Γ-谷氨酰移换酶
- 酪氨酸羟化酶重组质粒标准品构建被引量：1
- 2010年
- 目的:用T-A克隆法构建含酪氨酸羟化酶(TH)基因的重组质粒,并用实时定量PCR(RQPCR)方法制备标准品。方法:提取小鼠肾上腺髓质组织总RNA,逆转录为cDNA后进行RT-PCR,回收纯化电泳胶,T-A克隆与pGEM-T载体连接,转化Top-10感受态细菌,蓝白斑筛选出阳性菌落后,大量提取质粒,再进行RQPCR反应,最后制得含TH的重组质粒标准品。结果:肾上腺髓质TH的表达,PCR扩增,菌液PCR,测序鉴定均证实TH重组到pGEM-T载体上,经RQPCR定量后得到TH重组质粒标准品的标准曲线。结论:该方法能大量制备TH质粒标准品,并且可推广应用。
- 刘燕彭聿平黄彦黄慧伟邱一华
- 关键词：酪氨酸羟化酶实时定量聚合酶链反应
- CPT-Ⅱ基因4号外显子质粒构建与变异分析被引量：1
- 2011年
- 背景:肉毒碱棕榈酰转移酶Ⅱ(Carnitine palmitoyltransferase-Ⅱ,CPT-Ⅱ)位于细胞线粒体内膜上,是脂肪酸氧化过程中起关键作用的酶之一。目前关于流感病毒感染与CPT-Ⅱ基因变异尚未见报道。目的:构建CPT-Ⅱ第4号外显子(E4)表达质粒及其核苷酸变异分析。方法:从流感病毒感染2例患者外周血中提取DNA,以PCR法扩增CPT-Ⅱ基因的第4号外显子,将其片段插入pGEM-T载体,以T4DNA连接酶,构建T-CPT-ⅡE4,转化大肠杆菌DH5α细胞,增菌,制备质粒,EcoRI酶切、测序和变异分析。结果与结论:成功构建重组表达质粒pGEM-T-CPT-ⅡE4,经DNA测序,证实质粒中插入CPT-Ⅱ第4号外显子完整序列,全长1305个核苷酸,编码435个氨基酸;与Genebank源序列对照比较,发现含有两个变异位点:1618(GTC→ATC)和1858(TTT→TCT),对应氨基酸为V368I和F448L。
- 姚登兵姚敏王理董志珍姚登福
- 关键词：基因扩增流感病毒A
- 乙型肝炎病毒复制上调肝癌组织TGF-β_1和IGF-Ⅱ的表达被引量：2
- 2008年
- 目的分析肝癌组织HBV复制与转化生长因子(TGF)-β1和胰岛素样生长因子(IGF)-II表达的关系。方法以自身对照法收集人肝细胞癌(HCC)组织及癌旁组织,以生物素标记的HBV-DNA探针检测肝癌组织中HBV-DNA,采用免疫组织化学方法检测组织中TGF-β1和IGF-Ⅱ的表达,分析TGF-β1和IGF-Ⅱ表达与HBV复制的临床病理学关系。结果肝癌组织中TGF-β1和IGF-Ⅱ均呈较高表达,其阳性率均为83.3%,肝癌组明显高于癌旁组(P<0.01)。癌灶组TGF-β1和IGF-Ⅱ阳性表达与肿瘤分化程度显著相关(P<0.05);而与肿瘤直径、数目无关(P>0.05);TGF-β1和IGF-Ⅱ表达与HBV复制显著相关,且HBV-DNA阳性组显著高于HBV-DNA阴性组。结论肝癌组织中TGF-β1和IGF-Ⅱ过度表达,且与HBV复制和肝癌的分化程度有关。
- 董志珍姚登福邱历伟吴玮吴信华陆圆圆
- 关键词：转化生长因子-Β1HBV-DNA
- CIPP模式评价PBL教学法联合模拟人在诊断学教学中效果
- 2013年
- 目的:应用CIPP模式评价PBL教学法,联合模拟人在诊断学心肺体征教学中的效果。方法:将临床医学专业本科生120名分为联合教学组60名和对照组60名,从背景、输入、过程和成果评价4个方面分析。结果:(1)问卷结果提示:教师认为现教材需改革86%,赞同PBL教学法73%,赞同引入模拟人98%;认为学生具备PBL教学资质自觉性67%;联合教学法为加强知识点记忆16%;提高学生动手能力32%;锻炼临床思维、提高诊断能力34%。(2)输入评价对PBL模拟人教案、教师资质及诊断学设施评估满意度分别是71%、82%及76%。(3)两组《技能评分表》结果比较:知识点、操作、总成绩联合教学组分别为85.93±0.65分,89.28±2.58分,87.61±0.60分。对照组分别为74.20±1.44分,64.73±1.98分,69.47±1.92分。两组3项指标比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:通过CIPP模式,建立课程评价体系,PBL联合模拟人教学法适合在诊断学教学中开展,且具有明显的优越性。
- 袁心露孙敏周国雄董志珍刘燕
- 关键词：诊断学教学模拟人
- miR-TH克隆及慢病毒载体的构建
- 2010年
- 目的:克隆microRNA-酪氨酸羟化酶(TH),构建慢病毒载体。方法:根据TH基因序列(NM_009377.1),设计并合成4对微小RNA(miRNA)的Oligo DNA,退火形成双链后与pcDNATM 6.2-GW/EmGFP-miRNA载体相连,用Gateway技术将构建好的pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR-TH载体先后与中间载体pDONRTM221、慢病毒载体pLenti6/V5-DEST连接,构建慢病毒表达载体pLenti6/V5-DEST-TH,用脂质体2000(lipofectamine 2000)将慢病毒载体以及包装质粒(pLP1,pLP2和pLP/VSVG)共转染HEK-293FT细胞,收集上清,感染293T细胞株进行滴度鉴定。结果:测序结果表明,4对pcDNATM 6.2-GW/EmGFP-miR-TH表达载体序列与参考序列一致,构建出来的慢病毒载体在293FT细胞中包装成功,并通过293T细胞测得慢病毒滴度为5×106 TU/ml。结论:成功构建了TH的慢病毒干扰载体pLenti6/V5-DEST-TH,为利用RNA干扰技术进一步研究TH基因的功能和作用奠定了基础。
- 刘燕彭聿平黄彦黄慧伟邱一华
- 关键词：微小RNA慢病毒载体酪氨酸羟化酶
- 淋巴细胞不同转染方法比较被引量：2
- 2010年
- 目的：用病毒转染和非病毒转染方法将质粒载体转染进淋巴细胞,比较各种方法转染淋巴细胞的效率,确定适合淋巴细胞最佳转染方法。方法：分别用脂质体转染法,电穿孔转染法,慢病毒感染法,核转染法将构建好的酪氨酸羟化酶（TH）基因干扰质粒转染小鼠淋巴细胞,24小时后经荧光显微镜观察增强型绿色荧光蛋白（EGFP）表达水平,确定转染率。结果：核转染法转染TH基因干扰质粒进入淋巴细胞的效率明显高于其他转染和感染方法,24小时后通过观察EGFP的表达确定转染效率可达50%-60%。结论：核转染方法是转染免疫细胞的有效手段,是体外分子生物学方法研究免疫功能的理想手段。
- 刘燕彭聿平黄彦黄慧伟邱一华
- 关键词：淋巴细胞转染慢病毒
- miRNA沉默缺氧诱导因子1α基因对HepG2细胞增殖的抑制作用
- 2011年
- 目的 探讨以miRNA沉默缺氧诱导因子1 α（HIF-1 α）基因,观察其对肝癌细胞株（HepG2细胞）增殖的抑制作用.方法 构建靶向HIF-1 α基因miRNA干扰载体,转染HepG2细胞,以定量PCR和Western blot分析靶基因和蛋白的表达;构建含缺氧反应元件双荧光素酶报告基因检测转染后相对光单位值;酶联免疫吸附法定量检测血管内皮生长因子和血管生成素2的表达;细胞凋亡及增殖周期以流式细胞仪和膜联蛋白/碘化丙啶（V-FITC/PI）双重染色法分析.采用t检验和两因素方差分析及q或q＇检验分析计量资料.结果 HepG2细胞在转染HIF-1 αmiRNA后72 h,HIF-1 α在转录和翻译水平上分别下降87%和56%双荧光素酶报告基因减少46%,血管内皮生长因子和血管生成素2分别减少54%和36%;癌细胞凋亡率为22.46%±0.61%（P＜0.01）,G1和S期比例分别为61.49%±1.12%和22.40%±0.58%;联合阿霉素处理后,凋亡率增至36.99%±0.88%,G1、S期比例分别为65.68%±0.91%和19.47%±1.34%.结论 HIF-1 α miRNA可抑制HIF-1 α基因表达,联合阿霉素有效调控肝癌细胞周期,促进凋亡、抑制增殖.
- 董志珍姚登福李姗姗姚敏蔚丹丹姚宁华钱雅洁邱历伟
- 关键词：缺氧诱导因子1,Α亚基HEPG2细胞
- PBL教学模式在医学实验诊断学教学中的应用体会被引量：3
- 2012年
- 探讨PBL教学模式在医学实验诊断学中的合理应用,提高医学实验诊断学教学质量。同等条件下甲、乙两班,甲班采用PBL教学模式,乙班采用传统教学模式,并进行比较。在现行的教学考核机制下,PBL教学模式不会对学生的考试成绩造成影响。PBL教学模式能够激发学生的学习兴趣,调动学生的学习主动性,提高学生解决问题的能力,有利于学生综合素质的培养。
- 张弘周国雄黄东凤张海峰刘燕
- 关键词：PBL实验诊断学教学改革
- 甲型流感病毒感染对鼠脑组织线粒体脂代谢功能的影响被引量：4
- 2012年
- 目的:探讨甲型流感病毒(IAV,H3N2)感染对脑组织线粒体脂肪酸代谢功能的影响。方法:以鼠适宜A型流感病毒株(Aichi/2/68)接种不同鼠龄C57BJ/6j(wt/wt)新生鼠、幼鼠和成鼠;以逆转录PCR和实时定量PCR扩增感染组织IAV基因和测序证实,定量脑组织脂质水平并分析线粒体功能。结果:病毒接种鼠的肺组织均可检出大量IAV核酸,部分新生鼠和幼鼠脑、肝组织也可检出IAV核酸;IAV感染后第3天,新生鼠开始出现死亡,幼鼠第7天出现死亡;感染后第10天对照鼠和感染后的成鼠无死亡,幼鼠组死亡14只(17.5%);新生鼠组死亡48只(60.0%);病毒感染后脑组织总脂、游离肉毒碱明显升高(P<0.001)、短链肉毒碱明显减少(P<0.001),长链肉毒碱略为增加。结论:流感病毒感染明显影响脑组织脂肪在线粒体的氧化与代谢。
- 姚敏汪晓莺董志珍姚登兵
- 关键词：甲型流感病毒基因扩增线粒体脂代谢
