朱英奇
- 作品数：18 被引量：62H指数：4
- 供职机构：安徽农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 安徽省5株新型鹅星状病毒的分离鉴定与遗传进化分析
- 2023年
- 为研究近年来引起雏鹅痛风病的新型鹅星状病毒流行毒株的病原学和遗传学特征,于2018—2021年从安徽省疑似感染新型鹅星状病毒的雏鹅中采集病料,使用健康鹅胚进行病毒分离,并对分离到的毒株进行全基因组测序和序列分析。结果表明,共分离鉴定到5例新型鹅星状病毒感染样品,利用鹅胚盲传3代成功分离到5株新型鹅星状病毒,均可在鹅胚上稳定传代,分别将其命名为AHAU2018、DY-19、ZY02、HR2105/2和HR2110/1株。全基因组测序结果表明,5株分离毒株的基因组全长均为7175 nt。系统进化树分析结果表明,5株分离毒株均属于致雏鹅痛风的新型鹅星状病毒,但2019年前的毒株与2019年后的毒株处于不同的进化亚分支上。新型鹅星状病毒在我国已发生变异,出现了新的进化亚分支,但优势基因型是否发生变化还有待进一步研究。
- 贾北平吕炫杨庆王一楠李皖萧解新迪朱英奇王蓓殷冬冬张云凯王晴王桂军
- 关键词：遗传进化分析
- 新型鸭呼肠孤病毒σC蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备被引量：6
- 2014年
- 为了解新型鸭呼肠孤病毒(NDRV TH11株)σC蛋白的抗原性,采用RT-PCR方法扩增了NDRV TH11株σC蛋白的编码基因,将其克隆于原核表达载体pET-30a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达His-σC重组蛋白。SDS-PAGE和Western blot分析表明该重组蛋白获得高效表达,并具有较好的反应原性。以纯化的σC蛋白免疫实验兔制备了抗σC蛋白的多克隆抗体,间接ELISA检测结果显示其效价达1∶20 000以上;间接免疫荧光试验表明,多克隆抗体能够特异性识别NDRV的σC蛋白,显示出σC蛋白具有良好的免疫原性。
- 毕庄莉朱英奇陈宗艳李传峰孟春春王桂军刘光清
- 关键词：新型鸭呼肠孤病毒原核表达多克隆抗体
- 新发鸭源呼肠孤病毒TH11株的生物学特征解析
- 2011年上半年,我国太湖流域的许多养鸭场陆续发生一种新的鸭病毒性传染病,临床主要表现为发病雏鸭软脚,排白色稀粪,发病率约20%々60%,病死率在80%以上,给养鸭业造成了较为严重的经济损失。该类病例的临床特征性病变为:...
- 陈宗艳朱英奇李传峰孟春春刘光清
- 文献传递
- 新发鸭源呼肠孤病毒（TH11株）的分离与鉴定
- 本文从太湖流域某养鸭场分离到一株呼肠孤病毒（DRV TH11株）,该病毒感染的病鸭主要表现软脚和拉稀等主要症状,剖检病变以肝脏出血和脾脏坏死为主要特征。电镜鉴定结果显示,该病原具有呼肠孤病毒的典型形态学特征。动物回归试验...
- 陈宗艳朱英奇李传峰李露付玉志王超刘光清
- 关键词：呼肠孤病毒动物回归试验电镜RT-PCR
- 文献传递
- 鸭源呼肠孤病毒Sigma A蛋白的原核表达及免疫活性检测被引量：2
- 2013年
- 为制备新型鸭源呼肠孤病毒(DRV)TH11株Sigma A蛋白的多克隆抗体,本研究采用RT-PCR方法扩增DRV TH11株Sigma A的编码基因,将其克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。采用SDS-PAGE和western blot对表达产物进行鉴定。结果表明,Sigma A基因不仅可以在大肠杆菌中高水平表达,表达产物的分子量约66 ku,而且表达产物能够被特异性DRV多克隆抗体识别,证明表达的Sigma A蛋白具有良好的免疫活性。以纯化的Sigma A蛋白免疫实验兔制备抗Sigma A蛋白的多克隆抗体,间接ELISA检测结果显示其效价达1∶20 000以上。间接免疫荧光试验表明,多克隆抗体能够特异性识别DRV的Sigma A蛋白,表明Sigma A蛋白具有良好的免疫原性。本研究为进一步研究Sigma A蛋白的功能,以及建立DRV检测方法奠定了基础。
- 朱英奇陈宗艳李传峰孟春春王桂军刘光清
- 关键词：SIGMAA基因原核表达
- 鸡骨髓源树突状细胞的诱导分化及鉴定被引量：4
- 2011年
- 为建立鸡骨髓源树突状细胞(Dcs)的体外培养和鉴定方法,本研究无菌抽取10日龄健康SPF雏鸡的骨髓,体外分离纯化骨髓细胞,将其培养于含有重组的人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和白细胞介素4(rhIL4)的RPMI 1640营养液中,诱导培养鸡骨髓源DCs。采用显微镜观察其体外培养过程中的形态特征及流式细胞仪(FACS)分析其表型特征。结果显示:鸡骨髓细胞经诱导培养,由单一的形态结构转变成多形态结构,培养至8 d后分化成具有典型形态的DCs。FACS分析发现诱导细胞表达了DCs的分子标记CD11c,显示成熟DCs的特征。本研究通过体外培养鸡骨髓细胞成功诱导分化成DCs,为进一步研究鸡DCs在家禽病原致免疫抑制机理中的作用提供了研究材料。
- 李冉王桂军王汉清赵圆圆朱英奇王蓓孙裴秦爱建
- 关键词：树突状细胞体外培养
- 鸭坦布苏病毒E蛋白Domain Ⅲ单克隆抗体胶体金试纸条的创制及应用被引量：1
- 2023年
- 为建立一种快速诊断鸭坦布苏病毒(DTMUV)的方法,以2株(B9D7B8G10和B9D10C7株)抗DTMUV的单克隆抗体制备DTMUV胶体金免疫层析试纸条。采用经典的柠檬酸钠还原法制备胶体金溶液,利用rProtein G琼脂糖凝胶亲和层析法对两株单克隆抗体腹水进行纯化并鉴定;以纯化的B9D7B8G10株单克隆抗体作为标记抗体,通过调节单克隆抗体浓度与pH确定胶体金探针最佳结合条件;同时,在硝酸纤维素膜(NC膜)检测带包被纯化的B9D10C7株单克隆抗体,质控带包被山羊抗小鼠IgG抗体,建立检测DTMUV胶体金免疫层析试纸条;成功建立试纸条后,对试纸条敏感性、特异性、重复性和稳定性进行检测,并与RT-PCR检测方法进行比较,对200份临床疑似感染样品进行检测。结果显示:制备的胶体金试纸条在15 min内即可完成检测,最低检测稀释度为1:50,且不与鸭瘟病毒、番鸭细小病毒、鹅星状病毒、禽白血病病毒发生交叉反应;应用试纸条和RT-PCR方法分别对200份临床疑似样品进行检测,两者符合率达98%。结果表明,制备的胶体金试纸条敏感性高、特异性强、稳定性好、重复性好,为DTMUV的快速检测提供了一种实用检测技术。
- 阚莹张淼卢奇吕炫于胜祖王习强姜雅倩王蓓朱英奇王晴王桂军
- 关键词：胶体金单克隆抗体
- 鸭呼肠孤病毒反向遗传操作系统的建立
- 本研究在对新型鸭呼肠孤病毒TH11株全基因组序列测定的基础上,构建了同时含有T7启动子和DRVTH11株所有基因节段的重组质粒,并在M2节段引入了遗传标记。然后,将这些重组质粒共转染BSR细胞系。观察结果表明,细胞在转染...
- 朱英奇毕庄莉陈宗艳李传峰孟春春王桂军刘光清
- 关键词：病毒拯救
- 鸭坦布苏病毒囊膜糖蛋白结构域3(ED3)单克隆抗体的制备及其中和活性分析
- 2022年
- 目的以纯化的重组鸭坦布苏病毒(DTMUV)囊膜糖蛋白结构域3(ED3)蛋白作为免疫原,制备ED3蛋白的单克隆抗体并研究其中和活性。方法利用反转录PCR扩增DTMUV AH-F10株ED3基因,构建重组表达载体pET32a-ED3并转化至表达菌株Rosetta,诱导表达后利用镍柱亲和层析法纯化目的蛋白。以纯化的目的蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫后小鼠的脾细胞与Sp2/0细胞进行细胞融合,采取有限稀释法筛选杂交瘤细胞并大量制备单克隆抗体。利用Western blot法、间接免疫荧光法、ELISA及分型试剂盒对单克隆抗体进行鉴定并通过病毒中和试验检测抗体中和效价。结果成功表达DTMUV ED3蛋白,并制备3株ED3蛋白的鼠源单克隆抗体B9D10C7、B9D7B8G10、B9D7B8F11,其亚型分别为IgG1、IgG2a、IgG2b,腹水间接ELISA检测抗体效价均达到1∶51200,且能够识别DTMUV的E蛋白,具有一定的中和活性。结论获得3株特异性强、敏感性高的DTMUV ED3的单克隆抗体。
- 张淼吕炫张冲阚莹王若洁于胜祖卢奇祝萌方天刘丹朱英奇曹守林王蓓王蓓殷冬冬王桂军
- 关键词：原核表达单克隆抗体
- 一株鹅星状病毒变异毒株的基因组特征与致病性分析被引量：1
- 2022年
- 旨在研究引起雏鹅痛风的新型鹅星状病毒流行株特征。本试验从安徽省鹅星状病毒阳性雏鹅组织中进行病毒分离,并对分离的毒株进行全基因组测序,随后进行遗传进化分析。结果表明,病毒液接种9~11日龄鹅胚可成功分离到病毒,将其命名为GASTV-ZM株。IFA(indirect immunofluorescence assay)鉴定为阳性。基因组序列分析表明,ZM株鹅星状病毒基因组全长7175nt,ORF2基因核苷酸和氨基酸与2014—2020年间分离毒株的同源性分别为96.7%~98.9%和96.9%~99.0%,ORF2基因编码的氨基酸序列结果显示,3个氨基酸突变位点与以往存在显著差异,ZM株与2016年以来在我国流行的新型鹅星状病毒处于同一进化分支,与2020分离株HNSQ-6株和XT1株同源性较高。本研究为进一步研究该病毒的致病性和致病机理奠定基础。
- 吕炫贾北平祝萌于胜祖张淼王蓓朱英奇张云凯王晴王桂军
- 关键词：遗传进化分析
