王大刚
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所更多>>
- 发文基金：美国中华医学基金国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 膜结合型干细胞因子促进白血病细胞K562的增殖和集落形成被引量：1
- 2009年
- 目的:探讨膜结合型干细胞因子(membrane-bound stem cell factor,m-SCF)在白血病细胞中的作用。方法:克隆并构建携可溶型干细胞因子(soluble stem cell factor,s-SCF)前体的真核表达质粒pTARGET-s,采用Overlap PCR法去除外显子6序列,进一步构建m-SCF的表达质粒pTARGET-m,DNA测序鉴定。通过脂质体介导分别将上述载体和空载体pTARGET转染白血病K562细胞,用G418筛选稳定表达细胞株,并用RT-PCR、Western blotting法鉴定。通过CCK-8细胞增殖实验以及集落形成实验观察不同细胞株体外增殖特点。结果:成功构建了s-SCF和m-SCF的真核表达载体,获得了稳定转染细胞株K562-V、K562-S、K562-M。U底培养条件下,K562-M增殖能力明显高于K562-V和K562-S(均P<0.01)。K562-M集落形成率显著高于K562-V和K562-S(均P<0.01),且集落形态大于其他两种细胞。结论:m-SCF与C-kit之间的并置性作用显著促进白血病细胞的增殖。
- 王大刚郑国光种靖慧马翠花林永敏吴克复
- 关键词：C-KIT白血病
- 干细胞因子逆转录病毒表达载体的构建及体外性质研究被引量：1
- 2010年
- 目的通过逆转录病毒介导两种类型人干细胞因子在NIH3T3细胞中稳定表达，并研究它们对白血病细胞的作用。方法用DNA重组技术构建并鉴定可溶型及膜结合型干细胞因子的重组逆转录病毒表达载体MSCV—PGK—GFP—sSCF、MSCV—PGK—GFP—mSCF，与空载体对照MSCV—PGK—GFP分别转染Phoenix细胞包装病毒，并感染NIH3T3细胞，流式分选术获得3种阳性细胞，CCK8法分别检测与其共培养的K562细胞的增殖情况。结果成功构建了sSCF、mSCF逆转录病毒表达载体；经Phoenix包装的重组及对照逆转录病毒成功感染NIH3T3细胞，获得了稳定表达细胞株NIH3T3-S、NIH3T3-M和对照细胞株NIH3T3-V。共培养中NIH3T3-S、NIH3T3-M均可促进K562细胞的增殖，且在低血清条件下，NIH3T3-M的作用高于NIH3T3-S。结论可溶性及膜结合SCF分别通过旁分泌和并置性作用促进白血病细胞的增殖。
- 刘淑艳王大刚胡林萍卫佳王金宏种靖慧马翠花许琳琳郑国光
- 关键词：干细胞因子逆转录病毒
