冯友亮
- 作品数：6 被引量：18H指数：3
- 供职机构：青岛大学医学院附属医院更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 双酚A对体外大鼠睾丸支持细胞闭锁蛋白Occludin表达的影响被引量：2
- 2012年
- 目的观察双酚A（BPA）对体外大鼠睾丸支持细胞增殖能力与闭锁蛋白Occludin（OCLN）表达的影响，探讨BPA对精子发生的损伤机制。方法体外分离培养雄性Wistar大鼠睾丸支持细胞，油红O染色鉴定。实验分为BPA染毒组（25laM、50uM和100IIM分别处理细胞24h）、溶剂对照组（无血清DMEM／F12＋DMSO＋细胞悬液）和空白对照组（无血清DMEM／F12）。CCK-8法测支持细胞增殖活性，WesternBlot法检测OCLN表达水平。结果分离培养大鼠睾丸支持细胞纯度〉90％。CCK-8实验结果显示：BPA对支持细胞增殖活性具有抑制作用，BPA浓度〉103uM时，存活率明显降低，细胞存活率〈44％，其差异有统计学意义（P〈0．05）。WesternBlot法检测结果显示，OCLN蛋白表达随着BPA染毒剂量的增加而降低，呈剂量依赖性，不同染毒剂量组与对照组比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论BPA可抑制睾丸支持细胞增殖活性和OCLN的表达，干扰支持细胞正常的生精过程。
- 冯友亮郝伟玉胡建听王沛涛姚如永王新生
- 关键词：双酚A睾丸支持细胞精子发生
- 双酚A干扰大鼠生精过程时TJ渗透性屏障的体外研究(英文)被引量：2
- 2012年
- 目的:研究体外大鼠睾丸支持细胞紧密连接蛋白(SCJP)在类雌激素-双酚A(BPA)干扰下的损伤机制。方法:对Wistar大鼠睾丸支持细胞(Sertoli细胞)离体原代培养4-5d,通过双室培养模型建立体外紧密连接(TJ)渗透性屏障,并测量其跨上皮电阻值(TER)反应紧密连接结构的形成及BPA对紧密连接的损害程度。设溶剂(DMSO)做阴性对照,以终浓度为25μM、100μM的BPA作用于支持细胞24h,MTT法测不同浓度BPA作用的Sertoli细胞增殖活性。Western bloting观察occludin、ZO-1、Cx43表达的变化。结果:成功分离并培养Wistar大鼠睾丸支持细胞,并建立良好的体外TJ屏障模型。双室培养支持细胞上皮TER值在培养的d4达到顶峰,然后在d4-9维持相对较稳定的状态,d4以200μM,100μM,25μM BPA染毒,分别于染毒后24,48,72,96和120h测TER:与DMSO溶剂对照组相比,200μM,100μM的BPA组TER值明显下降(P<0.05),而25μM的BPA组在染毒后TER值无明显变化(P>0.05)。MTT结果显示:经不同浓度BPA作用24h后,Sertoli细胞的吸光度(OD值)随着染毒剂量的增加而逐渐降低。102、103μM浓度组与溶剂对照组有显著性差异(P<0.05),而10-2、10-1、100、101μM组和溶剂对照组无显著性差异(P>0.05)。Western blot结果显示:occludin、ZO-1、Cx43在各剂量组均有表达,与溶剂对照组相比,occludin、ZO-1表达均分别随作用剂量的增加而降低:25μM组、100μM组与溶剂对照组相比,差异均存在显著性(P<0.05);100μM组与25μM组相比,差异亦存在显著性(P<0.05)。Cx43的表达却随染毒剂量的增加而增加,与溶剂对照组相比,25μM组表达无明显增加(P>0.05),而100μM组则明显增加(P<0.05);与25μM组相比,100μM组表达明显增加(P<0.05)。结论:双酚A可通过损伤支持细胞连接蛋白正常表达,破坏了TJ屏障渗透性,从而影响正常的精子形成过程。
- 冯友亮尹营营王新生王沛涛
- 关键词：双酚A精子形成
- 温度对体外大鼠睾丸支持细胞增殖及occludin蛋白表达的影响被引量：5
- 2012年
- 目的:通过观察不同温度对原代大鼠睾丸支持细胞增殖作用与紧密连接蛋白occludin(OCLN)表达的影响,探讨温度因素在男性生殖功能降低或男性不育中的作用机制。方法:体外分离培养雄性Wistar大鼠睾丸支持细胞(Sertoli cell,SC),油红O染色及免疫组化FasL鉴定。实验分为对照组(34℃)和实验组(35℃、36℃、37℃、38℃、39℃)。在相应的温度下培养4 d后,CCK-8法检测SC增殖作用,HE染色观察细胞形态及结构,Western印迹法和免疫荧光法检测OCLN表达水平。结果:体外培养SC的纯度为(96.20±1.95)%,CCK-8结果显示,细胞增殖活性在34～36℃时逐渐增强,36～39℃时逐渐降低,并在镜下观察发现细胞核固缩、裂解明显;免疫荧光及Western印迹显示,36℃时OCLN表达量最高;高于36℃时,OCLN表达量随着温度的增加而降低(P<0.01)。结论:温度升高(>36℃)抑制SC的增殖活性,并降低SC紧密连接蛋白的表达量。因此,高温对SC活性和紧密连接完整性的影响,可能是导致男性生育能力下降或不育的机制之一。
- 胡建听邵翠华王沛涛刘勇郝伟玉冯友亮刘世海王新生
- 关键词：温度支持细胞紧密连接蛋白精子发生
- 低氧对原代支持细胞增殖能力和occludin蛋白表达的影响被引量：5
- 2013年
- 目的:观察低氧对原代大鼠睾丸支持细胞生长活性、occludin蛋白表达的影响。方法:18～22日龄Wistar大鼠,通过两步酶消化法,建立原代支持细胞培养体系,经油红O、免疫荧光法鉴定。传代后随机分为以下氧浓度组进行培养:20%、15%、10%、5%和1%。分别培养至6、12、24、48、72 h,CCK-8测定细胞增殖活性,West-ern印迹测定occludin蛋白表达量,并进行差异性分析。结果:油红O染色见胞质内脂滴染成红色,免疫荧光见FasL蛋白表达阳性,细胞纯度>95%。与20%氧浓度相比,细胞在15%和10%氧浓度下增殖率逐渐降低,5%和1%氧浓度下,细胞增殖率明显下降(P<0.01);从12 h开始,随着氧浓度降低和时间延长,occludin表达量明显下降(P<0.01)。结论:低氧会抑制支持细胞生长,并减少occludin蛋白表达。推测低氧环境损伤支持细胞参与的血睾屏障完整性,影响睾丸的生精过程。
- 郝伟玉邵翠华冯友亮胡建听李强王洪强王沛涛
- 关键词：低氧支持细胞细胞增殖OCCLUDIN
- 精索静脉曲张不育患者生殖激素和精浆生化分析被引量：4
- 2012年
- 目的观察精索静脉曲张（vc）患者的生殖激素与精浆生化的关系。方法99例患者根据阴囊彩色多普勒超声诊断分为3组：vc不育组、原发性不育组和正常生育组，分别进行计算机辅助精子分析、电化学发光法测定生殖激素和分光光度法测定精浆生化。结果vc组和原发性不育组精液质量下降，睾酮（T）含量高于正常生育组，VC组酸性磷酸酶、锌低于原发性不育组和正常生育组，VC组T和锌存在负相关。结论VC可能会影响前列腺与下丘脑．垂体．性腺轴分泌功能，而两者之间的损害程度可能相关。
- 郝伟玉冯友亮李小朋刘忠强王新生王沛涛
- 关键词：精索静脉曲张男性不育精液分析生殖激素精浆
- 双酚A对大鼠睾丸紧密连接蛋白Occludin的体外影响
- 目的：观察双酚A(BPA)对体外大鼠睾丸支持细胞紧密连接occludin蛋白表达的影响,探讨BPA对精子发生的损伤机制。
方法：原代培养Wistar大鼠睾丸支持细胞(Sertoli细胞)4～5天,双室培养模型的基础...
- 冯友亮
- 关键词：双酚A睾丸支持细胞体外培养
- 文献传递
