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以轮状病毒VP6为载体的RV/HBV嵌合蛋白的构建及抗原性研究(英文): 2012年; 目的构建轮状病毒(rotavirus,RV)VP6载体及携带乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)外源抗原表位的嵌合质粒,进一步探索研发携带HBV抗原表位的重组嵌合疫苗的技术。方法运用基因克隆和重组技术,构建轮状病毒VP6载体,同时将HBV编码中和抗原表位21个氨基酸的基因序列构建到VP6载体上相应酶切位点,在大肠杆菌中表达嵌合蛋白,并进行相关免疫学性质的研究。结果重组嵌合蛋白rVP6/Hs可在大肠杆菌系统中高效表达,表达的蛋白占菌体总蛋白的36.2%,纯度90%以上;ELISA结果显示,嵌合蛋白可与抗-HBs抗体反应;Western blot实验表明,嵌合蛋白可分别与抗VP6豚鼠血清抗体和乙型肝炎患者血清抗体特异性结合。结果表明所表达的嵌合蛋白具有较好的抗原反应性。结论成功构建载体质粒pETP6v及携带HBV外源抗原表位的嵌合质粒pETP6/Hs,对研究病毒抗原表位具有重要的价值;所构建和表达的携带HBV S抗原表位的重组嵌合蛋白在研发RV/HBV重组嵌合蛋白疫苗方面具有重要潜在应用前景。; 袁静吴绪伟郑红梅曹向红潘小霞滕玉梅李琦涵陈元鼎; 关键词：乙型肝炎病毒

痘苗病毒/T7 RNA聚合酶辅助的原核基因在真核细胞中的表达: 轮状病毒(rotavirus,RV)是婴幼儿胃肠炎的主要病原体,据统计全球每年死于RV感染者约611000,RV感染绝大多数发生在发展中国家。轮状病毒属于呼肠病毒科(Reoviridae)轮状病毒属(Rotavirus)...; 潘小霞; 关键词：真核细胞

Ⅲ型脊髓灰质炎病毒抗原表位嵌合蛋白的免疫学研究: 2018年; 目的:对以轮状病毒(RV)重组VP6蛋白为载体插入Ⅲ型脊髓灰质炎病毒(PV3)VP1蛋白上1个抗原表位(VP1的91~102、254和168位氨基酸残基)所构建的嵌合蛋白6F/PV3N1进行体外免疫学研究。方法:利用分子克隆和基因重组技术将PV3抗原表位插入RV载体蛋白,构建重组抗原表位嵌合蛋白表达质粒,转染大肠杆菌后表达重组蛋白,经SDS-PAGE确认表达产物,再通过Western印迹分析嵌合蛋白的抗原反应性。结果:用载体蛋白VP6F、轮状病毒Wa病毒株免疫的豚鼠血清抗体分别都能与VP6F和6F/PV3N1产生特异性结合;PV3免疫的豚鼠血清抗体只能与6F/PV3N1产生特异性结合,不能与VP6F产生特异性结合;PV1免疫的豚鼠血清抗体则不能与6F/PV3N1和VP6F产生特异性结合。结论:PV1、PV3之间不存在交叉反应现象,以RV VP6为载体构建的嵌合蛋白6F/PV3N1具有较好的免疫原性,为研发RV/PV3嵌合疫苗提供了基础。; 杨筱舟王晶夏文跃潘小霞赵冰心滕玉梅文喻玲陈元鼎; 关键词：轮状病毒脊髓灰质炎病毒抗原表位嵌合蛋白免疫原性

轮状病毒VP4抗原表位在VP6载体蛋白同一位点表达比较研究被引量：1: 2015年; 目的:评价轮状病毒(RV)VP4两个抗原表位插入VP6载体蛋白同一位点所表达的重组嵌合蛋白免疫学性质及在研制嵌合蛋白疫苗中的意义。方法:采用分子克隆和基因重组技术将RV VP4的两个抗原表位插入到VP6载体蛋白同一位点上,构建重组抗原表达质粒,表达携带不同抗原表位的重组嵌合蛋白,用Western blot和中和试验分析重组嵌合蛋白的抗原反应性和免疫原性。结果:成功构建了两个嵌合蛋白表达质粒,并在大肠杆菌中高效表达;表达的嵌合蛋白可与相应抗体特异性反应;可诱导豚鼠产生特异性血清抗体;抗嵌合蛋白血清抗体可特异性识别载体蛋白VP6F,Wa株病毒的VP6和VP4蛋白,可中和Wa株病毒在MA104细胞上的感染性;结果表明,所构建和表达的两个以VP6为载体的VP4抗原表位嵌合蛋白具有较高抗原反应性和免疫原性;嵌合蛋白携带的VP4抗原表位具有增强载体蛋白免疫原性作用;为研制新型RV重组蛋白疫苗的奠定了较好的基础。; 夏文跃王晶赵冰心潘小霞文喻玲陈元鼎; 关键词：轮状病毒抗原表位免疫原性

A组人轮状病毒VP3基因的原核表达及鉴定被引量：2: 2012年; 目的克隆并原核表达A组人轮状病毒(Rotavirus,RV)TB-Chen株结构蛋白VP3基因,并进行分子系统进化和基因分型。方法采用PCR法扩增A组人轮状病毒TB-Chen株VP3编码基因,克隆至pETL载体上,构建重组原核表达质粒pET-VP3,转化大肠杆菌BL21(DE3),并进行表达。表达的重组蛋白经SDS-PAGE及Western blot鉴定后,对VP3基因进行分子系统进化及基因型分析。结果重组表达质粒pET-VP3经双酶切及测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为98 000,以包涵体形式存在;重组VP3蛋白可被抗SA11株全病毒豚鼠免疫血清识别;迄今发现的A组RV VP3可分为7个基因型,TB-Chen株和SA11株VP3基因分别属于M2型和M5型。结论成功原核表达了A组人RV TB-Chen株VP3蛋白,为进一步研究VP3的结构功能及开发新型RV疫苗、诊断试剂和治疗药物奠定了基础。; 张顺潘小霞袁静文喻玲陈元鼎; 关键词：轮状病毒属 VP3基因原核细胞基因分型

轮状病毒结构蛋白VP6的原核表达及其作为检测抗原在病毒检测中的应用被引量：2: 2012年; 目的原核表达轮状病毒(Rotavirus,RV)结构蛋白VP6,并初步应用于以VP6为检测抗原检测RV血清抗体的ELISA方法,用于不同型RV免疫后抗体水平的检测。方法提取TB-Chen株RV基因组RNA,采用RT-PCR法扩增VP6基因,插入表达载体pETL中,构建重组表达质粒pET-VP6,转化E.coli BL21(DE3),表达rVP6。表达的rVP6经纯化后,与TB-Chen株(G2P[4]型)、Wa株(G1P[8]型)和SA11株(G3P[2]型)RV分别免疫豚鼠,制备血清抗体,以SA11株血清抗体,经Western blot鉴定纯化的rVP6,以纯化的rVP6为检测抗原,采用ELISA法检测不同型RV免疫血清抗体。结果重组表达质粒pET-VP6经双酶切和测序鉴定证明构建正确;表达的rVP6相对分子质量约为45 000,表达量占菌体总蛋白的34.7%;纯化的rVP6纯度达90%以上,蛋白浓度为8.304μg/μl,可与豚鼠抗RV SA11株血清抗体发生特异性反应;以纯化的rVP6为检测抗原,可检测TB-Chen、Wa、SA11株和抗rVP6的豚鼠免疫血清抗体。结论成功地在大肠杆菌中表达了rVP6,以具有共同组/亚组抗原特异性的rVP6作为检测抗原,可检测同一组/亚组内不同型的RV血清抗体,为研制以VP6为检测抗原检测RV感染的ELISA试剂盒奠定了基础。; 袁静潘小霞滕玉梅姬秋彦文喻玲陈元鼎; 关键词：轮状病毒属酶联免疫吸附测定

乙型肝炎病毒基因型的全球分布及相关研究进展被引量：3: 2011年; 乙型肝炎（简称乙肝）是由乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）感染引起的人类急性和/或慢性肝脏疾病。全世界大约20亿人已感染HBV,其中超过3.6亿人为慢性乙肝患者,并有罹患肝硬化和肝癌的高风险。; 袁静潘小霞张顺陈元鼎; 关键词：乙型肝炎病毒基因型地理分布

轮状病毒VP_6蛋白免疫学研究进展被引量：8: 2011年; 轮状病毒(Rotavirus,RV)是引起婴幼儿急性胃肠炎的主要致病病原体之一。作为主要结构蛋白和组抗原蛋白的VP6,在病毒复制过程中具有重要的生物学意义。近年研究发现,VP6在免疫保护反应方面也发挥较重要的作用。现就VP6蛋白的生物学和免疫学研究最新进展,以及其在研制RV重组疫苗中的潜在应用价值作一简要评述。; 潘小霞张顺陈元鼎; 关键词：轮状病毒免疫学性质疫苗

Ⅱ型脊灰病毒抗原表位嵌合蛋白的免疫学研究: 2016年; 目的:评价以轮状病毒(RV)重组VP6蛋白为载体插入Ⅱ型脊髓灰质炎病毒(PV2)VP1蛋白上的1个抗原表位构建而成的嵌合蛋白的体外免疫学性质。方法:采用分子克隆和基因重组技术将PV2抗原表位插入到RV载体蛋白上,在大肠杆菌中表达并用SDS-PAGE确认表达产物,再通过动物免疫、Western blot、免疫荧光和病毒血清抗体中和试验分析嵌合蛋白的免疫学性质。结果:成功构建了以VP6为载体的PV2抗原表位嵌合蛋白6F/PV2N1,并且在E.coli系统中高效表达,嵌合蛋白免疫的豚鼠血清抗体对RV和PV2具备较好的中和活性。结论:以RV VP6为载体构建的嵌合蛋白具有较好的免疫原性,免疫豚鼠产生血清抗体可中和RV和PV2在体外细胞上的感染;进一步为研发RV/PV2嵌合疫苗提供了较好的基础。; 王晶夏文跃潘小霞赵冰心滕玉梅李传印杨筱舟文喻玲陈元鼎; 关键词：轮状病毒脊灰病毒抗原表位嵌合蛋白免疫原性

痘苗病毒/T7 RNA聚合酶辅助的原核基因在真核细胞中的表达(英文): 2011年; 痘苗病毒/T7RNA聚合酶这一瞬时表达系统由于具有很多优于其他表达系统的特点而被广泛地应用于表达外源蛋白。TB-Chen株轮状病毒的VP6 DNA编码片段插入到原核质粒pETL的噬菌体T7启动子和终止子之间,获得重组表达质粒pET-VP6。构建好的重组表达质粒pET-VP6通过脂质体转染到真核细胞MA104中,用携带噬菌体T7RNA聚合酶基因的重组痘苗病毒vTF7-3再感染,可在细胞检测到目的蛋白VP6的表达。研究结果还显示,痘苗病毒vTF7-3感染后,细胞病变较快,严重影响了蛋白的表达量。结果提示,如果能降低痘苗病毒vTF7-3的致细胞病变作用而不影响其在细胞中合成T7 RNA聚合酶的能力,蛋白可能会得到高效表达。为进一步研究VP6基因的特性及更好地应用痘苗病毒/T7 RNA聚合酶这一瞬时表达系统提供理论基础。; 潘小霞张顺文喻玲袁静陈元鼎; 关键词：真核细胞 T7 RNA聚合酶

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潘小霞

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