伊海英
- 作品数：7 被引量：52H指数：4
- 供职机构：内蒙古医学院基础医学院更多>>
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- 表皮细胞体外去分化模型的建立被引量：5
- 2008年
- 目的探讨表皮细胞体外去分化模型的建立方法。方法人表皮角质形成细胞（HEK）体外培养至24代，细胞体积膨大，形态发生明显改变。碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）诱导48h后，观察细胞贴壁培养4、12、24、48、72h时的生长及集落形成情况。以同期培养的表皮细胞作为阴性对照，采用免疫组织化学的方法检测实验组及对照组，B1整合素、CK19、CK14、CK10在表皮细胞中的表达差异；流式细胞仪测定细胞周期的改变。结果bFGF诱导培养48h后老化的表皮细胞周围分散出现幼稚型细胞，这些细胞体积小，形态均一，折光性强，核浆比大，并呈克隆样生长。免疫组织化学染色结果显示，bFGF诱导培养后，表皮细胞中CK19、CK14表达增强，而CK10表达减弱。流式结果显示：bFGF诱导培养后，细胞周期中G0／G1的细胞为53．08％，S期细胞为32．71％，G2期细胞为14．21％，而对照组中处于G0／G1、S期及G2期的细胞分别为63．9％、18．98％及17．12％。结论bFGF能够在体外诱导表皮细胞逆转分化形成幼稚型克隆形成细胞，具体机制需要进一步深入研究。
- 英兰孙晓艳付小兵崔明玉刘文忠伊海英高瑗
- 关键词：表皮细胞分化干细胞
- 碱性成纤维细胞生长因子基因真核表达载体的构建
- 2008年
- 目的:构建碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因真核表达载体pEGFP-C3-bFGF,为基因水平研究bFGF在表皮细胞去分化过程中的调控机制提供实验参考。方法:参考分子克隆技术,采用聚合酶链反应(PCR)的方法从PBR322-bFGF质粒中扩增bFGF,同时在其两端引入HindⅢ和EcoRⅠ限制性内切酶酶切位点,将bF-GFcDNA定向插入pEGFP-C3的多克隆位点中,构建真核表达质粒pEGFP-C3-bFGF,并对重组子进行DNA序列测定。结果:电泳初步鉴定获得的连接产物为重组质粒pEGFP-C3-bFGF;对重组子中含有bFGF基因的一段进行测序,测序结果经Vector NTI软件分析,证实获得bFGF基因。结论:将bFGF插入pEGFP-C3的C末端,可以提高bFGF在真核细胞中的表达,而且不影响其目的蛋白的结构和功能,对研究bFGF调控表皮细胞去分化的分子机制具有重要的意义。
- 伊海英孙晓艳付小兵任明姬张广田高瑗
- 关键词：碱性成纤维细胞生长因子基因表达聚合酶链反应
- 碱性成纤维细胞生长因子诱导表皮细胞去分化的初步研究被引量：13
- 2008年
- 目的初步探索表皮细胞体外去分化模型的建立方法。方法HEKa细胞体外培养6～7代时开始出现老化迹象,细胞体积膨大,形态发生明显改变。加入浓度为100ng/ml的碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth fac-tor,bFGF)诱导液分别培养6、12、24、48、72h后,MTT法检测bFGF对表皮细胞体外生长的促进作用。同时采用免疫细胞化学染色法、流式细胞检测技术、RT-PCR法检测bFGF诱导培养后,表皮细胞的表型及功能的改变。结果MTT检测结果显示浓度为100ng/ml,诱导时间为36～48h为诱导表皮细胞去分化的最佳实验条件。在bFGF的作用之下,老化的HEKa细胞周围开始出现新生的表皮干细胞样克隆。免疫细胞化学检测结果表明,实验组细胞中β1整合素、CK19、CK14的表达增强,而CK10作为终末分化细胞的标志,在bFGF诱导组中的表达明显降低。流式细胞检测分析显示bFGF作用后,实验组CK19表达阳性的细胞与对照组相比明显增多(分别为74.77%和15.74%);CK14表达阳性的细胞也由原来的67.26%增加至被检测细胞总数的87.14%。而bFGF诱导作用后,被检测细胞中表达CK10阳性的细胞数量较对照组明显下降(分别为4.56%和98.56%)。此外,RT-PCR检测结果同样再次支持了表皮细胞去分化的理论。在bFGF诱导组中,β1整合素、CK19、CK14mRNA转录水平明显上调,而CK10mRNA表达则明显下降。结论bFGF能够在体外诱导表皮细胞逆转分化形成幼稚型表皮前体干细胞,但其涉及具体机制需要进一步研究。
- 孙晓艳付小兵伊海英刘惠玲孙同柱
- 关键词：表皮细胞去分化免疫细胞化学流式细胞检测MTT
- 胎儿皮肤发育中成纤维细胞生长因子受体-2表达的免疫组织化学研究被引量：4
- 2008年
- 目的研究不同发育时期胎儿皮肤中成纤维细胞生长因子受体-2(fibroblast growth factor receptor 2,FGFR2)的表达及分布,探索FGFR2在皮肤发生、发育中的作用。方法对不同发育时期胎儿皮肤取材、固定,制成石蜡切片,S-P法检测FGFR2的表达。结果胚胎发育期FGFR2在表皮细胞表达较弱,甚至呈阴性表达。表皮分层期时,表皮层开始增厚,并可见毛囊的初级原基;FGFR2在表皮层和毛囊初级原基内呈弱阳性表达。毛囊形成期时,毛囊的结构初步形成,体积细小,形态幼稚;FGFR2主要在毛母质细胞内表达,并且随着胎龄增加,表达范围逐渐扩大,表达量逐渐增多。毛囊发育成熟期后,毛囊的结构发育相对成熟,FGFR2则在表皮层、毛细血管内皮细胞及皮脂腺的导管部均有表达,尤其在毛母质细胞呈强阳性表达。结论FGFR2在胎儿皮肤中的表达与分布与毛囊的发生、发育密切相关。FGFR2的表达上调可能促进毛囊干细胞的增殖,并诱导其定向分化形成终末组织功能细胞。
- 伊海英孙晓艳付小兵任明姬张广田刘惠玲
- 关键词：胚胎发育FGFR2免疫组织化学
- 碱性成纤维细胞生长因子基因转染人表皮细胞的免疫细胞化学研究
- 2009年
- 目的:观察碱性成纤维细胞生长因子基因真核表达载体(pEGFP-C3-bFGF)转染体外培养的人表皮细胞后细胞表型的变化。方法:通过脂质体(LipofectamineTM2000)转染法,将pEGFP-C3-bFGF转染至人表皮细胞系(HEKa细胞)中,36h后采用免疫细胞化学染色法检测分析β1整联蛋白、CK19、CK14及CK10在表皮细胞中表达的变化,同时以pEGFP-C3质粒转染的表皮细胞作为对照。结果:实验组细胞中CK19、CK14的表达增强,而CK10作为终末分化细胞的标志表达减弱。结论:pEGFP-C3-bFGF转染后,分化成熟的表皮细胞向幼稚型细胞方向发生去分化,为探讨bFGF调控表皮细胞去分化的分子机制提供实验参考。
- 任明姬伊海英孙晓艳张广田付小兵
- 关键词：碱性成纤维细胞生长因子基因转染表皮细胞去分化
- 碱性成纤维细胞生长因子的研究进展被引量：33
- 2008年
- 伊海英孙晓艳付小兵任明姬张广田
- 关键词：成纤维细胞生长因子2受体成纤维细胞生长因子
- 碱性成纤维细胞生长因子基因转染人表皮细胞及其表达
- 2009年
- 目的观察碱性成纤维细胞生长因子基因真核表达载体（pEGFP—C3-bFGF）能否转染体外培养的人表皮细胞并表达。方法采用脂质体（LipofectamineTM2000）转染法，将pEGFP—C3-bFGF转染至人表皮细胞系（HEKa细胞）中，在荧光显微镜下观察其瞬时表达及细胞形态。以同期培养的表皮细胞作为阴性对照，免疫细胞化学染色和免疫荧光标记法检测实验组及对照组中β1整合素、CK19、CK14及CK10在表皮细胞中表达的差异。结果荧光显微镜下观察基因转染率为31，6％，转染的细胞体积小，呈圆形或圆梭形，核质比大。免疫细胞化学染色结果显示，实验组细胞中CK19、CK14表达增强，CK10表达减弱。免疫荧光染色结果显示，转染阳性细胞β1整合素弱表达分布在胞膜上，CK19、CK14在胞膜和胞质中表达，CK10表达为阴性。结论pEGFP—C3-bFGF能够转染至人表皮细胞并表达，为探讨bFGF调控表皮细胞去分化的分子机制提供实验参考。
- 伊海英孙晓艳付小兵任明姬张广田
- 关键词：碱性成纤维细胞生长因子表皮细胞基因转染
