刘惠玲
- 作品数：12 被引量：28H指数：3
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- 碱性成纤维细胞生长因子影响端粒酶逆转录酶在表皮细胞中的表达
- 孙晓艳刘惠玲付小兵
- 5-AzaC对表皮干细胞Oct4基因的诱导作用研究被引量：1
- 2009年
- 目的：探讨并建立表皮干细胞Oct4基因的非转基因诱导方法。方法：分离培养人表皮干细胞,在培养至3-5d出现克隆性生长时加入工作浓度为10μmol/L的5-AzaC,24h后再诱导1次。采用RT-PCR方法,检测经5-AzaC刺激48h后的表皮干细胞Oct4基因转录水平。结果：PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳后,出现247bp（Oct4）和219bp（β-actin）目的片段明亮的特异性条带。结论：5-AzaC能有效激发出表皮干细胞Oct4基因的转录。
- 刘惠玲伍明俊陈美霞李美蓉江梦溪伍志强卢学春赵亚力韩为东付小兵
- 关键词：表皮干细胞OCT4
- bFGF诱导表皮细胞去分化形成短暂扩充细胞
- 孙晓艳刘惠玲付小兵
- 碱性成纤维细胞生长因子对表皮细胞中端粒酶反转录酶表达的影响被引量：1
- 2011年
- 目的观察表皮细胞去分化过程中人端粒酶反转录酶(hTERT)的表达差异及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的影响。方法采用bFGF诱导表皮细胞去分化形成表皮前体干细胞,免疫细胞化学染色法检测bFGF诱导培养后表皮细胞表型的改变,并用流式细胞法、免疫荧光染色及TRAP-银染法检测bFGF诱导培养后表皮细胞中hTERT的表达差异。以同等条件下未经bF-GF处理的人表皮细胞为对照组,同期分离培养的人在体表皮干细胞为阳性对照组。结果免疫细胞化学染色显示,bFGF诱导培养后表皮细胞中β1-integrin、CK19、CK14表达明显增强,而CK10表达明显降低。流式细胞仪检测显示,bFGF诱导后实验组、对照组及阳性对照组hTERT阳性的细胞亚群分别占被检测细胞总数的98.41%、0.77%及99.76%。TRAP-银染法检测显示实验组hTERT表达活性明显上调,且与阳性对照组比较无显著差异。间接免疫荧光染色显示实验组去分化来源表皮干细胞和在体表皮干细胞中的hTERT分布存在着亚细胞位点差异。结论 bFGF可诱导表皮细胞去分化并重新获得表皮干细胞的表型,这一过程不但可引起hTERT的表达及活性改变,而且能从亚细胞水平上诱导其发生位点迁移。
- 孙晓艳刘惠玲付小兵
- 关键词：去分化成纤维细胞生长因子2
- 去分化来源表皮干细胞的分离与鉴定被引量：3
- 2009年
- 目的分离培养和鉴定去分化来源的表皮干细胞。方法采用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导表皮细胞去分化形成表皮干细胞,采用Ⅳ型胶原黏附法分离获得去分化来源的表皮干细胞。观察去分化来源表皮干细胞的形态及增殖特点,并通过免疫细胞化学、免疫荧光及流式细胞技术对其形态和表型进行鉴定。结果去分化来源的表皮干细胞能够表达表皮干细胞及其亚群特异性的表面标志蛋白,如β1整合素、CK19、CK14等,而CK10的表达为阴性。激光共聚焦检测显示α6整合素和CD71在去分化来源表皮干细胞及其亚群中的分布均存在着区域性差异。此外,流式细胞检测结果显示去分化来源的表皮干细胞中主要包含α6+CD71-和α6+CD71+的两种细胞群落,分别占被检测细胞总数的24.52%±7.88%及66.97%±5.04%。结论去分化来源的表皮干细胞与机体自身来源的表皮干细胞在形态和表型上具有相似性,可以作为表皮干细胞的替代细胞应用于皮肤重建与再生的相关研究。
- 孙晓艳卫勃付小兵刘惠玲
- 关键词：表皮干细胞免疫组织化学流式细胞术
- 6-氨基己酸激活人表皮干细胞中Oct4基因的表达被引量：1
- 2011年
- 目的摸索并建立表皮干细胞Oct4基因的非转基因诱导方法。方法采用RT-PCR方法 ,检测经6-氨基己酸刺激48h后表皮干细胞Oct4基因的转录水平。结果 6-氨基己酸能有效激发表皮干细胞Oct4基因的转录。结论 RT-PCR方法检测表皮干细胞Oct4基因转录水平变化的准确度高、重复性好,实验步骤简单,是初步筛选诱导基因转录表达小分子化合物的实用方法 。
- 刘惠玲伍明俊陈美霞李美蓉伍志强赵亚力韩为东孙晓艳
- 关键词：6-氨基己酸表皮干细胞OCT4
- 外周神经碳酸酐酶染色法的体会被引量：1
- 2008年
- 刘惠玲赵斌张莉
- 关键词：碳酸酐酶外周神经染色法感觉神经纤维小管上皮细胞神经胶质细胞
- 碱性成纤维细胞生长因子诱导表皮细胞去分化的初步研究被引量：13
- 2008年
- 目的初步探索表皮细胞体外去分化模型的建立方法。方法HEKa细胞体外培养6～7代时开始出现老化迹象,细胞体积膨大,形态发生明显改变。加入浓度为100ng/ml的碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth fac-tor,bFGF)诱导液分别培养6、12、24、48、72h后,MTT法检测bFGF对表皮细胞体外生长的促进作用。同时采用免疫细胞化学染色法、流式细胞检测技术、RT-PCR法检测bFGF诱导培养后,表皮细胞的表型及功能的改变。结果MTT检测结果显示浓度为100ng/ml,诱导时间为36～48h为诱导表皮细胞去分化的最佳实验条件。在bFGF的作用之下,老化的HEKa细胞周围开始出现新生的表皮干细胞样克隆。免疫细胞化学检测结果表明,实验组细胞中β1整合素、CK19、CK14的表达增强,而CK10作为终末分化细胞的标志,在bFGF诱导组中的表达明显降低。流式细胞检测分析显示bFGF作用后,实验组CK19表达阳性的细胞与对照组相比明显增多(分别为74.77%和15.74%);CK14表达阳性的细胞也由原来的67.26%增加至被检测细胞总数的87.14%。而bFGF诱导作用后,被检测细胞中表达CK10阳性的细胞数量较对照组明显下降(分别为4.56%和98.56%)。此外,RT-PCR检测结果同样再次支持了表皮细胞去分化的理论。在bFGF诱导组中,β1整合素、CK19、CK14mRNA转录水平明显上调,而CK10mRNA表达则明显下降。结论bFGF能够在体外诱导表皮细胞逆转分化形成幼稚型表皮前体干细胞,但其涉及具体机制需要进一步研究。
- 孙晓艳付小兵伊海英刘惠玲孙同柱
- 关键词：表皮细胞去分化免疫细胞化学流式细胞检测MTT
- 胎儿皮肤发育中成纤维细胞生长因子受体-2表达的免疫组织化学研究被引量：4
- 2008年
- 目的研究不同发育时期胎儿皮肤中成纤维细胞生长因子受体-2(fibroblast growth factor receptor 2,FGFR2)的表达及分布,探索FGFR2在皮肤发生、发育中的作用。方法对不同发育时期胎儿皮肤取材、固定,制成石蜡切片,S-P法检测FGFR2的表达。结果胚胎发育期FGFR2在表皮细胞表达较弱,甚至呈阴性表达。表皮分层期时,表皮层开始增厚,并可见毛囊的初级原基;FGFR2在表皮层和毛囊初级原基内呈弱阳性表达。毛囊形成期时,毛囊的结构初步形成,体积细小,形态幼稚;FGFR2主要在毛母质细胞内表达,并且随着胎龄增加,表达范围逐渐扩大,表达量逐渐增多。毛囊发育成熟期后,毛囊的结构发育相对成熟,FGFR2则在表皮层、毛细血管内皮细胞及皮脂腺的导管部均有表达,尤其在毛母质细胞呈强阳性表达。结论FGFR2在胎儿皮肤中的表达与分布与毛囊的发生、发育密切相关。FGFR2的表达上调可能促进毛囊干细胞的增殖,并诱导其定向分化形成终末组织功能细胞。
- 伊海英孙晓艳付小兵任明姬张广田刘惠玲
- 关键词：胚胎发育FGFR2免疫组织化学
- bFGF诱导表皮细胞去分化形成短暂扩充细胞被引量：3
- 2010年
- 目的探索一条非转基因的途径诱导表皮细胞去分化形成表皮前体干细胞。方法采用bFGF诱导表皮细胞去分化形成表皮前体干细胞,免疫细胞化学染色法、流式细胞检测技术、RT-PCR法以及免疫荧光染色技术检测bFGF诱导培养后表皮细胞的表型及功能改变。同期分离培养的人在体表皮干细胞作为本次实验的阳性对照。结果免疫细胞化学染色表明bFGF诱导培养后,实验组细胞中β1-integrin、CK19、CK14的表达增强,而CK10的表达明显降低。流式细胞技术检测显示bFGF诱导后实验组、对照组及阳性对照组中α6+CD71-、α6+CD71+及CD71表达阳性的细胞亚群分别占被检测细胞总数的13.24%、58.26%、23.12%,0.12%、3.06%、51.50%及37.49%、45.13%、5.86%。RT-PCR检测结果显示,实验组中β1-integrin、CK19、CK14的mRNA转录水平明显上调,而CK10的mRNA表达则明显下降。虽然β1-integrin、CK19和CK10的表达在实验组和阳性对照组中没有显著性的差异(P>0.05),但CK14在实验组中的表达则显著性增高达1.4倍左右(P<0.05)。此外,免疫荧光染色结果显示端粒酶逆转录酶在去分化来源表皮干细胞和在体表皮干细胞中存在着亚细胞位点分布差异。结论 bFGF能够诱导表皮细胞去分化并且从新获得干细胞的潜能。虽然这些去分化来源的表皮干细胞在形态和功能上更加接近短暂扩增细胞,但是该方法期待能为表皮细胞去分化理论的深入认识以及探询一条高效、安全的iPS细胞制备途径提供实验参考。
- 孙晓艳刘惠玲付小兵
- 关键词：表皮干细胞去分化IPS细胞免疫细胞化学流式细胞检测
