王小珏
- 作品数：20 被引量：14H指数：2
- 供职机构：首都医科大学附属北京胸科医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市科技计划项目艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学经济管理更多>>
- 全人源EGFR单抗的筛选和鉴定
- 2020年
- 目的:制备全人源表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)单克隆抗体,为基于人EGFR靶点的肿瘤免疫调节治疗提供基础制剂。方法:采集110例胸部肿瘤(肺癌102例,乳腺癌8例)患者外周血,构建噬菌体单链抗体库。经噬菌体展示后筛选阳性克隆,测序并构建全长轻重链表达载体质粒,共转染HEK293。通过亲和层析获得纯化抗体,抗原抗体免疫反应测定抗体特异性和敏感性,生物膜干涉(biolayer interferometry,BLI)技术测定抗体亲和力和流式细胞技术(fluorescence activating cell sorter,FACS)检测对肿瘤细胞系EGFR结合活性。结果:成功构建肺癌单链抗体噬菌体库,抗体库库容≥108,筛选获得两株单抗,分别为BTHG17-1,BTHG17-2,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定结合抗原敏感性为10 ng/mL,亲和力在10-8 mol/L水平,两抗体结合相同表位,可特异性结合野生型EGFR和突变体EGFRvⅢ蛋白,具有结合肺癌和神经胶质瘤细胞活性。结论:获得较高亲和力全人源EGFR单链抗体(single-chain variable fragment,scFv),具有EGFR(包括EGFRVⅢ)特异性,为EGFR靶点封阻和免疫导向治疗研究提供一种新抗体工具。
- 李姝萍杨斌金鑫王小珏闫卓红易玲韦攀健王和林王和林张洪涛
- 关键词：肺癌噬菌体抗体库表皮生长因子受体人源抗体
- 天然免疫相关蛋白分子SPLUNC1载体构建及蛋白稳定表达被引量：1
- 2015年
- 固有免疫应答在保护机体避免细菌感染中发挥着重要作用,如果固有免疫应答出现紊乱,则会加重感染和炎症反应。在呼吸道,黏膜分泌的多种蛋白如杀菌性/通透性增强蛋白（bactericidal/permeabilityincreasing protein,BPI）等能够通过参与固有免疫应答来清除呼吸道入侵的细菌,避免呼吸道感染[1]。
- 薛君力周立娟曾姣娥易玲王小珏张洪涛
- 关键词：天然免疫蛋白表达
- Human and Mouse CD137 Have Predominantly Different Binding CRDs to Their Respective Ligands
- Immune checkpoint inhibitors result in impressive clinical responses and are expanding to treat a wide variety...
- 易玲闫卓红贾红彦王小珏赵雁林张洪涛
- 红色荧光蛋白和荧光素酶双表达稳定肺癌细胞系的建立被引量：1
- 2018年
- 目的 构建能稳定表达红色荧光蛋白（RFP）和萤火虫荧光素酶（Fluc）的人肺癌细胞系,为建立活体成像的人肺癌裸鼠移植瘤模型及治疗研究奠定基础.方法 构建含Fluc和RFP基因的慢病毒载体pHBLV-Fluc-RFP,转染293T细胞进行病毒包装,用获得病毒液感染人肺癌细胞系A549、H1975和人B细胞淋巴瘤细胞系K562,再用嘌呤霉素筛选获得稳定细胞株,最后分别采用荧光显微镜和实时定量PCR检测稳定感染细胞中RFP和Fluc的表达.结果 成功构建了pHBLV-Fluc-RFP慢病毒载体,获得了稳定表达Fluc和RFP的A549、H1975和K562细胞.荧光显微镜下可观测到3种稳定感染细胞中均有红色荧光.实时定量PCR检测结果显示,3种稳定感染细胞中Fluc基因的相对表达量远远高于对应的野生型细胞,差异均具有统计学意义（均P＜0.05）.结论 获得的RFP和Fluc双表达人肺癌细胞系A549、H1975和人B细胞淋巴瘤细胞系K562,为人肺癌细胞免疫缺陷小鼠模型的活体成像提供了新荧光配色细胞模型.
- 高鑫杨斌韦攀健王小珏张洪涛
- 关键词：红色荧光蛋白萤火虫荧光素酶慢病毒载体
- 小鼠4-1BB分子的配体识别主要区域定位及结构分析被引量：2
- 2009年
- 目的明确4-1BB分子的配体结合4-1BB分子胞外区的关键区域和基本结构。方法分区表达鼠4-1BB胞外区结构域及其天然配体，利用ELISA和Western blot等方法对4—1BB分子的配体识别结构域进行定位。结果4—1BB分子半胱氨酸富集结构域（cysteine-rich domain，CRD）Ⅱ是配体结合的主要结构域，不结合CRDⅠ和CRDⅢ。免疫刺激性抗4-1BB单克隆抗体2A，主要结合4—1BB分子CRD与跨膜区之间的连接区（STP区），同时对包括CRDⅡ的各个CRDs有弱识别，可封阻4-1BB与其配体结合。结论4-1BB分子配体的主要识别区位于4-1BB分子胞外CRDⅡ，具有空间结构特点，此为进一步分析结合区及其关键氨基酸提供了资料。
- 易玲赵雁林王小珏韦攀健张洪涛
- 自身免疫性疾病患者PD-L1自身抗体的筛查
- 2017年
- 目的调查自身免疫性疾病和结核病患者PD—L1自身抗体产生情况。方法以重组人PD-L1蛋白为抗原，间接ELISA和免疫印迹法对血清样本进行测定，包括63例类风湿性关节炎（RA）、38例系统性红斑狼疮（SLE）、42例强直性脊柱炎（AS）、28例干燥综合征（ss）、50例结核病（TB）和60例健康人对照。结果ELISA结果显示，与健康人对照组（0．1317±0．0284，N=20）相比，RA（0．1996±0．0579，P〈0．0001）、SLE（0．1689±0．0338，P=0．0005）和AS组（0．1729±0．0619，P=0．0107）PD-LI自身抗体水平显著增高，而SS组（0．1341±0．0397，P=0．6834）无显著性差异。与健康人对照组（0．1541±0．0139，N=40）相比，结核病组（0．1709±0．1069，P=0．4215）PD—L1自身抗体水平无显著差异，但存在ELISA检测阳性个体，经免疫印迹证实存在PD—L1自身抗体。在46％RA、26％SLE、29％AS、1l％SS和12％TB中可检出PD-L1自身抗体，而健康人对照组未检出。结论自身免疫性疾病可检测到PD-L1自身抗体，此为进一步研究PD-L1与免疫相关疾病和免疫检查点调控机理奠定了基础。
- 闫卓红王小珏郑小芳易玲韦攀健贾红艳杨斌张洪涛
- 关键词：PD-L1自身抗体自身免疫性疾病免疫印迹
- 天然调节T细胞与结核病免疫病理关联被引量：2
- 2010年
- 目的 检测调节性T细胞（Tr）在结核病病人是否增高,确证Tr与结核免疫病理的关联性,为Tr功能研究提供疾病模型.方法 流式细胞术（FACS）分选CD3＋CD4＋T及CD3＋CD8＋T等主要淋巴细胞亚群,通过RT-PCR测定Foxp3基因在正常和结核病病人T细胞亚群中的表达,FACS多色分析Foxp3 T细胞在CD4＋CD25＋细胞群体中的分布,累积病例分析Tr细胞在外周血扩增情况,免疫组化方法分析Tr在结核病理的浸润,结合临床资料分析Tr数量的改变与结核病的关联性.结果 Foxp3基因在正常和结核病病人CD3＋ CD4＋T细胞中特异性扩增,FACS分析表明foxp3主要表达于CD4＋ CD25high亚群中,占CD4＋ CD25highT细胞的80%以上,以CD4＋CD2high Foxp3＋三联标志检测40例正常与51例活动性结核病病人外周血Tr占CD4＋T细胞比例分别为（0.23±0.20）%和（1.01±1.00）%,结核病病人较正常人高4.4倍,Tr在结核病明显扩增（P〈0.01）,结核病理组织中有高频率Foxp3＋细胞浸润.Tr扩增与结核病有效治疗和预后的关联性有深入探讨价值.结论 Tr细胞在结核病病人增高,并与结核免疫病理损伤相关,结核病可作为Tr细胞功能研究的疾病模型.
- 赵雁林王敬张海青易玲李惠文韦攀健赵丹王小珏郑小芳张洪涛
- 关键词：天然调节性T细胞结核病免疫病理
- 自身免疫性疾病患者PD-L1自身抗体的筛查
- 2016年
- 免疫检查点主要指免疫系统中存在的抑制性免疫调节信号,生理情况下一方面参与维持对自身抗原的免疫耐受,避免自身免疫性疾病,另一方面通过调节外周组织中免疫应答的持续性和强度避免组织损伤。细胞毒性T淋巴细胞抗原-4（cytotoxic T lymphocyte-associated antigen-4, CTLA-4）、程序性死亡受体-1（programmed death-1,PD1）及其配体 PD-L1（programmed cell death-ligand 1）是目前免疫检查点研究的热点分子,被认为是免疫调节的主要信号通路。自身抗体是免疫病理调节潜在的调控方式,国外研究主要聚焦于类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）,早期文献报道可以检测到CTLA-4自身抗体,近期报道了 RA患者中检出 PD-L1自身抗体。目前国内尚未见相关研究,在其他免疫关联性自身免疫疾病国内外均少有涉及,本研究筛查了多种自身免疫关联性疾病,以及免疫病理为基础的结核病患者PD-L1自身抗体存在状况,明确免疫检查点分子自身抗体调控方式的存在,为研究自身免疫病及免疫关联疾病发病机理、寻求新的治疗策略提供基础研究依据。
- 闫卓红王小珏郑小芳易玲韦攀健贾红艳杨斌张洪涛
- 关键词：自身免疫性疾病PD-L1自身抗体淋巴细胞抗原
- Using CD137 to identify specific CD4+ T cell responses to Mycobacterium tuberculosis
- To evaluate the ability of CD137 to identify Mycobacterium tuberculosis (Mtb)-specific CD4+ T cells in the per...
- 闫卓红郑小芳易玲王小珏韦攀健王敬周丽君赵雁林张洪涛
- 一种抗人PD-L1抗体及其应用
- 本发明涉及免疫技术领域，具体而言，涉及一种抗人PD‑L1抗体及其应用。所述抗体包含抗原结合结构域的分离的结合蛋白，其中所述抗原结合结构域包括选自下述氨基酸序列的至少一个互补决定区，或：与下述氨基酸序列的互补决定区具有至少...
- 张洪涛王小珏易玲闫卓红
- 文献传递
