闫卓红
- 作品数：17 被引量：4H指数：1
- 供职机构：首都医科大学附属北京胸科医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京科技计划项目首都卫生发展科研专项更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学生物学农业科学更多>>
- 全人源EGFR单抗的筛选和鉴定
- 2020年
- 目的:制备全人源表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)单克隆抗体,为基于人EGFR靶点的肿瘤免疫调节治疗提供基础制剂。方法:采集110例胸部肿瘤(肺癌102例,乳腺癌8例)患者外周血,构建噬菌体单链抗体库。经噬菌体展示后筛选阳性克隆,测序并构建全长轻重链表达载体质粒,共转染HEK293。通过亲和层析获得纯化抗体,抗原抗体免疫反应测定抗体特异性和敏感性,生物膜干涉(biolayer interferometry,BLI)技术测定抗体亲和力和流式细胞技术(fluorescence activating cell sorter,FACS)检测对肿瘤细胞系EGFR结合活性。结果:成功构建肺癌单链抗体噬菌体库,抗体库库容≥108,筛选获得两株单抗,分别为BTHG17-1,BTHG17-2,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定结合抗原敏感性为10 ng/mL,亲和力在10-8 mol/L水平,两抗体结合相同表位,可特异性结合野生型EGFR和突变体EGFRvⅢ蛋白,具有结合肺癌和神经胶质瘤细胞活性。结论:获得较高亲和力全人源EGFR单链抗体(single-chain variable fragment,scFv),具有EGFR(包括EGFRVⅢ)特异性,为EGFR靶点封阻和免疫导向治疗研究提供一种新抗体工具。
- 李姝萍杨斌金鑫王小珏闫卓红易玲韦攀健王和林王和林张洪涛
- 关键词：肺癌噬菌体抗体库表皮生长因子受体人源抗体
- Using CD137 to identify specific CD4+ T cell responses to Mycobacterium tuberculosis
- To evaluate the ability of CD137 to identify Mycobacterium tuberculosis (Mtb)-specific CD4+ T cells in the per...
- 闫卓红郑小芳易玲王小珏韦攀健王敬周丽君赵雁林张洪涛
- EGFR和PD-L1双靶向嵌合抗原受体构建及表达被引量：1
- 2020年
- 目的:构建肿瘤相关抗原表皮生长因子受体特异性嵌合抗原受体(EGFR-CAR)和程序性死亡受体-配体1(PD-L1)抗体双修饰慢病毒载体表达系统。方法:人PD-L1-Fc蛋白免疫BALB/c小鼠,经细胞融合、亚克隆筛选高分泌PD-L1特异性抗体的稳定杂交瘤,酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot检测抗体特异性,流式细胞术(FACS)鉴定对PD-1配受体封阻性能,Fortebio测定抗体亲和力,抗体全长测序,经保留鼠源CRD1、CRD2和CRD3人源化改造后构建单链抗体(single-chain variable fragment,scFv);人EGFR单克隆抗体杂交瘤系,经5′RACE技术扩增其轻链和重链可变区(VL和VH)基因,构建scFv,克隆至真核载体pcDNA3.1表达鉴定。基因合成EGFR-CAR(引入CD137协同信号胞内功能域)与PD-L1-scFv借助2A序列连接,克隆入慢病毒pLVX-EF1a-IRES-ZsGreen1表达载体,使用Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G)共同转染293T细胞,获得包装病毒,感染293V细胞,FACS测定CAR膜表达,ELISA检测CAR感染293V细胞培养上清中PD-L1-scFv表达情况,转染激活人外周血T细胞,验证CAR膜表达。结果:获得PD-L1抗体11E3,具备高度配受体封阻性能,经人源化改造后,亲和力稳定(2.67×10 -10 mol/L),EGFR-scFv获得有效表达。进一步构建了EGFR-CAR和PD-L1双修饰慢病毒分泌型CAR(CTC0537-1)及膜表达型CAR(CTC0537-2),其病毒感染293V细胞阳性率为10%。CTZ0431-1感染293V细胞后,细胞膜表面表达EGFR-scFv,检测培养上清存在PD-L1-ScFv;CTZ0431-2感染293V细胞后,细胞膜表面EGFR-scFv和PD-L1-scFv有效表达,双表达病毒感染活化T细胞的CAR表达率为39.3%。 结论:成功构建了EGFR-CAR和PD-L1-scFv双表达慢病毒载体,EGFR-CAR中度结合亲和力,此为EGFR靶向和PD-L1抗体双修饰CAR-T细胞的实体瘤治疗研究提供了关键工具。
- 李姝萍王小珏杨斌王和林王和林闫卓红易玲韦攀健郝建清张洪涛
- 抗人TIGIT抗体或其功能性片段及其应用
- 本发明属于生物医学和抗体工程技术领域；更具体的涉及抗人TIGIT抗体或其功能性片段，以及抗人TIGIT抗体或其功能性片段作为免疫偶联物、嵌合抗原受体和/或组合物的应用，具体公开了可结合人TIGIT蛋白的单克隆抗体或其抗原...
- 闫卓红王敬慧马腾王小珏
- 一种抗人PD-L1抗体及其应用
- 本发明涉及免疫技术领域，具体而言，涉及一种抗人PD‑L1抗体及其应用。所述抗体包含抗原结合结构域的分离的结合蛋白，其中所述抗原结合结构域包括选自下述氨基酸序列的至少一个互补决定区，或：与下述氨基酸序列的互补决定区具有至少...
- 易玲闫卓红王小珏杨斌韦攀健张洪涛
- 文献传递
- 检测分枝杆菌脂阿拉伯甘露聚糖的抗体组合及其应用和试剂盒
- 本发明公开了检测分枝杆菌脂阿拉伯甘露聚糖的抗体组合及其应用和试剂盒，涉及生物检测领域。本申请的发明人利用多种类型的样本进行筛选和鉴定，确定了适宜用于LAM抗原捕获的捕获抗体，以及适宜用于LAM抗原检测的检测抗体，形成了L...
- 闫卓红吴羽华易玲王小珏王敬慧杨新婷张洪涛逄宇韦攀健阮洪云
- 浅谈医学免疫学教学中的实践性被引量：2
- 2015年
- 免疫学是一门介于基础与临床的桥梁学科,内容抽象、系统复杂,知识更新速度快,理论性强,被认为是"天书"课程之一,然而在医学实际中,免疫学又无不渗透影响着医学各个学科,扎实免疫学基础对医学生日后解决临床疑难问题,促进医学的发展,具有极强的指导性。注重"实践"的教学模式,可以使空泛的知识和理论看得见摸得着,进而促进学习的目的性,激发主动性,使理论得到深究,透彻领悟。理论与实践相结合在免疫学教研具有特殊地位,与本学科蓬勃发展有密切关联,注重免疫学科的实践性发展规律,运用于教学,对免疫教学理论学习,培养发现性人才,及对其他自然学科研究有参考价值。
- 张洪涛闫卓红
- 关键词：医学免疫学教学模式
- 一株针对人EGFR的单链抗体克隆与哺乳细胞表达被引量：1
- 2018年
- 目的：制备特异性抗人表皮生长因子受体（EGFR）的单链抗体（sc Fv）,鉴定其生物学活性,为进一步研究基于单链抗体的免疫治疗奠定基础。方法：从分泌抗人EGFR单克隆抗体的杂交瘤细胞系提取总RNA,利用5’RACE技术扩增轻链和重链可变区（VL、VH）基因,构建具有VL、VH基因的单链抗体基因,并将构建的单链抗体基因克隆到真核细胞表达载体pc DNA3.1中进行表达和鉴定。ELISA鉴定单链抗体对抗原的特异性;Fortebio检测抗原抗体间的亲和力,流式细胞术检测单链抗体结合肺癌细胞系天然EGFR的功能活性。结果：获得唯一的轻重链可变区序列VL、VH,成功构建EGFR-sc Fv,特异性与天然EGFR蛋白结合,亲和力达3.22×10-9mol/L。结论：成功构建了抗人EGFR单链抗体,为肺癌免疫导向治疗研究奠定了基础。
- 高鑫韦攀健闫卓红易玲王小珏杨斌张洪涛
- 关键词：表皮生长因子受体单链抗体
- 抗人Tim3抗体或其功能性片段及其应用
- 本发明提供了一种抗人Tim3抗体或其功能性片段及其应用。本发明从噬菌体抗体库筛选得到了具有良好特异性、高亲和性和敏感性的抗人Tim3抗体，本发明所得到的抗人Tim3抗体能够特异性地识别结合可溶性Tim3和细胞膜表面Tim...
- 闫卓红张洪涛王小珏易玲
- 文献传递
- 一种辅助诊断结核病的抗原组合及其应用和试剂盒
- 本发明公开了一组辅助诊断结核病的融合蛋白，其包括38KD‑MPT32‑MPT64、CFP10‑Mtb81‑EspC和Ag85B‑HBHA融合蛋白。上述融合蛋白组合可用于结核病患者体液中抗原特异性结核抗体的检测，对辅助诊断...
- 闫卓红张洪涛王敬慧易玲王小珏韦攀健杨斌
