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Adv-HIF-1α^(mu)转染内皮祖细胞对CXCL12表达影响的研究: 2014年; 目的研究转染低氧诱导因子1α突变型(hypoxia inducible factor 1αmu,HIF1αmu)后的外源性内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)中CXCL12的表达情况及对EPCs的影响。方法密度梯度离心结合差速贴壁法分离、培养EPCs并进行鉴定;以Adv-HIF-1αmu的最佳转染指数转染EPCs,获得含有目的基因处理的EPCs细胞,设为A组。B组为单纯转染Adv的EPCs。设未转染Adv-HIF-1αmu的EPCs为C组。Western Blot检测转染后的EPCs中HIF-1的表达,检测转染后的EPCs培养液上清液中的CXCL12浓度及其对外源性EPCs迁移的影响。结果密度梯度离心结合差速贴壁法获得的EPCs能够结合UEA-1和摄取ac-LDL,并具有成血管作用;转染Adv-HIF-1αmu的EPCs表达的HIF-1及CXCL12高于单纯转染Adv的EPCs及未转染Adv-HIF-1αmu的EPCs(P<0.05),且能诱导外源性EPCs的迁移。结论密度梯度离心结合差速贴壁法能够分离、培养符合特征的EPCs,转染Adv-HIF-1αmu的EPCs能够在常氧条件下高表达HIF-1及CXCL12,并诱导外源性EPCs的迁移。; 赵辉刘丹平齐鑫张解元李谌; 关键词：内皮祖细胞趋化因子CXCL12

BMSCs/EPCs联合移植治疗兔股骨头坏死的实验研究被引量：1: 2014年; 目的检测骨髓来源内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)与骨髓基质细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)移植到股骨头缺血坏死部位促进坏死区局部成骨和成血管能力。方法使用密度梯度离心法分离培养兔BMSCs、EPCs并鉴定。共培养细胞进行碱性磷酸酶活性检测以确定EPCs与BMSCs最佳比例。培养的细胞分成3组植入兔股骨头坏死模型:A组(单独移植BMSCs)、B组(单独移植EPCs)、C组(最佳比例联合移植BMSCs与EPCs),于术后4周对兔股骨头坏死模型进行成骨及成血管指标检测。结果 EPCs与BMSCs的最佳共培养比例为1∶1。与A组及B组相比,C组有着更高的BMP-2蛋白表达和更多的新生血管形成(P<0.05)。组织学检测显示:A组可见类骨质结构;B组可见血管结构,但类骨质生成较少;C组可见类骨质结构,并且可见密集的血管结构。结论以1∶1比例联合移植EPCs和BMSCs到股骨头坏死部位具有很强的成骨以及成血管能力。; 於绍龙刘丹平赵辉齐鑫张解元; 关键词：股骨头坏死骨形成血管形成

BMP-14转染脂肪来源干细胞后与软骨细胞共培养的实验研究被引量：8: 2013年; 目的研究BMP-14与软骨细胞共同诱导脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)向软骨细胞分化是否具有协同作用,优化软骨组织工程种子细胞来源。方法取2只雄性新西兰大白兔(体重1.5、2.0 kg)关节软骨和皮下脂肪组织,分离、培养软骨细胞和ADSCs,取第3代细胞进行实验。对ADSCs行成骨(茜素红染色)、成软骨(阿利新蓝染色)和成脂(油红O染色)诱导鉴定。测定Ad-巨细胞病毒-BMP-14-内部核糖体进入位点-人源化海肾绿色荧光蛋白1转染的最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)并以其转染ADSCs。实验分为5组:A组,采用Transwell小室将BMP-14转染的ADSCs与软骨细胞共培养(1∶1);B组,采用Transwell小室将未转染的ADSCs与软骨细胞共培养(1∶1);C组,单纯BMP-14转染的ADSCs培养;D组,单纯软骨细胞培养;E组,单纯ADSCs培养。培养3周后,取细胞采用阿利新蓝法检测糖胺聚糖(glycosaminoglycan,GAG)含量,Western blot检测BMP-14和Ⅱ型胶原蛋白表达,RT-PCR检测Sox-9基因表达。结果培养细胞经鉴定提示为ADSCs。倒置荧光显微镜观察示,MOI值为150时转染效果最好。A、C组GAG含量、BMP-14和Ⅱ型胶原蛋白表达以及Sox-9基因表达均明显高于其余3组,A组高于C组,差异均有统计学意义(P<0.05);B、D组均明显高于E组(P<0.05),B、D组间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 BMP-14与软骨细胞能共同诱导并促进兔ADSCs向软骨细胞分化,两者之间具有协同作用。; 袁虹张解元张荣明; 关键词：软骨组织工程脂肪来源干细胞软骨细胞共培养

单载体双基因Ad-BMP-2-IRES-HIF-1αmu转染内皮祖细胞后移植治疗缺血性股骨头坏死的实验研究: 2013年; 将构建的单载体双基因Ad-BMP-2-IRES-HIF-1αmu转染到诱导的兔骨髓源性内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)后移植到股骨头缺血坏死(avascularnecrosis of the femoral head,ANFH)局部,检测其促进坏死区局部成血管和成骨能力。密度梯度离心法获取兔骨髓单个核细胞(mononuclearcells,MNCs),用M199培养基诱导MNCs为EPCs;通过细胞形态、特殊表面标记、摄取能力方面鉴定EPCs;将Ad-BMP-2-IRES-HIF-1αmu载体转染到EPCs,再将其移植入ANFH模型局部;分别于术后2周、4周处死模型,行坏死区成血管和成骨指标检测。结果显示:与对照组(B组)和空白组(C组)相比,实验组(A组)有较多新血管生成(P<0.05),B组与C组比较有统计学差异(P<0.05);组织学及BMP-2免疫组化检测,A组与B组和C组之间差异具有统计学意义(P<0.05),B组与C组之间差异无统计学意义(P>0.05)。综上所述,该实验提示移植转染Ad-BMP-2-IRES-HIF-1αmu的EPCs具有较强的成血管及成骨能力。; 齐鑫刘丹平赵辉张解元; 关键词：内皮祖细胞股骨头缺血坏死骨形成蛋白-2

腺病毒介导BMP-2联合低氧诱导因子1α突变型与单基因BMP-2分别转染BMSCs后成骨效应的比较研究被引量：4: 2012年; 目的比较腺病毒载体Ad-BMP-2-内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)-低氧诱导因子1α突变型(hypoxia inducible factor 1αmu,HIF-1αmu)与Ad-巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)-BMP-2-IRES-人源化海肾绿色荧光蛋白1(human renilla reniformis green fluorescent protein 1,hrGFP-1)分别转染BMSCs后的成骨效应,优化成骨细胞种子来源。方法取1月龄新西兰大白兔骨髓分离培养BMSCs。取第3代BMSCs进行病毒液转染,根据转染病毒液不同将实验分为4组,A、B、C组分别采用感染复数(multiplicity of infection,MOI)为50、100、150和200的Ad-BMP-2-IRES-HIF-1αmu、Ad-CMV-BMP-2-IRES-hrGFP-1、Ad-CMV-IRES-hrGFP-1(空腺病毒载体)转染细胞,D组为未被转染的BMSCs。选择最佳MOI值进行观察。转染后采用免疫组织化学染色检测BMP-2表达,Western blot检测BMP-2和HIF-1α蛋白表达,ALP活性测定和钙结节茜素红染色检测细胞成骨分化能力。结果 A、B、C组最佳MOI值分别为200、150和100。免疫组织化学染色示,A、B组BMP-2染色呈阳性,C、D组呈阴性;A组阳性细胞数明显多于B组(P<0.05)。Western blot检测示,A、B组BMP-2蛋白表达明显高于C、D组(P<0.05),A组高于B组(P<0.05);A组HIF-1α蛋白表达明显高于其余3组(P<0.05),其余3组间差异无统计学意义(P>0.05)。A、B组ALP活性明显高于C、D组(P<0.05),A组高于B组(P<0.05)。茜素红染色示,A、B组可见明显钙结节,C、D组未见钙结节形成;且A组钙结节数量多于B组(P<0.05)。结论单载体双基因Ad-BMP-2-IRES-HIF-1αmu与单载体单基因Ad-CMV-BMP-2-IRES-hrGFP-1分别转染兔BMSCs后,前者BMP-2和成骨效应表达均高于后者。; 张解元袁虹李谌李全营郭威刘丹平; 关键词：BMP-2 BMSCS 基因转染

表达HIF1α^(mu) EPCs增强BMP2转染BMSCs成骨及成血管能力被引量：2: 2015年; 目的研究表达突变型低氧诱导因子1α的内皮祖细胞(EPCs)对骨形态形成蛋白2(BMP2)转染的骨髓基质细胞(BMSCs)成骨及成血管的影响。方法密度梯度离心法分离培养兔BMSCs和EPCs并鉴定,MTT法检测不同比例BMSCs/EPCs混合培养时增殖作用,以确定混合细胞比例。实验分为6组:A组(BMSCs);B组(Adv-BMP-2BMSCs);C组(BMSCs+EPCs);D组(Adv-BMP-2 BMSCs+EPCs);E组(BMSCs+Adv-HIF1αmu-EPCs);F组(AdvBMP-2 BMSCs+Adv-HIF1αmu-EPCs)。以Adv-HIF1αmu和Adv-BMP2的最佳转染指数(MOI)分别转染EPCs和BMSCs。Western blot检测HIF-1α和BMP-2蛋白表达。行碱性磷酸酶活性检测;用qRT-PCR检测相关基因的表达,以评价共培养细胞成骨和成血管情况。结果 BMSCs与EPCs以1∶1混合培养增殖能力优于1∶2及2∶1,故该实验混合细胞比例确定为1∶1。Adv-BMP-2 BMSCs和BMSCs组可见BMP-2蛋白表达且表达量高于EPCs和AdvHIF1αmu-EPCs组(P<0.05)。Adv-HIF1αmu-EPCs组可见HIF1α蛋白表达且表达量明显高于Adv-BMP-2 BMSCs、BMSCs及EPCs组(P<0.05)。F组ALP活性以及成骨和成血管相关基因表达高于其他组(P<0.05)。结论表达HIF1αmu的EPCs能够增强Adv-BMP-2 BMSCs成骨和成血管潜能。; 於绍龙刘丹平赵辉齐鑫张解元李谌; 关键词：成骨

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张解元

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