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兔骨髓来源的内皮祖细胞体外培养及鉴定: 2013年; 目的在体外获取兔骨髓来源的内皮祖细胞。方法取1 w龄兔的长骨骨髓,通过密度梯度离心结合差速贴壁法分离培养内皮祖细胞。结果获取较多目的细胞,经鉴定符合内皮祖细胞的形态特征,能够摄取并结合DIL-ac-LDL及FITC-UEA-1。结论密度梯度离心结合差速贴壁法可以得到较多骨髓来源的内皮祖细胞。; 刘丹平赵辉齐鑫; 关键词：内皮祖细胞密度梯度离心骨髓

Adv-HIF-1α^(mu)转染内皮祖细胞对CXCL12表达影响的研究: 2014年; 目的研究转染低氧诱导因子1α突变型(hypoxia inducible factor 1αmu,HIF1αmu)后的外源性内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)中CXCL12的表达情况及对EPCs的影响。方法密度梯度离心结合差速贴壁法分离、培养EPCs并进行鉴定;以Adv-HIF-1αmu的最佳转染指数转染EPCs,获得含有目的基因处理的EPCs细胞,设为A组。B组为单纯转染Adv的EPCs。设未转染Adv-HIF-1αmu的EPCs为C组。Western Blot检测转染后的EPCs中HIF-1的表达,检测转染后的EPCs培养液上清液中的CXCL12浓度及其对外源性EPCs迁移的影响。结果密度梯度离心结合差速贴壁法获得的EPCs能够结合UEA-1和摄取ac-LDL,并具有成血管作用;转染Adv-HIF-1αmu的EPCs表达的HIF-1及CXCL12高于单纯转染Adv的EPCs及未转染Adv-HIF-1αmu的EPCs(P<0.05),且能诱导外源性EPCs的迁移。结论密度梯度离心结合差速贴壁法能够分离、培养符合特征的EPCs,转染Adv-HIF-1αmu的EPCs能够在常氧条件下高表达HIF-1及CXCL12,并诱导外源性EPCs的迁移。; 赵辉刘丹平齐鑫张解元李谌; 关键词：内皮祖细胞趋化因子CXCL12

BMSCs/EPCs联合移植治疗兔股骨头坏死的实验研究被引量：1: 2014年; 目的检测骨髓来源内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)与骨髓基质细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)移植到股骨头缺血坏死部位促进坏死区局部成骨和成血管能力。方法使用密度梯度离心法分离培养兔BMSCs、EPCs并鉴定。共培养细胞进行碱性磷酸酶活性检测以确定EPCs与BMSCs最佳比例。培养的细胞分成3组植入兔股骨头坏死模型:A组(单独移植BMSCs)、B组(单独移植EPCs)、C组(最佳比例联合移植BMSCs与EPCs),于术后4周对兔股骨头坏死模型进行成骨及成血管指标检测。结果 EPCs与BMSCs的最佳共培养比例为1∶1。与A组及B组相比,C组有着更高的BMP-2蛋白表达和更多的新生血管形成(P<0.05)。组织学检测显示:A组可见类骨质结构;B组可见血管结构,但类骨质生成较少;C组可见类骨质结构,并且可见密集的血管结构。结论以1∶1比例联合移植EPCs和BMSCs到股骨头坏死部位具有很强的成骨以及成血管能力。; 於绍龙刘丹平赵辉齐鑫张解元; 关键词：股骨头坏死骨形成血管形成

单载体双基因Ad-BMP-2-IRES-HIF-1αmu转染内皮祖细胞后移植治疗缺血性股骨头坏死的实验研究: 2013年; 将构建的单载体双基因Ad-BMP-2-IRES-HIF-1αmu转染到诱导的兔骨髓源性内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)后移植到股骨头缺血坏死(avascularnecrosis of the femoral head,ANFH)局部,检测其促进坏死区局部成血管和成骨能力。密度梯度离心法获取兔骨髓单个核细胞(mononuclearcells,MNCs),用M199培养基诱导MNCs为EPCs;通过细胞形态、特殊表面标记、摄取能力方面鉴定EPCs;将Ad-BMP-2-IRES-HIF-1αmu载体转染到EPCs,再将其移植入ANFH模型局部;分别于术后2周、4周处死模型,行坏死区成血管和成骨指标检测。结果显示:与对照组(B组)和空白组(C组)相比,实验组(A组)有较多新血管生成(P<0.05),B组与C组比较有统计学差异(P<0.05);组织学及BMP-2免疫组化检测,A组与B组和C组之间差异具有统计学意义(P<0.05),B组与C组之间差异无统计学意义(P>0.05)。综上所述,该实验提示移植转染Ad-BMP-2-IRES-HIF-1αmu的EPCs具有较强的成血管及成骨能力。; 齐鑫刘丹平赵辉张解元; 关键词：内皮祖细胞股骨头缺血坏死骨形成蛋白-2

表达HIF1α^(mu) EPCs增强BMP2转染BMSCs成骨及成血管能力被引量：2: 2015年; 目的研究表达突变型低氧诱导因子1α的内皮祖细胞(EPCs)对骨形态形成蛋白2(BMP2)转染的骨髓基质细胞(BMSCs)成骨及成血管的影响。方法密度梯度离心法分离培养兔BMSCs和EPCs并鉴定,MTT法检测不同比例BMSCs/EPCs混合培养时增殖作用,以确定混合细胞比例。实验分为6组:A组(BMSCs);B组(Adv-BMP-2BMSCs);C组(BMSCs+EPCs);D组(Adv-BMP-2 BMSCs+EPCs);E组(BMSCs+Adv-HIF1αmu-EPCs);F组(AdvBMP-2 BMSCs+Adv-HIF1αmu-EPCs)。以Adv-HIF1αmu和Adv-BMP2的最佳转染指数(MOI)分别转染EPCs和BMSCs。Western blot检测HIF-1α和BMP-2蛋白表达。行碱性磷酸酶活性检测;用qRT-PCR检测相关基因的表达,以评价共培养细胞成骨和成血管情况。结果 BMSCs与EPCs以1∶1混合培养增殖能力优于1∶2及2∶1,故该实验混合细胞比例确定为1∶1。Adv-BMP-2 BMSCs和BMSCs组可见BMP-2蛋白表达且表达量高于EPCs和AdvHIF1αmu-EPCs组(P<0.05)。Adv-HIF1αmu-EPCs组可见HIF1α蛋白表达且表达量明显高于Adv-BMP-2 BMSCs、BMSCs及EPCs组(P<0.05)。F组ALP活性以及成骨和成血管相关基因表达高于其他组(P<0.05)。结论表达HIF1αmu的EPCs能够增强Adv-BMP-2 BMSCs成骨和成血管潜能。; 於绍龙刘丹平赵辉齐鑫张解元李谌; 关键词：成骨

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赵辉