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旋毛虫53kuES重组蛋白单克隆抗体的制备及其免疫金标试纸条的研制被引量：5: 2012年; 为建立一种简易、快速检测动物血清中的旋毛虫排泄分泌(Excretory-secretory,ES)抗原的胶体金免疫层析试纸法,本研究选用旋毛虫53 ku ES重组蛋白免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤细胞技术制备单克隆抗体(MAb)。利用辛酸-饱和硫酸铵法和亲和层析柱联合法纯化MAb及兔抗旋毛虫53 ku ES多克隆抗体,利用枸橼酸三钠还原法制备的胶体金颗粒标记MAb,制备免疫金标试纸条。结果表明,获得的2株IgG1型杂交瘤细胞系4D10和5A2能够稳定分泌抗体,且效价高;胶体金标记MAb 4D10所制备的试纸条具有重复性好、灵敏性和特异性高的优点;该试纸条4℃条件下可密封保存6个月以上。; 赵黎黎路义鑫李晓云扈炳新宋铭忻; 关键词：旋毛虫单克隆抗体胶体金

柔嫩艾美耳球虫3-1E基因的原核表达和真核表达质粒的构建及免疫保护性研究: 鸡球虫病（Coccidiosis）是由艾美耳科（Eimeriidae）艾美耳属（Eimeria）球虫引起的一种严重危害鸡生长发育的寄生原虫病。该病呈世界性分布，难于防治。迄今公认的鸡艾美耳球虫病的病原有9种，其中柔嫩艾美...; 扈炳新; 关键词：柔嫩艾美耳球虫 3-1E基因原核表达真核表达质粒免疫保护性; 文献传递

鸡柔嫩艾美耳球虫3-1E真核重组表达质粒的构建及其免疫保护性分析被引量：3: 2011年; 为构建鸡柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)重组真核表达质粒并检测其免疫保护性,本实验将E.tenella表面抗原基因3-1E(E)与鸡IFN-γ、IL-2基因分别串联在真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建真核重组表达质粒pcDNA-E-IFNγ、pcDNA-E-IL2,同时构建对照质粒pcDNA-E、pcDNA-IFNγ、pcDNA-IL2。经酶切鉴定得到预期大小目的片段,测序结果与预期序列一致。将构建的重组质粒免疫鸡只,经western blot检测表明该重组质粒在鸡体内可以正常表达;对感染鸡只的免疫保护效果显示,pcDNA-E-IFNγ、pcDNA-E-IL2组抗球虫指数(ACI)分别为181.04、187.30,具有高效的抗球虫效果,为将其进一步研制成为具有实用价值的抗球虫疫苗奠定了基础。; 扈炳新韩彩霞李晓云宋铭忻; 关键词：柔嫩艾美耳球虫 3-1E基因真核表达质粒免疫保护性

鸡柔嫩艾美耳球虫哈尔滨株3-1E基因的重组表达及其表达产物的免疫保护性被引量：5: 2010年; 应用RT-PCR技术扩增柔嫩艾美耳球虫哈尔滨株子孢子表面抗原3-1E基因,再克隆至质粒载体pMD18-T中,获得重组质粒pMD18-T-3-1E,采用EcoRⅠ+HindⅢ双酶切法及PCR扩增鉴定正确后,将3-1E基因cDNA目的片段亚克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,获得重组质粒pET-32a-3-1E,用EcoRⅠ+HindⅢ双酶切法及DNA测序证明cDNA序列完全正确。表达蛋白的SDS-PAGE分析表明,表达产物与预期大小(36.47 ku)一致,为可溶性表达。对诱导时间以及IPTG浓度的优化结果表明,当诱导6 h且IPTG浓度在0.8 mmol/L时表达量最大。Western-blot分析表明,表达的蛋白可被感染柔嫩艾美耳球虫鸡的阳性血清特异性识别。将重组3-1E蛋白纯化后分为肌注蛋白组和肌注蛋白加弗氏完全佐剂组免疫AA鸡,通过计算抗球虫指数检测其保护力。结果显示,肌注重组蛋白组与肌注重组蛋白加弗氏完全佐剂组均能刺激鸡体产生一定的免疫反应,对柔嫩艾美耳球虫感染产生有力的保护,其中后者优于前者,表明该重组3-1E蛋白具有研制成亚单位疫苗的潜力。; 扈炳新李微韩彩霞赵黎黎李晓云宋铭忻; 关键词：柔嫩艾美耳球虫 3-1E基因克隆免疫保护性

鸡柔嫩艾美耳球虫哈尔滨株3-1E基因的重组表达及其表达产物的免疫保护性: 应用RT-PCR技术扩增柔嫩艾美耳球虫哈尔滨株子孢子表面抗原3-1E基因,再克隆至质粒载体p MD18-T中,获得重组质粒p MD18-T-3-1E,采用Eco RⅠ+HindⅢ双酶切法及PCR扩增鉴定正确后,将3-1E...; 路义鑫韩彩霞李晓云扈炳新李微赵黎黎宋铭忻; 关键词：柔嫩艾美耳球虫 3-1E基因克隆免疫保护性; 文献传递

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扈炳新