李川
- 作品数：10 被引量：39H指数：4
- 供职机构：中国预防医学科学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 一组生产汉坦病毒样颗粒的哺乳动物工程细胞系
- 本发明为一组生产汉坦病毒样颗粒的哺乳动物工程细胞系，工程细胞系分别整合有汉坦病毒姬鼠型(HTN)、家鼠型(SEO)、棕背型(PUU)、杜布洛瓦型(DOB)各型病毒的M和S基因或单一M基因，稳定表达上述汉坦病毒M基因编码...
- 李德新梁米芳李川
- 文献传递
- 汉坦病毒A9株L片段部分核苷酸序列分析被引量：1
- 2000年
- 目的 测定我国分离的汉坦病毒A9株L片段的部分核苷酸序列。方法 用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术扩增我国分离的汉坦病毒A9株部分L片段cDNA ,测定PCR产物的核苷酸序列。结果 PCR扩增产物为L片段 40 0 6nt 44 5 41nt(根据 76 118株序列 ) ,和已发表的汉坦病毒L片段序列比较 ,A9株和汉滩病毒 76 118株同源性最高 ,为 85 .2 % ,和其他不同型别汉坦病毒代表株HR80 39、CG182 0、Sotkoma、NHR11、TulaL片段的同源性分别为 76 .8%、72 .3%、71.0 % ,71.7%和 70 .8%。比较推测的氨基酸序列 ,和 76 118株同源性为 96 .7% ,和HR80 39、CG182 0、Sotkoma、NHR11、TulaL片段的同源性分别为 88.3%、78.6 %、74.7% 74.0 %和 76 .0 %。遗传进化分析显示A9株L片段的进化和同为亚洲黑线姬鼠分离的 76 118株较密切 ,和从欧洲、美洲其他动物分离病毒相差较远 ,提示汉坦病毒的进化和宿主动物密切相关。结论 汉坦病毒A9株和其他不同型别汉坦病毒L片段核苷酸序列的同源性在 85 %～ 70 .8%之间 ,和汉坦病毒原型株 76 118株的同源性最高。
- 李德新梁米芳王晓芳李川张全福霍子威抗长寿宋干
- 关键词：汉坦病毒基因碱基序列
- 汉滩病毒PS-6株的分离及其生物学性状研究被引量：4
- 2000年
- 目的 从病人血清分离汉坦病毒Ⅰ型毒株 ,为双价疫苗的配伍提供更好的候选株。方法 从陕西HFRS患者血清 ,按常规法分离汉坦病毒。用系列单克隆抗体、空斑减少中和试验、RT PCR及部分核苷酸序列分析等检定 ,确证所分离毒株的血清 (或基因 )型别。结果 从 17份HFRS患者血清中成功地分离到 1株汉坦病毒 ,定名为PS 6株。经上述方法全面鉴定确定其为汉滩病毒 (即Ⅰ型病毒 )。该毒株有较强的繁殖力 (毒力 )及较好的抗原性 ,其免疫血清对来源于不同地区的Ⅰ型病毒有较好的中和活性。结论 PS 6毒株有可能成为Ⅰ型病毒疫苗候选株 ,为双价或多价疫苗配伍。
- 姚树元杭长寿邱建明霍子威石晓宏张全福李川宋干
- 关键词：汉滩病毒生物学性状RT-PCR
- 汉滩病毒糖蛋白G1 G2和核蛋白NP在痘苗病毒天坛株中的联合表达被引量：7
- 1998年
- 将汉滩病毒７６／１１８株Ｍ、Ｓ片段分别插入转染质粒ｐＪＳＢ１１７５的Ｐ１１和Ｐ７．５启动子下游，构建成重组质粒ｐＪＳＢ１１Ｍ７．５Ｓ。采用Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ转染技术将重组质粒分别与痘苗病毒天坛株ＴＫ＋ｖｖ和表达Ｓ片段的重组痘苗病毒ｖＪＳＡ１１７５Ｓ进行共转染，免疫酶斑和蓝白斑法筛选并纯化，得到了重组病毒ｖＪＳＢ１１Ｍ７５Ｓ。Ｂｕｄｒ的选择压力试验表明，外源基因确实插入在ＴＫ基因区；ＰＣＲ及打点杂交证实了两个片段的插入；重组痘苗病毒基因组的部分序列分析显示，两个片段与各自的启动子连接正确；间接免疫荧光及放免沉淀证明了糖蛋白Ｇ１、Ｇ２和核蛋白ＮＰ的表达。
- 姚树元杭长寿邱建明马章亮李德新薛颖李川宋干
- 关键词：汉坦病毒重组痘苗病毒糖蛋白核蛋白
- 麻疹病毒CC-47株非编码区核苷酸序列测定与比较被引量：2
- 2001年
- 目的 测定麻疹病毒疫苗株长 47(CC 47)的非编码区核苷酸序列 ,并和其他麻疹病毒比较 ,为利用疫苗株病毒进一步研究奠定基础。方法 用RT PCR分段扩增并克隆麻疹病毒CC 47株基因组全序列 ,用基因特异引物测定非编码区的核苷酸序列。结果 CC 47疫苗株非编码区在基因组上为 7个不连续的片段 ,总计 1791个核苷酸。与其他野毒株及Edmonston衍生 5株疫苗株非编码区序列比较发现 ,CC 47疫苗株具有与Edmonston疫苗株系列相同的 4个特征性的核苷酸替代位点 ,分别位于基因组 3′末端第 2 6位 (U→A)、42位 (U→G)和M F基因间隔区FmRNA 5′非翻译区的 4978位(A→G)、5 34 9位 (A→G) ,这些位点的改变可能会影响病毒mRNA的合成、加工和翻译效率以及基因组的复制和包装。结论 不同基因型麻疹病毒具有同样的位点改变可能与病毒在半许可细胞中适应或减毒有关 。
- 胡孔新林崇哲王晓芳李川孟祥芝李德新
- 关键词：麻疹病毒非编码区核苷酸序列
- 汉坦病毒A9株全长L片段cDNA克隆和核苷酸序列测定
- 2001年
- 目的 克隆我国分离的汉坦病毒A9株L片段全长cDNA ,并测定其核苷酸序列。方法 用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术分段扩增汉坦病毒A9株全部L片段 ,用T A克隆方法进行PCR产物克隆 ,测定PCR产物的核苷酸序列。通过亚克隆将分段的L片段连接成全长cDNA克隆。结果 A9株的基因组L片段长度为 6 5 33个核苷酸 ,腺嘌呤核苷酸和尿嘧啶核苷酸丰富 (%A +U =62 47)。包含有一个单一的开放读码框架 (ORF) ,编码一个标准的质量为 2 46× 10 5 的蛋白 ,含有 215 1个氨基酸。A9株与 76 118、C1 1和C1 2株的同源性最高 ,达到 83 8%。与TULA病毒的关系较远 ,其核酸序列的同源性为 65 8%。将推导的A9株编码的氨基酸序列与其他 2 1种负链RNA病毒的依赖RNA的RNA聚合酶的氨基酸序列以及汉坦病毒几个代表株的L片段氨基酸序列进行比较 ,显示A9编码的RNA聚合酶也有 6个比较保守的区域以及几个极端保守的氨基酸残基。结论 汉坦病毒A9株L片段具有和其他汉坦病毒RNA聚合酶相似的核苷酸一级结构 ,通过对推导的氨基酸分析 。
- 王晓芳李德新刘尊李川梁米芳张全福霍子威宋干
- 关键词：汉坦病毒
- 汉坦病毒84Fli株S和M片段基因克隆、序列分析及在真核细胞中表达的研究被引量：6
- 2002年
- 目的 克隆汉坦病毒 84Fli株S ,M片段 ,测定这些基因的核苷酸序列 ,用瞬时表达了解S和M片段在真核细胞中的表达。方法 以我国分离的汉坦病毒 84Fli株感染的Vero E6细胞提取总RNA ,用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术扩增其S及M片段的全长cDNA。然后将 84Fli株的S ,M片段cDNA基因分别克隆入pCR2 1 TOPO载体中 ,随机挑选其中的 3个克隆测定核酸序列 ,确定汉坦病毒 84Fli株S和M片段核苷酸序列。根据S和M片段核苷酸序列设计引物 ,PCR扩增S及M片段的编码区 ,构建了真核表达质粒pcDNA3 84SC及pcDNA3 84MC。用质脂体法把质粒转入COS7细胞 ,瞬时表达NP及G1和G2糖蛋白。用免疫荧光 (IFA)、Westernblot和免疫沉淀方法检测核蛋白及糖蛋白的表达。结果 汉坦病毒 84Fli株的基因组S片段长度为 16 88个核苷酸 ,编码 430个氨基酸。汉坦病毒 84Fli株的基因组M片段长度为 36 16个核苷酸 ,编码 1136个氨基酸。用免疫荧光 (IFA)检测S和M片段在COS细胞中的瞬时表达为阳性。Westernblot结果显示 ,存在有相对分子质量为 5 0 0 0 0左右的核蛋白表达 ,免疫沉淀法显示有核蛋白、G1和G2糖蛋白的表达。结论 84Fli株病毒和其他汉滩病毒在核苷酸序列上虽有差异 ,但在氨基酸水平上的同源性仍很高 。
- 刘尊李德新李川王晓芳孟祥芝梁米芳
- 关键词：汉坦病毒片段基因核苷酸序列分析克隆
- 长－47麻疹病毒非编码区和P、M基因序列及载体构建
- 本发明提供了麻疹病毒长春－47疫苗株的所有非编码区和P、M编码区序列及其结构，P、M编码区编码的蛋白质氨基酸序列及其结构以及其非编码区序列在构建该疫苗病毒载体中的用途和载体构建方法。这些序列数据和方法可应用于使用该疫苗株...
- 李德新胡孔新王晓芳李川孟祥芝梁米芳
- 文献传递
- 流行性出血热病毒分子生物学研究及应用
- 2001年
- 本项目属于生物科学技术领域"863-102-10-03流行性出血热病毒基因工程疫苗研究"中的基础研究部分,从分子水平上阐述病毒结构和功能的关系,不仅对于发展基因工程疫苗所必需,而且对于了解病毒本质,继而对整个出血热的研究将会起到推动作用.
- 杭长寿李德新梁米芳石晓宏张全福霍子威解燕乡李川薛颖宋干
- 关键词：流行性出血热病毒分子生物学基因克隆
- 人源中和性抗汉滩病毒单克隆抗体Fab段基因的获得和表达被引量：19
- 1997年
- 运用噬菌体表面表达（Ｐｈａｇｅｄｉｓｐｌａｙ）技术，获得人源中和性抗汉滩病毒汉滩型Ｇ１基因工程单克隆抗体（单抗）Ｆａｂ段基因及其表达，并同时获得抗汉滩病毒核蛋白（ＮＰ）的Ｆａｂ抗体。从肾综合征出血热疫区恢复期病人抗凝血中分离到的外周淋巴细胞中，提取了总细胞ＲＮＡ。通过ＲＴ－ＰＣＲ方法，用一组人ＩｇＧＦａｂ基因特异性引物，从合成的ｃＤＮＡ中经ＰＣＲ扩增了一组轻链和重链Ｆａｂ段基因，将轻链和重链先后插入噬菌体载体ｐＣｏｍｂ３，成功地建立了抗汉滩病毒抗体基因库，并用纯化的汉滩病毒颗粒及抗汉滩病毒糖蛋白鼠单抗捕捉糖蛋白抗体原的方法，对此抗体库进行了富集筛选，在短期内成功地获得了抗汉滩病毒核蛋白和糖蛋白Ｇ１的人源单抗Ｆａｂ段基因，并在大肠杆菌中获得有效表达。核苷酸序列分析证实，所获得的基因为人源ＩｇＧＦａｂ基因。用特异性放射免疫沉淀（ＩＰ）、ＩＦＡＴ和ＥＬＩＳＡ以及空斑减少中和试验鉴定表明，表达的人Ｆａｂ抗体能识别汉滩病毒结构蛋白，其中抗Ｇ１人Ｆａｂ抗体具有体外中和活性。人源抗汉滩病毒基因工程抗体的获得，为今后可能的临床应用提供了良好前景。
- 梁米芳李德新杭长寿吴兴安朱公文薛颍李川李川
- 关键词：汉滩病毒单克隆抗体FAB段基因表达
