汪惠
- 作品数：35 被引量：61H指数：5
- 供职机构：首都医科大学附属北京胸科医院更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- p53缺失和突变对人肺癌细胞系恶性表型影响的比较
- 2003年
- 目的 比较研究外源正义和反义p53对所转染细胞系恶性表型的影响。方法 构建正义和反义p53C—DNA真核细胞表达载体pEGFP—p53(RS)，pEGFP—p53(AS)，载体有绿荧光蛋白基因监测基因转染和表达。经酶切图证明p53正向或反向联结。Liipofectin介导转染801D细胞(801D细胞有p53缺失和突变，蛋白表达阳性)，G418筛选，建立单克隆细胞系。PCR检测外源p53和neo基因。荧光显微镜检查转染细胞绿荧光蛋白表达。免疫组化染色证明突变蛋白表达。比较了pEGFP—p53(AS)和pEGFP—p53(RS)集落形成试验，裸鼠移植试验。FCM分析细胞周期。结果 酶切图证明pEGFP—p53(RS)和pEGFP—p53(AS)的p53c—DNA(RS)分别正向和反向联结质粒pEGFP。Lipofectin介导转染细胞801D细胞，G418筛选，获耐受集落，建立单细胞克隆转染细胞系pEGFP—p53(RS)—801D，pEGFP—p53(AS)801D和pEGFP—801D。PCR检测外源p53和neo基因存在于细胞，细胞可见绿色荧光，证明外源基因存在并稳定表达。免疫组化检测pEGFP—p53(AS)—801D，突变蛋白呈阴性，母系为阳性，显示反义p53封闭突变蛋白表达。pEGFP—p53(RS)—801D和pEGFP—p53(AS)801D细胞集落形成率和裸鼠移植成瘤率均降低，pEGFP—p53(RS)-801D更低。FCM分析细胞周期延滞。结论 有p53缺失和突变的人肺癌细胞系801D体内外恶性增殖明显，在同一细胞背景下，p53缺失比p53突变对恶性增殖起更重要作用。外源野生型p53在肿瘤细胞中可重建抑癌功能，外源反义p53可封闭突变蛋白表达，阻止细胞停留于G1期。
- 汪惠赖百塘李金照扬学惠张春彦岳文涛张洪涛李曦湛秀萍王玥
- 关键词：基因突变人肺癌裸鼠细胞恶性表型
- 第十届世界肺癌会议简述——肺癌分子生物学研究进展
- 2003年
- 汪惠
- 关键词：肺癌分子生物学疫情肿瘤染色体基因
- 肺癌P53基因治疗的实验研究和预后判断基因标记
- 2003年
- 肺癌死亡率在发达国家居癌死亡的首位.我国1992年流行病学调查资料显示肺癌死亡呈上升趋势,死亡率在大城市占癌死亡第一位.流行病学预测表明,今后30年肺癌死亡将继续增长,成为中国居民的主要死因.
- 汪惠赖百塘李金照岳文涛张洪涛杨学惠张春艳湛秀萍王月刘桂芝
- 关键词：肺癌P53基因基因治疗预后判断基因标记
- 制备两种P53重组腺病毒和流式细胞仪定量外源绿荧光蛋白表达
- 2010年
- 目的P53作为转录因子在细胞应激时呈活化型，调控细胞周期和程序性死亡抑制肿瘤生长，通常，通过各种机制P53呈非活化状态，其中包括P53C-末端负调控序列的作用。该研究目的是制备携带垒长和缺失这些负调控序列P53两种重组腺病毒和用流式细胞仪散点图（Flow cytometry scatter plot，FCM）检测人肺癌细胞外源绿荧光蛋白（Green fluorescence protein，GFP）表达。材料和方法利用pAdEasy-Track载体系统，构建两种P53重组质粒并在细菌中产生重组体，转染L293细胞产生三种重组腺病毒。三种不同浓度病毒分别感染人肺癌801D细胞，FCM分析GFP表达。结果测序证明重组腺病毒：Ad—P53（del）缺失p53C-末端终止密码子前111个碱基和非编码区，Ad—P53（wtp）没有P53碱基缺失。Ad（empty carrier）无P53。FCM scatter plot显示三种病毒感染801D细胞表达GFP百分率接近并随病毒浓度递增。801D包含了不同荧光强度比率的细胞。结论构建和制备了去C-末端P53和全长p53两种重组腺病毒，Ad—p53（del），Ad-p53（wtp）及空载体Ad-（empty）。流式细胞仪散点图证明该病毒试验系统可靠，可定量外源GFP表达，为病毒感染细胞选择浓度提供准确方法。
- 汪惠赖百塘李伟英杨学惠张春燕韦攀健李金照
- 关键词：野生型P53重组腺病毒
- 干扰COX-2基因表达对人肺腺癌A2细胞体外恶性增殖的影响被引量：2
- 2009年
- 背景与目的COX-2在多种肿瘤组织中高表达,参与了肿瘤的发生发展,RNA干扰(RNAi)技术是一种经济、快捷、高效的抑制特异基因表达的技术手段。本研究应用RNAi技术研究干扰COX-2基因表达的抑制效果及抑制COX-2基因表达对A2细胞体外恶性增殖的影响。方法以COX-2为靶点,构建3个带有人U6启动子的COX-2小干扰RNA(short interfering RNA,siRNA)表达载体。用脂质体lipofectamine介导,分别将3个siRNA表达载体及空载体转染到COX-2表达阳性的A2细胞,建立转染细胞株。采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法检测COX-2表达水平的变化。通过细胞生长曲线、集落形成试验研究干扰COX-2基因表达对A2细胞体外增殖的影响。结果经过PCR扩增、内切酶鉴定、DNA测序和BLAST比对证实3个siRNA和U6启动子序列正确并准确克隆到pEGFP载体。转染细胞株分别命名为A2-3、A2-7、A2-10和A2-p。转染后24h、48h、72h,A2-p细胞均有绿色荧光表达,而A2-3、A2-7、A2-10细胞均未观察到绿色荧光。RT-PCR和Western blot结果显示,3个siRNA表达载体均发挥作用,COX-2表达受到抑制,与A2细胞比较,A2-3、A2-7、A2-10细胞的COX-2 mRNA表达量分别降低15.6%、20.4%和64.2%,COX-2蛋白表达量分别降低23.7%、36.7%和60.2%。细胞生长曲线、集落形成试验的结果显示,A2-10细胞生长减慢,集落形成率减少,而A2-3和A2-7细胞生长没有明显的改变。结论应用RNAi技术熄灭COX-2基因表达对A2细胞的体外恶性增殖有明显的抑制作用。
- 李伟英汪惠赖百塘杨学惠张春彦
- 关键词：CYCLOOXYGENASE-2RNA干扰体外肺肿瘤
- 原发性肺癌GSTM1基因多态性与化疗效果关系的研究被引量：1
- 2008年
- 背景与目的GSTM1参与环境污染物如苯丙芘和其它多环芳烃及抗癌药等的代谢,其多态性是否会影响肺癌患者的化疗效果及预后,国内相关研究比较少,本研究旨在揭示GSTM1多态性是否与化学药物治疗的敏感性有关以及对患者预后的影响。方法采用聚合酶链反应技术,检测接受化学药物治疗的137例原发性肺癌患者GSTM1基因型频率分布情况。结果137例肺癌患者GSTM1缺陷型频率为58.4%(80/ 137),功能型频率为41.6%(57/137);化疗有效组GSTM1缺陷型频率为69.05%(58/84),化疗无效组GSTM1缺陷型频率为41.51%(22/53),二者有统计学差异(P=0.001)。采用铂类化疗方案的患者,化疗有效组GSTM1缺陷型频率为65.43%(53/81),化疗无效组GSTM1缺陷型频率为42%(21/50),二者有统计学差异(P= 0.0025)。对于进展期患者化疗有效组GSTM1缺陷型频率为70.13%(54/77),化疗无效组GSTM1缺陷型频率为41.51%(22/53),二者有统计学差异(P=0.001)。当化疗有效时携带GSTM1功能型的鳞癌、小细胞癌患者生存时间(中位生存期分别为42个月和14个月)比携带GSTM1缺陷型的鳞癌、小细胞癌患者长(中位生存期分别为6个月和7个月)(P<0.05);而腺癌患者,携带GSTM1功能型和缺陷型的生存时间(中位生存期分别为13个月和11个月)差异无统计学意义(P>0.05)。对于化疗无效的患者,不论GSTM1为何种基因型、病理分型如何,患者中位生存期均比较接近,生存时间没有统计学差异(P>0.05)。结论GSTM1缺陷型的患者接受化学药物治疗的效果比GSTM1功能型的患者好;采用铂类化疗方案时GSTM1缺陷型的患者化疗效果比GSTM1功能型的患者好。当化疗有效时,患者生存时间与病理分型、GSTM1基因型相关。
- 李伟英顾艳斐赖百塘汪惠
- 关键词：谷胱甘肽S-转移酶M1基因多态性肺肿瘤
- 肺癌转移相关基因的研究进展被引量：2
- 1999年
- 赖百塘汪惠
- 关键词：肺癌P53基因淋巴结转移突变
- p53反义RNA对人肺癌细胞表型和顺铂敏感性的影响被引量：1
- 2002年
- 目的 研究外源p53反义RNA对有p53基因 2 4 8密码点突变的人肺癌细胞系恶性表型和顺铂敏感性的影响。方法 构建p53反义RNA真核细胞表达载体PEGFP p53(AS) ,经酶切图证明反向联结质粒。Lipofectin介导转染有p53基因 2 4 8密码点突变的人肺癌细胞系 80 1D ,经G41 8筛选获耐受克隆。稀释法建立单细胞克隆系 ,应用PCR检测外源基因 ,荧光显微镜检测细胞绿色荧光蛋白表达 ,p53单抗免疫组化染色检测p53突变蛋白表达 ,体外集落形成实验检测细胞生长 ,流式细胞仪检测细胞周期 ,MTT法检测细胞对顺铂药物敏感性。结果 酶切图证明了p53 cDNA反向联结于质粒 ,构建了PEGFP p53(AS) ,并建立了转染单细胞克隆系PEGFP p53(AS) 80 1D及空载细胞系PEGFP 80 1D。PCR检测外源p53基因和neo基因存在于转染细胞系 ,而荧光显微镜下发现其胞浆有绿荧光蛋白表达。免疫组化染色p53突变蛋白在 80 1D细胞系为阳性 ,而PEGFP p53(AS) 80 1D为阴性 ,证明外源反义p53在转染细胞稳定表达并封闭内源突变蛋白表达。与母系相比 ,PEG FP p53(AS) 80 1D集落形成抑制率为 61 % (P <0 .0 1 ) ,流式细胞仪检测该细胞系G1期细胞数明显增加 ,出现G1期阻滞的表现。MTT检测PEGFP p53(AS) 80 1D对顺铂比母系更为敏感。结论 有p53基因 2 4 8密码点?
- 汪惠赖百塘李金照杨学惠张春彦湛秀萍王玥
- 关键词：肺癌转染细胞表型顺铂敏感性
- 生长因子与肺癌的治疗被引量：1
- 1997年
- 蛙皮素/胃泌肽、上皮生长因子及转化生长因子等30余种生长因子,在肺癌的自泌及旁泌生长刺激中起重要作用,在任何环节上干扰自泌与旁泌生长圈,都将抑制肿瘤细胞的生长。应用针对个别生长因子及其受体的抗体、拮抗剂可能抑制肿瘤的生长。由于肺癌的生长因子繁多、复杂,使其临床应用受限。广谱生长因子桔抗剂具有广谱抑制多种生长因子作用,而且分子小,能很好穿透肿瘤,可望成为肺癌新的辅助疗法。
- 赖百塘汪惠
- 关键词：肺肿瘤抗体拮抗剂
- 莱菔硫烷和铂类药的抗癌联合制剂
- 含有莱菔硫烷和铂类药的抗癌联合制剂，用于癌症尤其是肺癌的治疗，组成成分可以同时、分别或顺序给药。其中莱菔硫烷增加了铂类抗癌药的抗癌效果。
- 赖百塘汪惠
- 文献传递
