林丽玉
- 作品数：7 被引量：36H指数：3
- 供职机构：福建师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：福建省教育厅资助项目福建省科技厅资助项目福建省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学化学工程更多>>
- 重组AiiA蛋白表达及其酶学性质研究
- 革兰氏阴性细菌是主要的植物致病菌,而其致病菌主要是通过细菌的群体感应/(quorum sensing, QS/)系统来调控其致病因子的表达,而N-酰基高丝氨酸内酯/(N-acyl-homoserine lactones,...
- 林丽玉
- 关键词：表达条件优化酶动力学定点突变真核表达
- 文献传递网络资源链接
- 苏云金芽孢杆菌aiiA基因在毕赤酵母中的分泌表达被引量：2
- 2012年
- 根据GenBank中aiiA基因设计引物,以苏云金芽孢杆菌基因组为模板扩增出aiiA基因后构建出pPIC9K-aiiA重组表达载体,线性化后转化毕赤酵母GS115,获得重组工程菌GS115/pPIC9K-aiiA,以体积分数为1%的甲醇进行诱导表达.表达产物经SDS-PAGE及Western blotting分析显示表达的蛋白具有较好的免疫特异性.抗病性实验显示表达的目的蛋白具有生物学活性和良好的抗病能力.
- 毛惠民林丽玉杨彩云温真曾世涌杨梅
- 关键词：AIIA基因PPIC9K分泌表达
- 重组工程菌E.coli BL21(DE3)-pET29a-aiiA可溶性AiiA蛋白的发酵条件优化被引量：3
- 2010年
- 通过对工程菌E.coli BL21(DE3)-pET29a-aiiA的摇瓶发酵培养条件进行优化,确定了AiiA蛋白可溶性表达的最佳发酵培养基为牛肉膏蛋白胨.目的蛋白可溶性表达的最佳诱导条件为:IPTG浓度0.6 mmol/L,诱导初始OD600为0.5,诱导时间为20 h,温度20℃,pH为7.0,微量元素Na2HPO420 mmol/L,250 mL三角瓶的装液量为70 mL.优化前可溶性AiiA蛋白的相对含量为2.23 mg/mL,占总目的蛋白的31.4%,优化后达到4.54 mg/mL,占总目的蛋白的60.3%,大大提高了目的蛋白的可溶性表达.
- 杨梅林丽玉温真杨彩云
- 关键词：发酵
- 定点突变提高N-酰基高丝氨酸内酯酶酶活和温度稳定性被引量：3
- 2014年
- 【目的】提高N-酰基高丝氨酸内酯酶(N-acylhomoserine lactonase,AiiA)酶活及温度稳定性。【方法】本研究基于AiiA同源蛋白的三维结构对AiiA进行定点突变,分析野生型AiiA及其突变蛋白酶活和温度稳定性。【结果】野生型AiiA较不稳定,在45℃下温浴30 min,或4℃储存5 d后均失去降解N-酰基高丝氨酸内酯(N-acylhomoserine lactone,AHL)的活性。但是突变AiiA蛋白(N65K,T195R和A206E)的酶活力较野生型AiiA均提高了20%以上,且4℃储存时间延长到7 d。此外,突变株N65K比野生型AiiA对高温具有更强的耐受性,在45℃温浴后剩余酶活力达到45%以上,55℃温浴30 min后仍保留5.0%的酶活力。【结论】通过定点突变改造AiiA蛋白结构,提升了AiiA蛋白的酶活和温度稳定性。
- 杨梅谢盼盼简思美林丽玉杨彩云
- 关键词：N-酰基高丝氨酸内酯酶学特性定点突变
- 毕赤酵母蛋白表达系统研究进展被引量：24
- 2011年
- 选择合适的蛋白表达系统是外源基因能否成功表达的关键。毕赤酵母(Pichia pastoris)蛋白表达系统是近些年来发展起来的一种真核表达系统,与其他表达系统相比,该系统所具有的诸多优势使其研究价值和应用价值越来越广泛,已经成功表达了多种蛋白质。简要综述其特点、表达宿主菌、表达载体以及其元件、外源蛋白的表达及其影响因素等方面的基础研究和最新进展。
- 杨梅温真林丽玉杨彩云
- 关键词：毕赤酵母外源蛋白
- 苏云金芽孢杆菌aiiA基因启动子的克隆及功能分析被引量：1
- 2011年
- 根据已报道的aiiA基因序列(AY460124)设计特异性PCR引物,扩增得到aiiA基因启动子序列的单一产物.将该启动子序列代替pET-28a-GFP质粒上的T7启动子,构建绿色荧光蛋白功能分析载体.经测序比对和生物信息学软件分析发现该序列含有6个可能的启动区域和19个不同类型的转录结合位点.最后通过荧光显微镜观察到绿色荧光蛋白发出荧光,从而分析了该序列的启动子活性.
- 温真杨彩云林丽玉毛惠民杨梅
- 关键词：苏云金芽胞杆菌启动子绿色荧光蛋白
