温真
- 作品数：7 被引量：38H指数：3
- 供职机构：福建师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：福建省教育厅资助项目福建省科技厅资助项目福建省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学化学工程轻工技术与工程更多>>
- 苏云金芽孢杆菌aiiA基因在毕赤酵母中的分泌表达被引量：2
- 2012年
- 根据GenBank中aiiA基因设计引物,以苏云金芽孢杆菌基因组为模板扩增出aiiA基因后构建出pPIC9K-aiiA重组表达载体,线性化后转化毕赤酵母GS115,获得重组工程菌GS115/pPIC9K-aiiA,以体积分数为1%的甲醇进行诱导表达.表达产物经SDS-PAGE及Western blotting分析显示表达的蛋白具有较好的免疫特异性.抗病性实验显示表达的目的蛋白具有生物学活性和良好的抗病能力.
- 毛惠民林丽玉杨彩云温真曾世涌杨梅
- 关键词：AIIA基因PPIC9K分泌表达
- 毕赤酵母蛋白表达系统研究进展被引量：24
- 2011年
- 选择合适的蛋白表达系统是外源基因能否成功表达的关键。毕赤酵母(Pichia pastoris)蛋白表达系统是近些年来发展起来的一种真核表达系统,与其他表达系统相比,该系统所具有的诸多优势使其研究价值和应用价值越来越广泛,已经成功表达了多种蛋白质。简要综述其特点、表达宿主菌、表达载体以及其元件、外源蛋白的表达及其影响因素等方面的基础研究和最新进展。
- 杨梅温真林丽玉杨彩云
- 关键词：毕赤酵母外源蛋白
- 苏云金芽孢杆菌aiiA基因在枯草芽孢杆菌中的表达被引量：4
- 2013年
- 根据NCBI上已公布的枯草芽孢杆菌BS168菌株的β-1,4-glucanase(eglS)基因以及苏云金芽孢杆菌的aiiA基因序列,设计引物并扩增得到eglS基因的启动子、信号肽序列和aiiA基因.构建重组表达载体Ps4-eaiiA,转化枯草芽孢杆菌BS168,得到枯草芽孢杆菌工程菌BS168/Ps4-eaiiA.该工程菌诱导发酵后经SDS-PAGE和Western blotting分析表明:aiiA基因实现了在枯草芽孢杆菌中的表达.对胡萝卜软腐欧文氏菌进行马铃薯的抗病性实验,结果表明aiiA基因在枯草芽孢杆菌中表达的AiiA蛋白对胡萝卜欧文氏杆菌表现出一定的抗病性.
- 曾世涌温真何海滔杨彩云毛惠民杨梅
- 关键词：苏云金芽胞杆菌
- 重组工程菌E.coli BL21(DE3)-pET29a-aiiA可溶性AiiA蛋白的发酵条件优化被引量：3
- 2010年
- 通过对工程菌E.coli BL21(DE3)-pET29a-aiiA的摇瓶发酵培养条件进行优化,确定了AiiA蛋白可溶性表达的最佳发酵培养基为牛肉膏蛋白胨.目的蛋白可溶性表达的最佳诱导条件为:IPTG浓度0.6 mmol/L,诱导初始OD600为0.5,诱导时间为20 h,温度20℃,pH为7.0,微量元素Na2HPO420 mmol/L,250 mL三角瓶的装液量为70 mL.优化前可溶性AiiA蛋白的相对含量为2.23 mg/mL,占总目的蛋白的31.4%,优化后达到4.54 mg/mL,占总目的蛋白的60.3%,大大提高了目的蛋白的可溶性表达.
- 杨梅林丽玉温真杨彩云
- 关键词：发酵
- 苏云金芽孢杆菌aiiA基因启动子的克隆及功能分析被引量：1
- 2011年
- 根据已报道的aiiA基因序列(AY460124)设计特异性PCR引物,扩增得到aiiA基因启动子序列的单一产物.将该启动子序列代替pET-28a-GFP质粒上的T7启动子,构建绿色荧光蛋白功能分析载体.经测序比对和生物信息学软件分析发现该序列含有6个可能的启动区域和19个不同类型的转录结合位点.最后通过荧光显微镜观察到绿色荧光蛋白发出荧光,从而分析了该序列的启动子活性.
- 温真杨彩云林丽玉毛惠民杨梅
- 关键词：苏云金芽胞杆菌启动子绿色荧光蛋白
- 重组AiiA蛋白可溶性表达及发酵条件优化被引量：6
- 2011年
- 通过摇瓶培养确定重组工程菌E.coli BL21(DE3)-pET29a-aiiA表达AiiA蛋白可溶性表达的最优化条件,考察以牛肉膏蛋白胨为基础培养基添加不同种类的碳源、不同浓度的磷酸钾缓冲液(pH7.0)、微量元素、乙酸以及调整牛肉膏蛋白胨的比值对AiiA蛋白可溶性表达的影响,并用15 L发酵罐进行补料分批发酵,确定高密度发酵工艺条件。结果表明:优化发酵培养基为蔗糖10 g/L,牛肉膏7.8 g/L,蛋白胨31.2 g/L,NaCl 5 g/L,K2 HPO4.3H2 O 14 g/L,KH2 PO4 5.3 g/L,4 mL/L微量元素。优化后AiiA蛋白可溶性达4.31 mg/mL。在15 L发酵罐补料分批发酵培养中,诱导24 h时,发酵菌OD600达到18.5,可溶性蛋白表达量5.9 mg/mL,占AiiA总蛋白50.7%,实现了扩大培养。
- 杨彩云杜慈黄平温真毛惠民杨梅
- 关键词：补料分批发酵
