毛惠民
- 作品数：7 被引量：16H指数：3
- 供职机构：福建师范大学生命科学学院更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 苏云金芽胞杆菌中aiiA基因密码子偏好性分析被引量：6
- 2013年
- aiiA基因指导表达的AiiA蛋白是一类能水解细菌群体感应信号分子内酯键的内酯酶。本研究使用CodonW、CUSP和CHIPS等相关程序对苏云金芽胞杆菌中aiiA基因的密码子使用情况进行分析,比较了aiiA基因与大肠杆菌、苏云金芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌以及毕赤酵母的密码子偏好性。结果表明,aiiA基因偏好使用以A、T结尾的密码子;aiiA基因的密码子用法与大肠杆菌、苏云金芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌和毕赤酵母的基因组密码子用法都有不同程度的偏好差异,其中与毕赤酵母的密码子用法差异最大;比较了aiiA基因分别以苏云金芽胞杆菌、大肠杆菌、枯草芽胞杆菌及毕赤酵母为宿主时密码子使用频率,发现都含有不同程度的低频密码子聚集现象,如果要在上述几种表达系统中实现aiiA基因的高效表达则需对aiiA基因的部分密码子进行优化改造。
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- 关键词：苏云金芽胞杆菌AIIA基因密码子偏好性密码子优化异源表达
- 苏云金芽孢杆菌aiiA基因在毕赤酵母中的分泌表达被引量：2
- 2012年
- 根据GenBank中aiiA基因设计引物,以苏云金芽孢杆菌基因组为模板扩增出aiiA基因后构建出pPIC9K-aiiA重组表达载体,线性化后转化毕赤酵母GS115,获得重组工程菌GS115/pPIC9K-aiiA,以体积分数为1%的甲醇进行诱导表达.表达产物经SDS-PAGE及Western blotting分析显示表达的蛋白具有较好的免疫特异性.抗病性实验显示表达的目的蛋白具有生物学活性和良好的抗病能力.
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- 关键词：AIIA基因PPIC9K分泌表达
- 苏云金芽孢杆菌aiiA基因在枯草芽孢杆菌中的表达被引量：4
- 2013年
- 根据NCBI上已公布的枯草芽孢杆菌BS168菌株的β-1,4-glucanase(eglS)基因以及苏云金芽孢杆菌的aiiA基因序列,设计引物并扩增得到eglS基因的启动子、信号肽序列和aiiA基因.构建重组表达载体Ps4-eaiiA,转化枯草芽孢杆菌BS168,得到枯草芽孢杆菌工程菌BS168/Ps4-eaiiA.该工程菌诱导发酵后经SDS-PAGE和Western blotting分析表明:aiiA基因实现了在枯草芽孢杆菌中的表达.对胡萝卜软腐欧文氏菌进行马铃薯的抗病性实验,结果表明aiiA基因在枯草芽孢杆菌中表达的AiiA蛋白对胡萝卜欧文氏杆菌表现出一定的抗病性.
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- 关键词：苏云金芽胞杆菌
- 苏云金芽孢杆菌aiiA基因在毕赤酵母中的表达
- 当代农业生产中,由于动植物病害而引起的减产严重影响农业产业的发展。革兰氏阴性细菌通过细菌群体感应（QS）调控致病基因的表达是引起动植物病害的重要原因,而革兰氏阴性细菌群体感应效应中N-酰基高丝氨酸内酯（AHL）又是其主要...
- 毛惠民
- 关键词：毕赤酵母GS115可溶性表达分泌表达密码子优化
- 文献传递
- 苏云金芽孢杆菌aiiA基因启动子的克隆及功能分析被引量：1
- 2011年
- 根据已报道的aiiA基因序列(AY460124)设计特异性PCR引物,扩增得到aiiA基因启动子序列的单一产物.将该启动子序列代替pET-28a-GFP质粒上的T7启动子,构建绿色荧光蛋白功能分析载体.经测序比对和生物信息学软件分析发现该序列含有6个可能的启动区域和19个不同类型的转录结合位点.最后通过荧光显微镜观察到绿色荧光蛋白发出荧光,从而分析了该序列的启动子活性.
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- 关键词：苏云金芽胞杆菌启动子绿色荧光蛋白
- 重组AiiA蛋白可溶性表达及发酵条件优化被引量：6
- 2011年
- 通过摇瓶培养确定重组工程菌E.coli BL21(DE3)-pET29a-aiiA表达AiiA蛋白可溶性表达的最优化条件,考察以牛肉膏蛋白胨为基础培养基添加不同种类的碳源、不同浓度的磷酸钾缓冲液(pH7.0)、微量元素、乙酸以及调整牛肉膏蛋白胨的比值对AiiA蛋白可溶性表达的影响,并用15 L发酵罐进行补料分批发酵,确定高密度发酵工艺条件。结果表明:优化发酵培养基为蔗糖10 g/L,牛肉膏7.8 g/L,蛋白胨31.2 g/L,NaCl 5 g/L,K2 HPO4.3H2 O 14 g/L,KH2 PO4 5.3 g/L,4 mL/L微量元素。优化后AiiA蛋白可溶性达4.31 mg/mL。在15 L发酵罐补料分批发酵培养中,诱导24 h时,发酵菌OD600达到18.5,可溶性蛋白表达量5.9 mg/mL,占AiiA总蛋白50.7%,实现了扩大培养。
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- 关键词：补料分批发酵
