孙骥
- 作品数：11 被引量：48H指数：3
- 供职机构：川北医学院附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金四川省自然科学基金博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 转录因子YY1上调PD-L1表达促进胆囊癌免疫逃逸的作用研究被引量：2
- 2020年
- 目的研究转录因子阴阳1(Yin-Yang1,YY1)上调程序性死亡分子配体1(PD-L1)表达促进胆囊癌免疫逃逸的作用。方法采用免疫组化法检测胆囊癌组织、癌旁组织、正常胆囊组织中YY1蛋白表达水平,体外培养正常人胆囊上皮细胞系HGBEC和人胆囊癌细胞系GBC-SD、SGC-996、IH-GB1,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定各细胞中YY1水平;YY1 siRNA-1675转染GBC-SD细胞。实验分为BC组、YY1 siRNA NC组、YY1 siRNA-1675组。流式细胞仪测定PD-L1、CD69、CD25水平及人T淋巴细胞凋亡率;酶联免疫吸附法(ELISA)测定上清液中白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)、干扰素γ(IFN-γ)水平;PROMO网站预测YY1的潜在靶基因,行双荧光素酶报告实验验证。结果与正常组织相比,癌旁组织、胆囊癌组织中YY1阳性表达率显著升高(P<0.05),与癌旁组织相比,胆囊癌组织中YY1蛋白阳性表达率显著升高(P<0.05);与人胆囊上皮HGBEC细胞相比,人胆囊癌IH-GB1、SGC-996、GBC-SD细胞中YY1水平显著升高(P<0.05),其中GBC-SD细胞中YY1水平最高,因此后续实验以GBC-SD细胞进行。与BC组、YY1 siRNA-NC组相比,YY1 siRNA-1675组IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ、CD69、CD25水平显著升高(P<0.05),YY1、PD-L1水平和人T淋巴细胞凋亡率明显降低(P<0.05);PROMO网站预测表明,PD-L1是YY1的靶基因,双荧光素酶报告实验证明PD-L1是YY1的作用靶点。结论下调YY1水平可靶向抑制PD-L1表达,可能通过此机制抑制胆囊癌免疫逃逸。
- 周杰李敬东权刚孙骥
- 关键词：胆囊癌免疫逃逸
- miR-409-3p通过调控SLBP影响肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭被引量：1
- 2021年
- 目的探讨miR-409-3p对茎环结合蛋白(SLBP)表达的调控作用及其对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法采用qRT-PCR、Western blotting分别检测肝癌组织、癌旁组织及细胞系中miR-409-3p、SLBP的表达水平;以表达量最低的肝癌细胞Hep3B为研究对象,分别将miR-NC、miR-409-3p mimics、si-NC、si-SLBP、miR-409-3p mimics与pcDNA-NC、miR-409-3p mimics与pcDNA-SLBP转染至Hep3B细胞。MTT检测细胞增殖能力;Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭能力;双荧光素酶报告实验验证miR-409-3p与SLBP的相互作用。结果肝癌细胞株中miR-409-3p的表达水平明显低于THLE-3细胞(P<0.05),SLBP的表达水平明显高于THLE-3细胞(P<0.05);转染miR-409-3p mimics或si-SLBP均可抑制细胞增殖、迁移和侵袭;双荧光素酶报告实验证实miR-409-3p能与SLBP的3’UTR特异性结合;共转染miR-409-3p mimics与pcDNA-SLBP可拮抗miR-409-3p mimics对细胞增殖、迁移和侵袭的作用。结论miR-409-3p可靶向干扰SLBP基因的表达从而抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭。
- 周杰李敬东权刚孙骥岳亮
- 关键词：肝癌增殖迁移
- 腹腔镜技术治疗复杂肝胆管结石病的难点及手术决策分析被引量：29
- 2021年
- 目的探讨腹腔镜技术治疗复杂肝胆管结石病的难点与手术决策。方法回顾性收集2019年12月至2020年12月川北医学院附属医院肝胆外科收治的因复杂肝胆管结石病行腹腔镜下肝切除手术治疗的13例患者的临床资料。男性3例,女性10例,平均年龄50.8岁(范围:14~67岁)。所有患者均有上腹部疼痛表现,其中4例伴有发热。所有患者均有胆囊切除术史。行腹腔镜下左半肝切除+胆道探查术7例,腹腔镜下右半肝切除+胆道探查术2例,腹腔镜下肝方叶切除(肝脏4b段+部分5段)+肝门胆管整形+胆道探查术2例,腹腔镜下肝方叶切除(肝脏4b段+部分5段)+肝门胆管整形+重建胆肠吻合术2例。所有患者术后3个月复查腹部超声和胆道镜。结果本组13例患者平均手术时间为5.2 h(范围:3.6~6.5 h),平均出血量278 ml(范围:120~580 ml)。1例术中出现十二指肠球部损伤,缺损面积约1.0 cm×1.2 cm,及时发现后评估缺损面积,对损伤部位予以修剪,采用可吸收线横行间断缝合十二指肠球部,修补后行胃空肠吻合术;1例出现小肠浆膜层损伤,用可吸收线间断缝合包埋,术后恢复顺利。本组患者术后均顺利恢复,无死亡病例。术后3个月对患者进行腹部超声及经T管窦道胆道镜检查,其中3例患者发现胆道残留结石(2例在术后3个月行经T管窦道胆道镜取尽结石;1例患者因手术后未满3个月,处于恢复期未处理结石),余10例患者均无结石残留。结论充分掌握复杂肝管结石手术中的三项关键技术——粘连松解及肝门显露、腹腔镜肝切除术、腹腔镜下胆肠吻合口处理,是安全施行腹腔镜技术治疗复杂肝胆管结石的基础。
- 李伟男熊永福朱建交杨刚孙骥李敬东
- 关键词：腹腔镜复杂肝胆管结石手术难点
- 腹腔镜胰腺中段切除联合对端吻合术
- 2018年
- 胰腺良性疾病发病率高于恶性疾病，以囊性疾病、神经内分泌肿瘤和实性假乳头状肿瘤最为常见，多数需手术治疗，剜除或局部切除是较为理想的手术方式。而当病变直径稍大、与主胰管稍近（〈3mm安全距离）或术中需要处理主胰管时，胰腺节段性切除联合胰肠吻合术、胰十二指肠切除术、胰体尾切除术是常用的手术方式。
- 任亦星李敬东周杰孙骥何明
- 关键词：胰腺腹腔镜实性假乳头状肿瘤胰十二指肠切除术神经内分泌肿瘤胰体尾切除术
- 单人进行大鼠胃旁路手术的学习曲线被引量：2
- 2014年
- 目的 分析单人进行大鼠胃旁路手术模型建立的学习曲线.方法 2013年6月至2013年9月,分别由两组（A组和B组）实验人员各完成60只大鼠的胃旁路手术,并按每组手术先后次序再分别分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ3个时间段,每时间段内大鼠20只.先比较A组与B组间手术时间和术后存活率的差异,再比较两组内各时间段之间手术时间和术后存活率之间的差异.结果 A组与B组手术时间和术后存活率的比较,差异均无统计学意义（均P＞0.05）.但AⅡ和AⅢ组手术时间较AⅠ组显著缩短[（78.5±2.5）和（73.3±1.4）比（127.3±3.2） min,均P＜0.01],大鼠存活率明显提高[75％（15/20）和85％（17/20）比30％（6/20）,均P＜0.05].B组内三个时间段也得出了与A组相似的结果.结论 单人进行大鼠胃旁路手术学习曲线约为20只,迈过学习曲线后可获得较为高效而稳定的建模成功率.
- 任亦星Ali TavakkoliPal Atanu李敬东孙骥李强
- 关键词：胃旁路手术
- 基因沉默伴侣蛋白CCT6A对甲状腺未分化癌细胞增殖和侵袭能力的影响
- 2021年
- 目的:探讨基因沉默伴侣蛋白CCT6A对甲状腺未分化癌细胞(8505C和CAL-62)增殖和侵袭能力的影响。方法:比较人新鲜甲状腺癌癌旁组织、甲状腺乳头状癌组织、甲状腺未分化癌组织中CCT6A mRNA相对表达量;选择两种人甲状腺未分化癌细胞株8505C和CAL-62,构建敲低CCT6A蛋白表达水平的细胞系,利用蛋白质印迹法验证转染效率后检测信号转导蛋白SMAD2的表达和活化。CCK8实验检测敲低CCT6A表达后甲状腺未分化癌细胞增殖能力的变化,Transwell实验检测细胞的迁移能力。结果:甲状腺未分化癌组织中CCT6A的mRNA表达水平上调。敲低CCT6A的甲状腺未分化癌细胞8505C和CAL-62中信号转导蛋白SMAD2的磷酸化激活水平显著下调。与阴性对照组相比,基因沉默实验组的细胞增殖能力显著下降,其侵袭能力亦显著减弱(P<0.05)。结论:CCT6A在甲状腺未分化癌发生发展中起关键作用,敲低CCT6A可通过下调SMAD2活化水平抑制细胞增殖和侵袭能力,未来CCT6A可能成为治疗甲状腺未分化癌的潜在靶点。
- 孙骥孙骥李敬东李敬东
- 关键词：甲状腺未分化癌SMAD2细胞增殖细胞侵袭
- miR-539靶向GPD1L对雨蛙素诱导的急性胰腺炎细胞模型凋亡和自噬的影响被引量：1
- 2022年
- 目的研究miR-539对雨蛙素(Cerulein)诱导的急性胰腺炎(AP)细胞模型凋亡和自噬的影响及分子机制。方法用15 nmol/L Cerulein处理胰腺腺泡A42J细胞4、8、12、24 h,建立AP模型。淀粉酶试剂盒检测细胞上清中淀粉酶(AMY)水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养上清中白细胞介素(IL)-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-539和甘油3-磷酸脱氢酶1样蛋白(GPD1L)mRNA的水平,Western印迹检测GPD1L、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、膜型LC3(LC3Ⅰ)、胞浆型LC3(LC3Ⅱ)、Beclin1和p62的表达,流式细胞术测定细胞凋亡率,双荧光素酶报告系统验证miR-539与GPD1L间的调控关系。结果与Control组相比,Cerulein组AR42J细胞中miR-539含量显著升高(P<0.05),GPD1L mRNA和GPD1L蛋白含量显著降低(P<0.05),与Control组相比,Cerulein组AR42J细胞中miR-539含量和细胞凋亡率Bax、LC3-ⅡCerulein均显著升高,Bcl-2、p62含量显著降低(P<0.05);与Cerulein+anti-miR-con组相比,Cerulein+anti-miR-539组结果相反(P<0.05)。与miR-con组相比,过表达miR-539的Cerulein处理组细胞中GPD1L mRNA和蛋白含量均显著降低(P<0.05);抑制miR-539组的Cerulein处理组细胞中GPD1LmRNA和蛋白含量均显著升高(P<0.05)。与Cerulein+pcDNA-NC组相比,Cerulein+GPD1L组的AR42J细胞中GPD1L Bcl-2、p62水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率、Bax、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ和Beclin1含量均显著降低(P<0.05)。与Cerulein+anti-miR-539+si-con组相比,Cerulein+anti-miR-539+si-GPD1L组AR42J细胞中GPD1L、Bcl-2、p62、细胞凋亡率均显著下降,LC3Ⅰ、LC3Ⅱ和Beclin1、Bax显著升高(P<0.05)。结论miR-539通过靶向GPD1L调控Cerulein诱导的胰腺AR42J细胞凋亡和自噬。
- 周杰李敬东权刚孙骥
- 关键词：胰腺炎雨蛙素凋亡自噬
- 分泌蛋白CRLF1表达对结直肠癌细胞增殖和细胞克隆能力的影响被引量：2
- 2021年
- 目的:深入研究细胞因子受体样因子1(CRLF1)表达对结直肠癌细胞增殖和细胞克隆能力的影响。方法:酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中CRLF1表达水平,提取新鲜肿瘤及癌旁组织样本RNA,测定CRLF1的相对表达量。培养人结直肠癌细胞株HCT116和SW620,合成si-NC和si-CRLF1小干扰RNA,对HCT116和SW620细胞进行转染,使用实时聚合酶链反应(real-time PCR)及ELISA法验证转染效率,CCK8实验检测转染后结直肠癌细胞增殖能力的变化,克隆形成实验检测细胞克隆形成的能力,流式细胞术检测细胞凋亡水平。Western blot检测AKT信号通路及变化。结果:结直肠癌患者血清CRLF1水平显著高于健康捐献者血清。结直肠癌组织中CRLF1 mRNAG表达水平显著高于癌旁组织。分别在两种细胞系中通过转染si-CRLF1以实现敲低CRLF1表达。敲低CRLF1表达后结直肠癌细胞HCT116和SW620的细胞增殖能力及细胞克隆形成能力明显减弱(P<0.05),细胞凋亡率显著升高。敲低CRLF1表达后p-AKT表达水平显著降低。结论:CRLF1表达通过调控AKT信号通路调控结直肠癌进展,该蛋白可能成为诊断结直肠癌的生物标志物以及治疗结直肠癌的潜在靶点。
- 孙骥孙骥崔文娟熊永福
- 关键词：细胞增殖克隆形成结直肠癌
- 腹腔镜技术在保留十二指肠胰头切除术中的应用(附视频)被引量：8
- 2020年
- 随着影像学技术的进步及人们健康观念的加强,胰头部良性病变的检出率不断升高,胰腺囊性肿瘤及神经内分泌肿瘤是最常见的胰腺良性肿瘤,胰十二指肠切除术(Whipple术)是最常用的手术方式[1-2]。然而,Whipple术手术创伤大,术后生活质量欠佳,给此类疾病的治疗带来巨大的挑战。近年来随着外科手术技术的发展以及对器官功能认识的不断深入,胰腺手术愈来愈趋于精准化。
- 李伟男杨刚孙骥熊永福李敬东
- 关键词：腹腔镜胰腺切除术胰腺肿瘤
- 曲美替尼对BRAF^(V600E)甲状腺乳头状癌维莫非尼药物抵抗的逆转作用机制
- 2022年
- 目的探讨曲美替尼(Trametinib)对维莫非尼(Vemurafenib)治疗BRAF^(V600E)突变型甲状腺乳头状癌抵抗的逆转作用和机制。方法应用CCK-8实验检测Vemurafenib及Trametinib在人甲状腺癌K-1、BCPAP细胞中的半数抑制浓度(IC_(50))及两药联合指数(CI)。蛋白质印迹法检测Vemurafenib不同处理时间对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的抑制作用,确定产生抵抗的机制;随后联合使用Trametinib分别进行CCK-8、平板克隆、流式细胞术和蛋白质印迹实验观察肿瘤细胞的增殖、凋亡及MAPK通路变化。结果Vemurafenib在K-1和BCPAP细胞中的IC_(50)分别为37.21、22.61μmol/L,Trametinib的IC_(50)分别为776.50、990.40 nmol/L;Vemurafenib处理K-1和BCPAP细胞24 h后,MAPK通路被再次激活,p-MEK、p-ERK显著升高,48 h后回升至初始水平。选用10μmol/L Vemurafenib和1μmol/L Trametinib进行后续实验。联合使用Trametinib可抑制Vemurafenib处理24 h后出现的p-MEK及p-ERK回升现象。Vemurafenib及Trametinib均可有效抑制K-1(t值分别为9.113和13.150,均P<0.001)及BCPAP(t值分别为7.290和8.920,P值分别为0.002和0.009)细胞的增殖及克隆形成能力(K-1:t_(Vemurafenib)=8.898,t_(Trametinib)=11.730,均P<0.001;BCPAP:t_(Vemurafenib)=6.015,P=0.004;t_(Trametinib)=7.109,P=0.002),并促进细胞凋亡(K-1:t_(Vemurafenib)=3.610,P=0.023;t_(Trametinib)=4.666,P=0.009。BCPAP:t_(Vemurafenib)=3.334,P=0.029;t_(Trametinib)=5.603,P=0.005),差异均有统计学意义。同时,Trametinib可提高Vemurafenib抑制K-1和BCPAP细胞增殖(t_(K-1)=10.170,t_(BCPAP)=9.662,均P<0.001)、克隆形成(t_(K-1)=11.660,t_(BCPAP)=10.170,均P<0.001)及促进凋亡(t_(K-1)=5.336,t_(BCPAP)=5.420,均P=0.006)的能力,差异有统计学意义。在处理48 h时,与对照组相比,Vemurafenib对K-1及BCPAP细胞的增殖抑制作用(t_(K-1)=3.893,P=0.018;t_(BCPAP)=3.141,P=0.035)及促凋亡作用(t_(K-1)=3.976,P=0.017;t_(BCPAP)=4.495,P=0.011)稍降低,差异有统计学意义;对细胞克隆形成的抑制能力差异无�
- 孙骥李敬东杨刚熊永福李伟男唐涛
- 关键词：甲状腺乳头状癌MAPK通路药物抵抗
