赵方萄
- 作品数：27 被引量：43H指数：5
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院基础医学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 6A8α-甘露糖苷酶表达对人鼻咽癌细胞CNE-2L2端粒酶活性和端粒长度的影响
- 2003年
- 探讨端粒长度与端粒酶活性在人鼻咽癌细胞CNE 2L2恶性行为改变前后的变化 ,建立研究恶性行为改变与端粒长度与端粒酶活性间关系的细胞模型。与 6A8α 甘露糖苷酶表达正常的CNE 2L2细胞 (野生型细胞W ,转导空载体的细胞M及转导无关DNA片段的细胞S)相比 ,6A8α 甘露糖苷酶表达低下的细胞 (AS)接种裸鼠皮下后的肿瘤性生长受抑。用TeloTAGGGTelomereLengthAssayKit及TelomerasePCRELISAKit分别测定端粒长度及端粒酶活性 ,用RT PCR方法分析端粒重复序列结合因子 (TRF)的转录水平。见AS细胞的端粒明显缩短 (6 78Kb ,W细胞为8 4 0Kb ,M细胞为 8 34kb ,S细胞为 9 5 6kb) ,但端粒酶活性及端粒重复序列结合因子 1和 2 (TRF 1和 2 )的转录水平未见改变。实验表明 ,恶性行为降低的CNE 2L2细胞的端粒变短 ,但与端粒酶活性及TRF 1 2无关 ,提示在CNE 2L2细胞中可能存在着端粒酶及TRF 1 2以外的调节端粒长度的机制。
- 靳玉兰赵方萄岳玮史耕先刘音朱立平
- 关键词：鼻咽癌端粒酶端粒长度端粒重复序列结合因子
- ER α-甘露糖苷酶表达降低引起大鼠肝脏上皮细胞微绒毛减少变短
- 2003年
- 目的观察蛋白质糖基化改变对大鼠肝脏上皮细胞WB-F344表面微绒毛及在培养中生长的影响。方法构建含正义或反义6A8DNA的重组pAGX(+)质粒,用脂质体法将重组质粒或空载质粒转染WB-F344细胞,作G418筛选,以有限稀释法作细胞克隆,进行PCR检测新霉素抗性(neoR)基因以确定转染DNA在细胞基因组中的整合;用P-nitrophenyl-α-D-mannopyranoside作底物检测细胞匀浆上清中ERα-甘露糖苷酶的活性;采用扫描电镜观察细胞表面的微绒毛,并做生长曲线检测。结果转染反义6A8的各WB-F344克隆细胞株的匀浆上清中,ERα-甘露糖苷酶活性有不同程度降低,其中以克隆AS1与AS2的降低最明显。克隆AS1与ConA结合增强,表面微绒毛减少、变短,细胞增殖减慢。结论大鼠肝脏ERα-甘露糖苷酶表达抑制所致的蛋白质糖基化改变,可导致大鼠肝脏上皮细胞WB-F344微绒毛减少、变短,细胞生长速度减慢。
- 赵方萄李瞡史耕先刘音朱立平
- 关键词：糖基化
- 胞膜(Ecto)-6A8α-甘露糖苷酶
- 2003年
- 68Aα-甘露糖苷酶是本实验室克隆的cDNA(GenBank的登记号为AF044414)编码的一个新的人α-甘露糖苷酶[1].该cDNA长3300bp,其开放阅读框架编码1062个氨基酸的蛋白质.蛋白质的1028～1048aa为穿膜区.6A8α-甘露糖苷酶属工型穿膜蛋白.6A8基因定位于第15号染色体q11～13区.
- 朱立平王壮志史耕先刘音王汛赵方萄
- 关键词：单克隆抗体糖基化
- 一个人类α-甘露糖苷酶全长cDNA的分子克隆被引量：2
- 1999年
- 用我们以往克隆到的1358bp6A8cDNA片段作探针，籍southernblot从一个人扁桃体细胞λgtllCDNA文库筛选，再用RACE方法，克隆到了一个长3300bp的6A8全长CDNA。此CDNA内有一长3188hp（57～3245hp）的开放阅读框架，编码1064个氨基酸的蛋白质。此蛋白质的氨基酸序列与大鼠一个ER－α－甘露糖苦酶（1040个氨基酸）的相同性和相似性高达78％和82％，与一个酵母－α－甘露糖着酶（1083个氨基酸）的相同性和相似性亦达33％和47％。另外，值得注意的是其260～432位氨基酸序列与人类、猪、大鼠和小鼠的多种α－甘露糖甘醇的相应氨基酸序列的相同性均高于20％，提示这段保守序列与α－甘露糖着酶的功能可能有关。
- 李波马凤蓉史耕先赵方萄李景李琳汪燚蔡有余朱立平
- 关键词：CDNA克隆
- 编码人分化抗原5C5全长cDNA的克隆及功能初探被引量：4
- 2000年
- 目的 编码 5C5分化抗原全长cDNA的克隆及功能探索。方法 构建人活化B细胞株3D5细胞的λgt11cDNA文库 ,以核苷酸杂交法从cDNA文库中筛选阳性克隆 ,作核苷酸序列分析 ,编码蛋白质氨基酸序列的亲疏水分析 ,Northernblot测 5C5mRNA转录本长度 ,用RT PCR检测 5C5mRNA在不同细胞株的表达 ,观察单抗 5C5 G1对 3D5细胞增殖的影响。结果 从人活化B细胞株 3D5的λgt11cDNA文库筛选到长 90 5bp的 5C5 1cDNA及 75 4bp的 5C5 2cDNA。 5C5 1cDNA序列内有 1个开放阅读框架 (19～ 5 37bp) ,编码 179个aa的蛋白质。此蛋白质内有一穿膜螺旋结构 (94～ 114aa) ,其N端在胞内。 5C5 2cDNA从 16 3到 45 9为开放阅读框架 ,编码 99个aa的蛋白质。从Northernblot见0 9kb左右和 0 7kb左右 2条杂交带。由RT PCR见 5C5mRNA在 3D5细胞强表达 ,在Daudi细胞表达次之 ,在Jurkat细胞表达最弱。单抗 5C5 G1有增强cpBCGF诱导 3D5细胞增殖的作用。结论 长90 5bp的 5C5 1cDNA为 1个全长cDNA。编码 1个膜蛋白 ,可能参与 3D5细胞的增殖反应。
- 马凤蓉阎民孟晓燕赵方萄汪燚史耕先刘音王讯朱立平
- 关键词：CDNAB细胞分化抗原
- 转染反义6A8cDNA对人鼻咽癌细胞肺转移的抑制被引量：2
- 1999年
- 人鼻咽癌高肺转移克隆株CNE 2L2转染编码人α 甘露糖苷酶的cDNA( 6A8cDNA ,GenBank接受号为U3 72 48)的重组反义表达载体 ( pRc/CMV 反义6A8cDNA)后 ,与转染空载质粒pRc/CMV及未作任何转染的细胞相比 ,其生长受一定程度抑制 .接种于无胸腺鼠皮下 2个月 ,野型CNE 2L2细胞组有肺转移的小鼠数为 9/10 ( 90 % ) ,其中Ⅲ级 8只 ,Ⅱ级 1只 ;转染空载质粒pRc/CMV ,有肺转移者为6/8( 75 % ) ,其中Ⅲ级 1只 ,Ⅱ级 2只 ,Ⅰ级 3只 ;转染pRc/CMV 反义 6A8cDNA ,有肺转移者为 3 /10 ( 3 0 % ) ,全部为Ⅰ级 .
- 张立新刘玉琴马凤蓉顾蓓史耕先赵雪梅李波高进赵方萄张淑珍李国燕王讯朱立平
- 关键词：CDNA转染鼻咽癌细胞株肺转移
- 腺相关病毒载体pAGX(+)的构建被引量：1
- 2001年
- 目的 构建腺相关病毒 (AAV)载体并进行鉴定 ,以介导真核细胞的基因传递和表达。方法 以基因重组技术构建AAV载体 ,用Southern杂交、狭缝杂交以及激光共聚焦显微镜等鉴定构建的AAV载体。结果 成功地获得了重组AAV表达载体pAGX( + ) ,藉报告基因EYFP鉴定pAGX( + ) ,见pAEYFP经包装的重组AAV储存液的感染滴度达 1 .3 9× 1 0 7TU(transmissionunit) /ml、复制滴度达1 .94× 1 0 11颗粒 /ml。Southern杂交表明EYFP基因获得成功拯救。rAAV/EYFP颗粒成功转导COS 7细胞 ,EYFP获得表达 ,并整合入COS 7细胞基因组 ,而藉质粒载体pEYFPCMV介导的转移 ,EYFP未能整合。结论 成功地构建了一个AAV载体 ,并成功地介导了基因的转移、表达和整合。
- 史耕先刘音赵方萄朱立平
- 关键词：腺相关病毒载体基因转移基因表达
- 分化抗原gp42表达对B细胞株增殖和血清撤除致死的影响被引量：1
- 2003年
- 目的 研究分化抗原gp4 2表达对 3D5B细胞株功能的影响。方法 以生长曲线检测细胞的增殖 ,碘化丙啶 (PI)染色 ,DNA流式细胞仪分析细胞周期 ,Annexin Ⅴ PI染色检测细胞死亡 ,间接免疫荧光染色流式细胞仪分析CD分子的表达 ,用Fluo 3AM作探针激光共聚焦显微镜观察胞内Ca2 + 浓度的变化。结果 分化抗原gp4 2表达抑制的 3D5细胞生长明显加速 (P <0 .0 0 1) ,从S期进入G2 M期的比率明显增加。对血清撤除所致的死亡发生抵抗。分化抗原gp4 2表达抑制的 3D5细胞间的粘附消失 ,CD11c的表达明显减弱。在McAb 5D4的刺激下 ,3D5细胞胞内的Ca2 + 浓度随时间逐步增高。结论 分化抗原gp4 2表达抑制致使 3D5细胞生长加速 ,细胞间粘附消失。分化抗原gp4 2是一个信号传导分子。
- 汪燚刘音马凤蓉崔薇史耕先赵方萄朱立平
- 关键词：信号传导分子钙离子细胞增殖细胞死亡
- 6A8 α-甘露糖苷酶基因的mRNA表达与染色体定位被引量：4
- 2001年
- 目的 对 6A8α 甘露糖苷酶基因作染色体定位 ,比较 6A8α 甘露糖苷酶mRNA在人多种免疫细胞株的表达。方法 用Fish原位杂交作染色体定位 ,用RT PCR检测mRNA表达。结果 6A8α 甘露糖苷酶基因定位于人第 13号染色体长臂的 31～ 32区。 6A8α 甘露糖苷酶mRNA在B细胞株SKW 6高表达 ,在B细胞株 3D5、BJAB、CESS、Daudi、Nalm 6中度表达 ,在B细胞株Navalm ,T细胞株GM、Jurkat,组织细胞瘤细胞株U937弱表达 ,在T细胞株Peer,慢性髓性白血病细胞株K5 6 2极弱表达。结论 6A8α 甘露糖苷酶基因定位于人第 13号染色体长臂的 31～ 32区 ,其mRNA表达水平在各种人免疫细胞株不同。
- 刘音史耕先王壮志曾瑄马凤蓉李波赵方萄朱立平
- 关键词：染色体定位MRNA表达
- 分化抗原gp42在人免疫细胞的表达被引量：1
- 2003年
- 目的 明确gp4 2蛋白为分化抗原 ,检测它在人免疫细胞的表达。方法 用gp4 2蛋白免疫小鼠 ,制备抗gp4 2蛋白的单抗。用反义技术制备gp4 2蛋白表达抑制的 3D5细胞。用免疫荧光染色和Western印迹确定gp4 2单抗的特异性。用胞膜蛋白免疫沉淀和流式细胞术确定gp4 2蛋白为分化抗原。用双色免疫荧光染色流式细胞术检测gp4 2分化抗原在多种人免疫细胞的表达。结果 制备了抗gp4 2蛋白的特异性单抗。用gp4 2单抗作探针 ,从 3D5细胞膜免疫沉淀到相对分子质量 (Mr)为4 2 0 0 0的一条蛋白带 ,并在活 3D5细胞见阳性免疫荧光染色。gp4 2分化抗原在人外周围血CD19+ 、CD14 + 、CD4 + 、CD8+ 和CD5 6 + 细胞的表达率分别为 5 9.71%± 11.36 %、89.0 8%± 4 .87%、2 6 .0 3%±9.75 %、2 4 .2 4 %± 15 .2 9%和 2 4 .2 0 %± 15 .72 % ,在人免疫细胞株的表达率分别为 5 8.0 % (Nalm6 )、72 .7% (3D5 )、5 3.6 % (BJAB)、6 1.0 % (Daudi)、6 .9% (SKW6 )、6 .3% (Jurkat)、5 .8% (Peer)、2 1.3% (K5 6 2 )和 39.1% (U937)。结论 gp4 2蛋白为一个分化抗原 ,在人外周围血CD14 + 细胞的表达率最高 ,其次为CD19+ 细胞 ,CD4 + 、CD8+ 和CD5 6 + 细胞的表达率较低。
- 汪燚刘音马凤蓉史耕先赵方萄朱立平
- 关键词：免疫细胞单克隆抗体免疫荧光染色法WESTERN印迹
