马凤蓉
- 作品数：18 被引量：37H指数：4
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院基础医学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 分化抗原gp42表达对B细胞株增殖和血清撤除致死的影响被引量：1
- 2003年
- 目的 研究分化抗原gp4 2表达对 3D5B细胞株功能的影响。方法 以生长曲线检测细胞的增殖 ,碘化丙啶 (PI)染色 ,DNA流式细胞仪分析细胞周期 ,Annexin Ⅴ PI染色检测细胞死亡 ,间接免疫荧光染色流式细胞仪分析CD分子的表达 ,用Fluo 3AM作探针激光共聚焦显微镜观察胞内Ca2 + 浓度的变化。结果 分化抗原gp4 2表达抑制的 3D5细胞生长明显加速 (P <0 .0 0 1) ,从S期进入G2 M期的比率明显增加。对血清撤除所致的死亡发生抵抗。分化抗原gp4 2表达抑制的 3D5细胞间的粘附消失 ,CD11c的表达明显减弱。在McAb 5D4的刺激下 ,3D5细胞胞内的Ca2 + 浓度随时间逐步增高。结论 分化抗原gp4 2表达抑制致使 3D5细胞生长加速 ,细胞间粘附消失。分化抗原gp4 2是一个信号传导分子。
- 汪燚刘音马凤蓉崔薇史耕先赵方萄朱立平
- 关键词：信号传导分子钙离子细胞增殖细胞死亡
- 6A8 α-甘露糖苷酶基因的mRNA表达与染色体定位被引量：4
- 2001年
- 目的 对 6A8α 甘露糖苷酶基因作染色体定位 ,比较 6A8α 甘露糖苷酶mRNA在人多种免疫细胞株的表达。方法 用Fish原位杂交作染色体定位 ,用RT PCR检测mRNA表达。结果 6A8α 甘露糖苷酶基因定位于人第 13号染色体长臂的 31～ 32区。 6A8α 甘露糖苷酶mRNA在B细胞株SKW 6高表达 ,在B细胞株 3D5、BJAB、CESS、Daudi、Nalm 6中度表达 ,在B细胞株Navalm ,T细胞株GM、Jurkat,组织细胞瘤细胞株U937弱表达 ,在T细胞株Peer,慢性髓性白血病细胞株K5 6 2极弱表达。结论 6A8α 甘露糖苷酶基因定位于人第 13号染色体长臂的 31～ 32区 ,其mRNA表达水平在各种人免疫细胞株不同。
- 刘音史耕先王壮志曾瑄马凤蓉李波赵方萄朱立平
- 关键词：染色体定位MRNA表达
- 分化抗原gp42在人免疫细胞的表达被引量：1
- 2003年
- 目的 明确gp4 2蛋白为分化抗原 ,检测它在人免疫细胞的表达。方法 用gp4 2蛋白免疫小鼠 ,制备抗gp4 2蛋白的单抗。用反义技术制备gp4 2蛋白表达抑制的 3D5细胞。用免疫荧光染色和Western印迹确定gp4 2单抗的特异性。用胞膜蛋白免疫沉淀和流式细胞术确定gp4 2蛋白为分化抗原。用双色免疫荧光染色流式细胞术检测gp4 2分化抗原在多种人免疫细胞的表达。结果 制备了抗gp4 2蛋白的特异性单抗。用gp4 2单抗作探针 ,从 3D5细胞膜免疫沉淀到相对分子质量 (Mr)为4 2 0 0 0的一条蛋白带 ,并在活 3D5细胞见阳性免疫荧光染色。gp4 2分化抗原在人外周围血CD19+ 、CD14 + 、CD4 + 、CD8+ 和CD5 6 + 细胞的表达率分别为 5 9.71%± 11.36 %、89.0 8%± 4 .87%、2 6 .0 3%±9.75 %、2 4 .2 4 %± 15 .2 9%和 2 4 .2 0 %± 15 .72 % ,在人免疫细胞株的表达率分别为 5 8.0 % (Nalm6 )、72 .7% (3D5 )、5 3.6 % (BJAB)、6 1.0 % (Daudi)、6 .9% (SKW6 )、6 .3% (Jurkat)、5 .8% (Peer)、2 1.3% (K5 6 2 )和 39.1% (U937)。结论 gp4 2蛋白为一个分化抗原 ,在人外周围血CD14 + 细胞的表达率最高 ,其次为CD19+ 细胞 ,CD4 + 、CD8+ 和CD5 6 + 细胞的表达率较低。
- 汪燚刘音马凤蓉史耕先赵方萄朱立平
- 关键词：免疫细胞单克隆抗体免疫荧光染色法WESTERN印迹
- 反义6A8cDNA转染肿瘤细胞生物学行为的研究被引量：3
- 1999年
- 目的探讨反义６Ａ８对肿瘤细胞恶性行为的影响。方法选用来自人鼻咽癌细胞系ＣＮＥ２Ｚ的高转移克隆ＣＮＥ２Ｌ２细胞，分别用ｐＲＣ／ＣＭＶ反义６Ａ８ｃＮＤＡ表达载体及空质粒转染并检测了反义６Ａ８ｃＤＮＡ转染、空载体转染及未转染细胞自身及与基质的粘附性、运动性和水解酶活性、体外侵袭性及体内生长转移能力。结果反义６Ａ８ｃＤＮＡ转染ＣＮＥ２Ｌ２细胞与基质的粘附性下降，其运动性和水解能力及体外侵袭及体内生长及转移能力也均下降。结论反义６Ａ８ｃＤＮＡ转染可明显降低肿瘤的恶性行为。
- 刘玉琴张立新顾蓓马凤蓉赵雪梅薛克勋高进朱立平
- 关键词：反义CDNA转染肿瘤细胞生物学行为恶性行为
- 一个人类α-甘露糖苷酶全长cDNA的分子克隆被引量：2
- 1999年
- 用我们以往克隆到的1358bp6A8cDNA片段作探针，籍southernblot从一个人扁桃体细胞λgtllCDNA文库筛选，再用RACE方法，克隆到了一个长3300bp的6A8全长CDNA。此CDNA内有一长3188hp（57～3245hp）的开放阅读框架，编码1064个氨基酸的蛋白质。此蛋白质的氨基酸序列与大鼠一个ER－α－甘露糖苦酶（1040个氨基酸）的相同性和相似性高达78％和82％，与一个酵母－α－甘露糖着酶（1083个氨基酸）的相同性和相似性亦达33％和47％。另外，值得注意的是其260～432位氨基酸序列与人类、猪、大鼠和小鼠的多种α－甘露糖甘醇的相应氨基酸序列的相同性均高于20％，提示这段保守序列与α－甘露糖着酶的功能可能有关。
- 李波马凤蓉史耕先赵方萄李景李琳汪燚蔡有余朱立平
- 关键词：CDNA克隆
- 6A8 cDNA编码一种α-甘露糖苷酶被引量：7
- 1999年
- 目的 探讨6A8cDNA编码的蛋白质的性质。方法 依据ConA的配体是甘露糖,而α-甘露糖苷酶的作用是修剪细胞糖蛋白聚糖中甘露糖的原理,采用细胞免疫荧光染色法以及激光共聚焦显微镜观察经转染6A8cDNA正义或反义重组表达载体后,细胞结合ConA的强弱,验证6A8cDNA编码的蛋白质是否为一种α-甘露糖苷酶。结果 COS-7细胞和人鼻咽癌细胞株CNE-2L2转染pRc/CMV-正义6A8cDNA后与ConA结合减弱,而与单抗6A8染色增强;CNE-2L2细胞转染pRc/CMV-反义6A8cDNA后,与ConA结合增强,而与单抗6A8染色减弱。结论 6A8cDNA编码的蛋白质可能为一种α-甘露糖苷酶,它可被单抗6A8识别。
- 史耕先马凤蓉朱立平张立新赵方萄刘音王讯
- 编码人白细胞分化抗原5D4的基因表达被引量：1
- 2000年
- 目的确证 5D4 cDNA是全长 cDNA，并为制备抗 5D4不同表位的单克隆抗体准备抗原。方法构建重组表达质粒 pGEX- 5X- 3- 5D4全长和 pGEX- 5X- 3- 5D4 5′侧 ,并转化大肠杆菌 DH5α ,使其表达 5D4分化抗原，用 Northern印迹分析和 RT- PCR检测 5D4 mRNA在不同组织和免疫细胞株中的表达状况。结果 5D4 mRNA有 5种转录本，它们在不同组织有不同的表达， 1.9 kb RNA在所检测的 8种组织中只见于小肠组织和脾脏。 5D4 mRNA在不同免疫细胞的表达量不同。在大肠杆菌 DH5α中表达出了相对分子质量约为 66 000和 60 000的 5D4- GST融合蛋白。结论 1 846 bp 5D4 cDNA为全长 cDNA，并在大肠杆菌 DH5α中成功表达出了与 GST融合的 5D4分化抗原全长 (66 000)及其跨膜区侧氨基端蛋白质 (60 000)。
- 汪焱马凤蓉孟晓燕史耕先刘音赵方萄朱立平
- 关键词：基因表达
- 分化抗原5C5在人免疫细胞的表达被引量：2
- 2003年
- 目的 明确 5C5蛋白为分化抗原 ,检测其在人免疫细胞的表达 ,以及它的信号传导作用。方法 用 5C5蛋白免疫小鼠 ,制备抗 5C5蛋白的单抗。用反义技术制备 5C5蛋白表达抑制的 3D5细胞。用免疫荧光染色和Western印迹确定 5C5单抗的特异性。用胞膜蛋白免疫沉淀和流式细胞术确定其分化抗原的性质。用双色免疫荧光染色流式细胞术检测 5C5分化抗原在多种人免疫细胞的表达。用Fura 3 AM试剂作探针 ,用激光共聚焦显微镜观察胞内Ca2 + 浓度的变化。结果 制备了抗 5C5蛋白的特异性单抗。用 5C5单抗作探针 ,从 3D5细胞膜免疫沉淀到 1条相对分子质量 (Mr)为 19× 10 3的蛋白带 ,并在活 3D5细胞见阳性免疫荧光染色。 5C5分化抗原在人周围血CD19+ 、CD14 + 、CD4 + 、CD8+ 和CD5 6 + 细胞的表达率分别为 (33.4 7± 7.9) %、(86 .13± 6 .7) %、(15 .79± 7.1) %、(18.11±12 .77) %和 (11.76± 7.4 7) % ,在人免疫细胞株的表达率分别为 5 8.0 % (Nalm6 )、72 .7% (3D5 )、5 3.6 %(BJAB)、6 1.0 % (Daudi)、6 .9% (SKW6 )、6 .3% (Jurkat)、5 .8% (Peer)、2 1.3% (K5 6 2 )和 39.1% (U937)。3D5细胞在 5C5单抗刺激下 ,胞内Ca2 + 浓度逐渐增高 ,可达 2倍左右 ,对照小鼠Ig则无此作用。结论5C5蛋白为一个分化抗原 ,在人周?
- 汪燚刘音马凤蓉史耕先赵方萄朱立平
- 关键词：分化抗原信号传导免疫细胞
- 人分化抗原5C5蛋白分子的三维结构预测
- 2002年
- 蛋白质三维结构的预测问题一直是当今生物学领域的一个重大课题。其中用THREADING法来构建无明显序列同源性的蛋白质的三维结构是一个行之有效的方法。本文通过对一种含有亮氨酸拉链的蛋白质 5C5用THREADING法进行结构预测 ,展示了该方法的有效性 ,同时结合其他信息分析 ,初步探讨了 5C5蛋白质可能的生物学意义。
- 张焱马凤蓉阎民朱立平张正国
- 人分化抗原5C5在原核细胞的表达被引量：1
- 2001年
- 为了确证 5C5cDNA是全长cDNA并制备抗 5C5分化抗原不同表位的功能性单抗 ,进而研究 5C5分化抗原的结构与功能 ,用Northern blot检测 5C5mRNA在人各种组织的表达 ,并构建了重组表达质粒pGEX 5X 3 5C5全长和pGEX 5X 3 5C5N端与pGEX 5X 3 5C5C端。结果表明 :所有检测的组织中均只有一个 5C5mRNA转录本 ,其大小与 5C5cDNA长度一致 ,表明所分离到的 90 8bp 5C5cDNA是个全长cDNA。重组表达质粒pGEX 5X 3 5C5N端与pGEX 5X 3 5C5C端在大肠杆菌DH5α表达出了可溶性融合蛋白GST 5C5N端与GST 5C5C端 ,分子量各为 36kD和 35kD。
- 孟晓燕汪燚马凤蓉史耕先赵方萄朱立平
- 关键词：原核细胞表达
