陈敬贤
- 作品数：65 被引量：218H指数：9
- 供职机构：安徽医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省科技厅攻关项目安徽省高校省级自然科学研究项目更多>>
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- Ⅰ型干扰素抗病毒信号通路失调介导的病理效应研究新进展被引量：1
- 2018年
- Ⅰ型干扰素(type Ⅰ interferon,IFN-Ⅰ)具有广谱抗病毒免疫保护效应,已在临床上用于治疗多种病毒性疾病。IFN-Ⅰ与特异性受体结合后,触发一个极其复杂的信号通路网络,诱导产生大量抗病毒蛋白来发挥抗病毒和免疫调节作用。在急性病毒感染如高致病性H5N1禽流感病毒感染中,IFN-Ⅰ信号通路过度活化诱发的细胞因子风暴会促使病情进一步恶化。而在慢性病毒感染如慢性HCV感染中,IFN-Ⅰ在发挥治疗作用的同时还能引起一系列病理效应。因此,探索在病毒性疾病发生发展进程中适时激活或阻断IFN-Ⅰ信号通路的研究,将有助于指导临床合理高效地使用IFN-Ⅰ。
- 段孜文(综述)赵俊陈敬贤王明丽
- 关键词：信号传导病毒感染
- 动物细胞培养物中支原体污染的检测被引量：14
- 2010年
- [目的]建立检测细胞培养物中支原体快速有效的方法。[方法]从6种常见污染细胞的支原体16sRNA中选择2段高度保守的核酸序列作为引物,用PCR和DNA荧光染色法来检测实验室中25种动物细胞株。[结果]用DNA荧光染色法检测实验室中25种动物细胞株阳性率为24%,可疑阳性为16%;而用PCR法检测阳性率为36%。[结论]PCR法较DNA荧光染色法灵敏度更高、特异性更强,将2种方法结合应用效果更好。
- 赵俊王兴满胡勇陈敬贤王明丽
- 关键词：支原体细胞培养聚合酶链反应
- HCMV pp65 DNA疫苗的纯化与检定
- 2010年
- 目的研究HCMV pp65 DNA疫苗（pcDNA3.1-pp65）的纯化工艺,并建立质控标准。方法对工程菌（DH5α/pcDNA3.1-pp65）的高效发酵菌体采用碱裂解法进行质粒初提;三步柱层析（依次为分子筛层析、亲和层析、阴离子层析）对质粒进行纯化,检测质粒含量、超螺旋比例、内毒素等,最后对终产品质粒溶液进行全面质量检定。结果质粒初提液通过分子筛层析后,去除了大量RNA、宿主DNA、内毒素等,再经亲和柱纯化后获得了高比例的超螺旋质粒DNA,达95%,经阴离子柱层析有效去除内毒素,质粒得率为0.8-0.95 mg/g菌,质粒总回收率达72.7%。三批终产品全面质量检定均符合规定。结论建立了稳定的HCMV pp65 DNA疫苗（pcDNA3.1-pp65）纯化工艺及质量控制标准,为进一步研究奠定了重要基础。
- 王兴满汤仁树赵俊陈敬贤王明丽
- 关键词：HCMVPP65DNA疫苗质粒纯化
- 细胞培养物中支原体污染的检测与清除
- 目的了解本实验室细胞培养物中的支原体污染情况,建立检测及清除支原体污染快速简单有效的方法。方法同时采用DNA荧光染色法和PCR法检测实验室中17种细胞株(系)。并根据支原体对热耐受性差以及对大环内酯类抗生素敏感的特点,采...
- 赵俊陈敬贤王明丽
- 文献传递
- HCMV体外感染小鼠胚胎成纤维细胞的研究被引量：1
- 2013年
- 目的观察人巨细胞病毒(HCMV)AD169株体外感染小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)的生物学特征,为探讨HCMVAD169株能跨种属感染MEF提供依据。方法将100TCID50HCMV AD169株病毒悬液接种至MEF和人胚胎成纤维细胞(HF)上,逐日观察HCMV特征性细胞病变效应(CPE);分别收集感染后1、3、5 d的MEF和HF培养物,提取细胞DNA,采用实时荧光定量PCR检测HCMV立即早期基因(IE)拷贝数变化;分别采用HCMV立即早期基因(IE-1)、主要衣壳蛋白(MCP)和包膜糖蛋白(gB)单克隆抗体进行间接免疫荧光实验检测感染后的1、3、5 d MEF和HF中相应病毒蛋白的表达。结果观察到HCMV AD169株接种MEF出现病毒所致CPE,与HF出现的CPE相似;实时荧光定量PCR检测HCMV IE基因拷贝数发现,MEF在HCMVAD169感染后的1、3、5 d,病毒基因拷贝数呈增长趋势,但均低于相同时间点的HF中病毒拷贝数;间接免疫荧光检测HCMV感染MEF和HF后1、3、5 d HCMV IE-1、MCP和gB蛋白表达情况时发现,在MEF上HCMV IE-1、MCP和gB蛋白表达随时间延长呈增强趋势。结论 HCMV AD169株可以体外感染MEF,并在其中复制增殖。
- 吉阳任鹏陈敬贤王明丽
- 关键词：人巨细胞病毒小鼠胚胎成纤维细胞
- HCMV编码的ds RNA结合蛋白在抗机体RNA干扰中的作用
- 2005年
- 人巨细胞病毒(HCMV)是一种感染广泛的疱疹病毒家族中的一员,它对人群中的易感者尤其对免疫能力下降患者的危害已引起社会的广泛重视。RNA干扰(RNAi)是近年来发现存在于体内抵御病毒感染和基因损伤的一种重要的保护机制。而HCMV则可通过编码dsRNA结合蛋白(DRBPs),特异性结合dsRNA,阻断宿主细胞抗病毒的RNAi途径,保护病毒mRNA的表达,最终达到逃避宿主细胞的抑制病毒转录的作用。
- 蔡亦红王明丽陈敬贤
- 关键词：人巨细胞病毒RNA干扰DSRNA
- 人巨细胞病毒pp65特异性抗体测定在原发感染诊断中的应用被引量：5
- 2007年
- 目的通过测定患者单份血清人巨细胞病毒(HCMV)pp65特异性IgM抗体和IgG亲和指数(AI),建立HCMV原发感染的临床判断标准。方法从临床收集40份患儿血清和尿标本,以本室自制的pp65为抗原,运用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清标本中HCMVpp65特异性IgM抗体;同时通过尿素变性实验,以6M尿素作为温和蛋白变性剂,测定HCMVpp65IgGAI。尿标本常规处理后接种人胚成纤维(HF)细胞进行病毒分离,观察HCMV特异性细胞病变效应(CPE),聚合酶链反应(PCR)试验检测细胞培养物UL83基因,间接免疫荧光试验检测细胞玻片HCMV抗原。并将病毒分离结果同血清学方法进行比较。结果40例标本中,IgM阳性13例,IgG阳性30例,其中,仅IgM阳性4例,病毒分离结果亦为阳性,可诊断为原发感染;30例IgG阳性标本中,2种抗体均为阳性9例(A组),其中,5例AI<50%,病毒分离结果均为阳性,判断为原发感染;1例AI在50%与60%之间,为可疑原发感染,需要进一步鉴定;3例AI>60%,判断为继发感染。IgG阳性21例(B组),其中仅3例(14.29%)AI<50%,但病毒分离结果为阴性,提示患者不久前曾发生HCMV原发感染,特异性IgM抗体已经转阴,病毒进入潜伏状态;余18例患者AI均>60%,判断为继发感染;2种抗体均为阴性的标本有6例,病毒分离结果亦为阴性,说明患者未被感染。统计学分析,A组与B组之间差异有统计学意义(P<0.05)。血清学方法与病毒分离比较,一致率为75.49%,该方法灵敏度为100%,特异度为87.10%,准确度为90.00%。结论以HCMVpp65重组蛋白为抗原检测特异性抗体以及相应IgGAI的ELISA,可快速诊断HCMV原发感染和继发感染;该方法具有高度特异性与敏感性,操作简便,重复性好,具有良好的临床应用前景。
- 刘倩陈敬贤王明丽
- 关键词：人巨细胞病毒抗体原发感染
- 动物细胞培养物中支原体污染的检测( 摘要)(英文)
- 2009年
- [目的]建立检测细胞培养物中支原体快速有效的方法。[方法]同时应用 DNA 荧光染色法和 PCR 法对实验室中25 种细胞株进行检测。DNA 荧光染色利用荧光染剂 Hoechst33258 检测支原体污染,其原理为: 染色剂会结合到DNA A - T 富含区域,因为支原体A - T 含量较高( 55% ～80%) ,所以可将其染色而检测。用Hoechst33258 荧光染色的细胞在荧光显微镜下观察,无支原体污染的细胞只有细胞核显色。而有支原体污染的细胞,在细胞核外与细胞核表面会出现蓝色荧光小点或丝状点,其形状一致,这与细胞残片染成不规则点状物不同。PCR 法检测支原体: 先采用酚氯仿法提取标本 DNA,再从 6 种常见污染细胞的支原体16sRNA 中选择2 段高度保守的核酸序列作为引物,引物 A: 5'-GGCGAATGGGTGAGTAACACG-3',引物 B: 5'-CGGATAACGCTTGCGACCTATG-3'。利用建立的 PCR 反应体系和条件,对已知被支原体污染的 Vero 细胞和未被支原体污染的 HF 细胞进行扩增。琼脂糖凝胶电泳,紫外检测仪观察并用凝胶成像系统照相。[结果]在25 种动物细胞中,DNA 荧光染色法检出6 株( 24%) 为阳性,4 株( 16%) 为可疑阳性,而 PCR 法检出 9 株( 36%) 为阳性。对比两种方法发现: 采用DNA 荧光染色法检测,结果为阳性的细胞样品,用 PCR 检测结果也是阳性; 而采用 DNA 荧光染色法检测,结果为可疑阳性的,采用PCR 法检测,结果可能是阳性。[结论]DNA 荧光染色法检测支原体虽然简便易行,但有时易出现假阴性和假阳性,假阳性主要由于细胞碎片染色被误认为是支原体染色所致,而假阴性可能由于支原体污染较轻而 DNA 荧光染色灵敏度不高所导致。安徽医科大学微生物学研究室建立的 PCR 反应体系和条件,能扩增常见污染细胞的支原体,灵敏度高、特异性强、操作简便,但其成本较高。通过两种方法检测结果对比可以发现,将两种方法结合应用为佳,首先,采用 DNA �
- 赵俊王兴满胡勇陈敬贤王明丽
- 关键词：支原体细胞培养聚合酶链反应
- 人巨细胞病毒pp65特异性抗体测定在原发感染诊断中的应用
- 目的：通过测定患者单份血清人巨细胞病毒(HCMV)pp65特异性IgM抗体和IgG亲和指数(AI)，建立HCMV原发感染的临床判断标准。
方法：从临床收集40份患儿血清和尿标本，以本室自制的pp65为抗原，运用...
- 刘倩陈敬贤王明丽
- 关键词：人巨细胞病毒IGM抗体原发感染血清学
- 文献传递
- 脐带血血浆在人巨细胞病毒垂直传播中的作用被引量：1
- 2012年
- 目的了解合肥地区正常顺产新生儿先天性人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染情况,并探讨脐带血血浆在HCMV垂直传播中的意义。方法自合肥市妇幼保健院采集51份新生儿脐带血标本,将处理后得到的脐带血白细胞及血浆分别提取DNA后,进行HCMV UL55基因的巢式PCR检测,并随机抽取其中18份脐带血白细胞进行HCMV pp65抗原血症检测。结果 51份新生儿脐带血白细胞HCMV UL55 DNA阳性数为16份,阳性率为31.4%;同时进行检测的51份脐带血血浆HCMV UL55 DNA阳性数为17份,阳性率为33.3%,新生儿脐带血白细胞与血浆的标本阳性率差异无统计学意义(2=0.00,P=1.000)。以新生儿脐带血白细胞HCMVUL55 DNA巢式PCR结果为标准,利用血浆巢式PCR检测的灵敏度为75.0%(12/16),特异度为85.7%(30/35),阳性预测值为70.6%(12/17),阴性预测值为88.2%(30/34)。随机抽取其中18份新生儿脐带血白细胞进行pp65抗原血症检测,阳性标本数为6份,阳性率为33.3%;与此18份血浆DNA巢式PCR结果相比较,两者差异无统计学意义(2=0.00,P=1.000)。结论脐带血血浆在HCMV垂直传播中起携带并传播病毒的作用。
- 葛俊俞海洋金艳沈国泉任鹏李法锦汪晓婷吉阳赵蕾江龙凤陈敬贤王明丽
- 关键词：婴儿巨细胞病毒疾病传播
