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卵巢癌细胞与巨噬细胞共培养对B7-H1表达的影响及机制被引量：4: 2013年; 为了探讨卵巢癌细胞与巨噬细胞共培养后对B7-H1表达的影响及其可能机制,利用佛波酯(PMA)诱导THP-1或外周血单核细胞分化为巨噬细胞后,与人卵巢癌细胞株SKOV3体外非接触共培养24 h,qRT-PCR、Western blot以及流式细胞术分别检测SKOV3与巨噬细胞B7-H1的表达;进一步利用NF-κB、JAK2/STAT3、p38 MAPK信号通路的抑制剂作用于共培养体系,检测B7-H1表达的变化,以探讨其机制。结果显示,共培养24 h后,SKOV3及巨噬细胞B7-H1 mRNA和蛋白的表达较非共培养组均显著升高(P<0.05),而阻断NF-κB、JAK2/STAT3、p38 MAPK信号通路后,B7-H1的上调均明显被抑制(P<0.05)。SKOV3与巨噬细胞共培养后B7-H1的表达升高(P<0.05),其机制可能涉及到NF-κB、JAK2/STAT3、p38 MAPK信号通路的激活。; 熊海玉马婷婷王秦董晋豫梁勤东李紫微张维理涂植光; 关键词：卵巢癌 B7-H1 肿瘤相关巨噬细胞

shRNA靶向干扰COX-2稳定细胞系的建立及鉴定: 2013年; 脂质体法将COX-2-shRNA载体转染肝癌细胞株SMMC-7721,G418筛选获得稳定细胞系COX-2-shRNA-SMMC-7721,通过RT-PCR和Western blot分别检测细胞系中COX-2基因mRNA转录水平和蛋白质表达水平,通过MTT、流式细胞术和Transwell等观察细胞恶性生物学行为的改变。建立COX-2-shRNA-SMMC-7721(干扰组)、HK-SMMC-7721(阴性对照组)细胞株。干扰组的COX-2基因mRNA的转录水平、蛋白表达水平和细胞增殖能力较阴性对照组和SMMC-7721(空白组)明显下降(P<0.05),而阴性对照组与空白组间无明显差异(P>0.05);干扰组、阴性对照组和空白组处于G0/G1期的细胞分别为(68.85±0.27)%、(53.05±0.35)%和(53.54±0.33)%;细胞凋亡率分别为(9.60±0.20)%、(1.79±0.23)%和(1.75±0.20)%;穿膜细胞数分别为(117.60±5.30)、(338.40±11.50)和(347.40±12.80)个。干扰组与阴性对照组和空白组有显著差异(P<0.05),而阴性对照组与空白组间无明显差异(P>0.05)。利用RNA干扰技术成功构建了靶向干扰COX-2的稳定肝癌细胞系COX-2-shRNA-SMMC-7721,为COX-2分子的作用机制研究提供了细胞模型。; 汪先桃董晋豫郭变琴马婷婷熊海玉涂植光; 关键词：COX-2 SHRNA 稳定细胞系肝癌

过表达IL-12诱导单核系肿瘤细胞向巨噬细胞分化: 目的:探讨过表达IL-12能否诱导单核系肿瘤细胞向巨噬细胞分化，以及对其形态学和吞噬功能的影响。　　方法:用重组人源性IL-12腺病毒（Ad-IL-12）感染THP-1人急性单核白血病细胞，构建过表达IL-12的单核系肿...; 马婷婷; 关键词：定向分化白细胞介素-12

卵巢癌相关抗原CA125单克隆抗体的制备: 2013年; 目的制备卵巢癌相关抗原CA125R单克隆抗体,并进行鉴定。方法将CA125一段串联重复序列(CA125R)基因克隆至原核表达载体pGEX-6P-1,构建重组表达质粒pGEX-CA125R,转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3),IPTG诱导表达GST-CA125R融合蛋白。表达的融合蛋白经GST亲和层析柱纯化后,免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备CA125单克隆抗体,Western blot法鉴定抗体的特异性,单克隆抗体亚类测定试剂盒分析单抗的亚类。腹水诱生法大量制备单抗,SDS-PAGE分析单抗的纯度,间接ELISA法检测单抗的效价。结果重组原核表达质粒pGEX-CA125R经双酶切及测序,证实构建正确;纯化的GST-CA125R融合蛋白相对分子质量约44 000,纯度约为95%,可与小鼠抗GST单克隆抗体发生特异性反应;获得1株可稳定分泌抗CA125单克隆抗体的杂交瘤细胞株3-B2,其分泌的单抗能特异识别GST-CA125R融合蛋白和天然CA125糖蛋白,其抗体亚型为IgG2a型;纯化的腹水单抗纯度约为90%,效价达1×106以上。结论成功获得1株能特异性识别天然CA125糖蛋白的单克隆抗体细胞株,并经腹水诱生法大量制备了抗体,为CA125临床检测试剂盒的研发奠定了基础。; 梁勤东马婷婷董晋豫李武县汪先桃李紫微王秦熊海玉涂植光; 关键词：卵巢癌肿瘤相关抗原 CA125 单克隆抗体

过表达IL-12调节单核系肿瘤细胞向巨噬细胞分化被引量：3: 2014年; 构建过表达白细胞介素-12(interleukin-12,IL-12)的THP-1单核系肿瘤细胞模型,从形态学、巨噬细胞表面标志表达水平及吞噬功能3方面探究过表达IL-12能否调节单核系肿瘤细胞向巨噬细胞分化。结果发现,与空白和空载组相比,IL-12组的THP-1细胞界限不明显,散在细胞增多;呈圆形或不规则圆形,偶见毛刺状突起;核仁模糊或消失,核染色质条索状浓集;CD68 mRNA和蛋白表达量均升高(P<0.05)。与空白组相比,CD11b mRNA和蛋白表达量升高不明显(P>0.05),但72 h CD11b蛋白表达量明显高于相同培养条件下的空载组(P<0.05)。培养72 h后各组细胞吞噬能力比较,IL-12组吞噬率(36.7±1.2)%高于空白组(15.7±3.1)%和空载组(28.0±1.5)%,差异有统计学意义(P<0.05)。上述结果提示,过表达IL-12可以促进单核系肿瘤细胞向巨噬细胞分化。; 马婷婷熊海玉王秦成凤李紫薇吴碧涛林艳涂植光; 关键词：过表达巨噬细胞

IL-12诱导急性单核细胞白血病细胞分化及凋亡的机制研究被引量：3: 2015年; 白细胞介素-12(interleukin-12,IL-12)具有明显的抗肿瘤作用,但其作用机制较复杂。前期形态学和功能的研究发现,IL-12可诱导单核细胞白血病细胞分化。该研究从巨噬细胞表面分化标志、细胞增殖能力、周期以及凋亡四个方面探讨了IL-12诱导急性单核细胞白血病细胞分化和凋亡的相关作用机理。结果发现,以人源性重组IL-12 p70处理的THP-1细胞,巨噬细胞表面标志CD68和CD11b的表达量明显增加并呈时间依赖性,CD68+和CD11b+阳性细胞数也显著增多;IL-12诱导分化过程中伴有THP-1细胞生长缓慢、G1期或G1/S期细胞周期阻滞现象;IL-12处理后的THP-1细胞凋亡率也明显增加,以早期凋亡细胞为主,并伴有抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调及促凋亡蛋白Fas表达增加。上述实验结果提示,IL-12对于急性单核细胞白血病可通过诱导肿瘤细胞向成熟巨噬细胞分化,抑制细胞增殖以及增加细胞凋亡来发挥抗肿瘤作用。; 吴碧涛马婷婷林艳熊海玉王秦成凤李紫薇涂植光; 关键词：白细胞介素-12 急性单核细胞白血病分化治疗

环氧化酶-2基因shRNA重组腺病毒的构建及鉴定: 2013年; 目的构建携带增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)标签的环氧化酶-2(cyclooxyge-nase-2,COX-2)基因shRNA重组腺病毒,并观察其对肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响。方法将前期构建的真核表达质粒pGenesil-1-COX-2-shRNA及阴性对照质粒pGenesil-1-HK的表达启动子U6及shRNA序列亚克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack中,构建重组腺病毒穿梭质粒pAdTrack-U6-COX-2-shRNA-EGFP和pAdTrack-U6-HK-EGFP,酶切及测序鉴定正确后,经PmeⅠ线性化,转化感受态AdEasier,构建重组腺病毒质粒pAd-U6-COX-2-shRNA-EGFP和pAd-U6-HK-EGFP,经PacⅠ线性化,转染AD293细胞,包装重组腺病毒Ad-U6-COX-2-shRNA-EGFP和Ad-U6-HK-EGFP,经3轮扩增后,测定滴度。RT-PCR和Western blot法检测感染细胞中COX-2基因mRNA的转录及蛋白的表达,MTS法观察重组腺病毒对肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响。结果重组腺病毒穿梭质粒pAdTrack-U6-COX-2-shRNA-EGFP和pAdTrack-U6-HK-EGFP及重组腺病毒质粒pAd-U6-COX-2-shRNA-EGFP和pAd-U6-HK-EGFP经酶切和测序鉴定均构建正确,并成功转染AD293细胞,经包装和3轮扩增后,重组腺病毒Ad-U6-COX-2-shRNA-EGFP和Ad-U6-HK-EGFP的滴度分别为1.4×1012和2.0×1012pfu/ml。重组腺病毒感染的SMMC-7721细胞中COX-2基因mRNA、蛋白相对表达量及细胞增殖能力均明显低于空白对照组及阴性对照组(P均<0.05)。结论成功构建了COX-2基因shRNA重组腺病毒Ad-U6-COX-2-shRNA-EGFP,且可显著抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖,为进一步研究COX-2作为肝癌基因治疗靶点及机制奠定了基础。; 董晋豫王秦梁勤东李武县马婷婷熊海玉李紫微涂植光; 关键词：环氧化酶-2基因短发夹RNA 腺病毒基因治疗

重组腺病毒Ad-IL-12感染淋巴细胞对人卵巢癌细胞SKOV3增殖和凋亡的影响被引量：2: 2013年; 目的探讨重组腺病毒Ad-IL-12感染人外周血淋巴细胞后对人卵巢癌细胞SKOV3周期、增殖和凋亡的影响。方法采用重组人IL-12腺病毒(Ad-IL-12)感染人外周血淋巴细胞,感染48 h后与人卵巢癌细胞SKOV3共培养(SKOV3/Ad-IL-12),同时设未感染组(SKOV3)和Ad-GFP空载感染组(SKOV3/Ad-GFP)作为对照。RT-PCR检测IL-12双亚基P35和P40的mRNA表达,ELISA检测细胞培养上清中IL-12 P70蛋白的分泌,CCK8法检测卵巢癌细胞增殖,流式细胞术分析卵巢癌细胞周期和凋亡,RT-PCR和Western blot检测抗凋亡蛋白BCL-2、survivin的表达。结果重组腺病毒Ad-IL-12可成功感染人外周血淋巴细胞,分泌较高水平的IL-12 P70蛋白;淋巴细胞过表达IL-12可抑制SKOV3细胞的增殖;与未感染组和空载组相比,SKOV3/Ad-IL-12组G1期细胞显著增加,凋亡率显著升高(P<0.05),SKOV3细胞中抗凋亡蛋白BCL-2和survivin显著下调(P<0.05)。结论人IL-12基因重组腺病毒可以成功感染人外周血淋巴细胞,分泌IL-12 P70蛋白,并可以通过阻滞细胞周期进程和促进细胞凋亡抑制人卵巢癌细胞SKOV3的增殖。; 王秦成凤匡文斌董晋豫马婷婷熊海玉涂植光; 关键词：凋亡

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