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巩新: 作品数：86 被引量：98H指数：6; 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学化学工程更多>>

合作作者

EBOV三聚体糖蛋白在新型糖基工程酵母中的表达与纯化: 2017年; 目的用新型糖基工程酵母表达并纯化得到具有类似哺乳动物细胞糖基化修饰的埃博拉病毒三聚体糖蛋白(EBOV-GP),为其亚单位疫苗研究提供基础。方法人工合成EBOV-GP基因,将编码全长EBOV-GP基因和编码缺失黏蛋白样域(MLD)与穿膜区的EBOV-GPΔMLDΔTM基因分别克隆到pPICZ-αA载体上,电转化糖基工程酵母,与在HEK-293T细胞中表达的EBOV-GP进行比较,利用PNGaseF和EndoH酶切分析其糖基化修饰,利用亲和层析与离子交换层析纯化目的蛋白,蛋白质N端测序分析其在蛋白翻译修饰过程中是否正确切除了信号肽,同时利用凝胶柱分析是否能形成三聚体结构。结果 PNGaseF酶切结果显示,用糖基工程酵母和HEK-293T细胞表达的EBOV-GP糖蛋白相对分子质量大小与N-糖基化程度均一致,EndoH酶切显示EBOV-GPΔMLDΔTM的N-糖基化修饰是非高甘露糖形式的复杂型糖基化修饰;经三步纯化得到的目的蛋白,N端测序显示为GP蛋白成熟肽序列,其自身信号肽被正确切除;凝胶柱分析显示纯化得到的目的蛋白以三聚体形式存在。结论用糖基工程酵母表达制备了具有复杂型糖基化修饰的EBOV-GP。; 吴慕胜巩新唱韶红刘波吴军; 关键词：埃博拉病毒表达纯化

7TD1细胞及其克隆对IL-6的反应性和依赖性被引量：1: 1996年; 比较了基础所和北医大提供的两株7TD1细胞。选择北医大细胞株进行克隆,筛选出对IL-6增殖反应性和依赖性较强的3株细胞(7TD1 MC1、7TD1 MC4、7TD1MC5)。其中,7TD1 MC5细胞的反应曲线呈典型的“倒S”形,对IL-6有很好的反应性和依赖性。MTT比色法显示了与~3H-TdR掺入法一致的结果,采用7TD1 MC5细胞及MTT比色法测定IL-6生物活性,可减少仪器测试的费用和避免放射性污染。确定了培养基中IL-6的最适浓度(2ng/ml)。细胞传代培养和冻存6个月,7TD1 MC5细胞对IL-6的反应性和依赖性均无明显变化。; 巩新边疆薛冲陶好霞孙澎; 关键词：克隆 IL-6 反应性

重组人白细胞介素6 部分理化生物学性质的鉴定: 1999年; 目的：对Ｎ端缺失５个氨基酸的重组人白细胞介素６（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ６，ｒｈＩＬ６）纯品的理化生物学性质进行分析鉴定。方法：用蛋白序列自动分析仪、紫外及可见光扫描仪、ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳、溴化氰裂解、等电聚焦电泳、蛋白质印迹法和ＭＴＴ比色法分别对ｒｈＩＬ６缺失体Ｎ端氨基酸序列、紫外及可见光吸收光谱、相对分子质量、肽图、等电点（ｐＩ）、抗原特异性及生物学活性进行了分析鉴定。结果：与天然ＩＬ６相比，ｒｈＩＬ６Ｎ端缺失了５个氨基酸；在２７６ｎｍ波长处有一个特异的蛋白吸收峰；相对分子质量为２１４８７；裂解的肽段分布在理论值的肽段分布范围之内；ｐＩ为６．１；能与兔抗人ＩＬ６抗体特异性结合；比活性达２．０５×１０１１ＩＵ／ｇ。结论：缺失５个氨基酸的ｒｈＩＬ６生物学活性与天然ＩＬ６; 陶好霞边疆孙澎巩新薛冲; 关键词：白细胞介素6 分子量等电点免疫印迹 RHIL-6

过表达RimL的大肠杆菌及其在制备N-乙酰化胸腺素α中的应用: 本发明公开了一种过表达RimL的大肠杆菌及其在制备N-乙酰化胸腺素α中的应用。本发明提供了一种重组菌，为将RimL的编码基因和胸腺素α的编码基因导入宿主菌中得到的重组菌。本发明的实验证明，本发明构建了N-乙酰基转移酶Ri...; 吴军刘波巩新唱韶红马清钧

血清白蛋白与粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的融合蛋白: 本发明公开了一种血清白蛋白与粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的融合蛋白，编码融合蛋白的DNA序列，携带该DNA序列的重组表达载体及被重组表达载体转化的细菌、酵母、动物细胞、植物细胞；本发明的融合蛋白包括与人血清白蛋白至少85％...; 吴军唱韶红巩新马清钧; 文献传递

7TD1细胞及其克隆对IL-6的反应性和依赖性: 1997年; 比较了本院基础医学研究所和北京医科大学提供的两株７ＴＤ１细胞。选择北京医科大学提供的细胞株进行克隆，筛选出对ＩＬ－６增殖反应性和依赖性较强的３株细胞（７ＴＤ１ＭＣ１、７ＴＤ１ＭＣ４、７ＴＤ１ＭＣ５）。其中７ＴＤ１ＭＣ５细胞的反应曲线呈典型的“倒Ｓ”形，对ＩＬ－６的反应性和依赖性很好。ＭＴＴ比色法显示了与３Ｈ－ＴｄＲ掺入法一致的结果，采用７ＴＤ１ＭＣ５细胞及ＭＴＴ比色法测定ＩＬ－６生物活性，可减少测试的费用和避免放射性污染。确定了培养基中ＩＬ－６的最适浓度（２ｎｇ／ｍｌ）。细胞传代培养和冻存６个月。; 巩新边疆薛冲陶好霞孙澎; 关键词：克隆白细胞介素6 反应性

一种细菌多糖结合疫苗的载体蛋白及其应用: 本发明公开了一种细菌多糖O糖基化修饰的重组霍乱毒素B亚单位融合蛋白及其应用。本发明提供了一种多糖和蛋白的偶联物，由细菌多糖和重组霍乱毒素B亚单位融合蛋白偶联而成；所述细菌多糖以O-糖苷键形式连接在所述重组霍乱毒素B亚单位...; 吴军孙鹏王恒樑潘超刘波朱力唱韶红巩新曾明; 文献传递

用糖基工程酵母制备具有动物细胞糖基化修饰流感血凝素糖蛋白的方法: 本发明公开了用糖基工程酵母制备具有动物细胞糖基化修饰流感血凝素糖蛋白的方法。本发明提供的方法，包括如下步骤：使流感病毒的血凝素HA基因在酵母突变体中表达，得到重组酵母；将所述重组酵母培养，制备得到具有哺乳动物糖型结构且无...; 刘波吴军巩新唱韶红王莎马清钧

血清白蛋白与粒细胞集落刺激因子的融合蛋白: 本发明公开了一种血清白蛋白与粒细胞集落刺激因子的融合蛋白，编码融合蛋白的DNA序列，携带该DNA序列的细菌、酵母、动物细胞、植物细胞；本发明的融合蛋白包括与人血清白蛋白至少85％序列同源的第一区和与人粒细胞集落刺激因子至...; 吴军唱韶红巩新马清钧; 文献传递

利用异源启动子控制大肠杆菌基因组N-乙酰基转移酶表达重组菌及应用: 本发明公开了一种利用异源启动子控制大肠杆菌基因组N-乙酰基转移酶表达重组菌及应用。本发明提供的重组菌，为将外源诱导型启动子插入宿主菌的乙酰基转移酶编码基因的上游，用于启动所述乙酰基转移酶编码基因的表达，得到的重组菌。本发...; 刘波吴军唱韶红巩新马清钧