马文彬
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
- 供职机构：北京医科大学人民医院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- EBV转化B淋巴细胞中丙型肝炎病毒抗原表达的免疫组化研究被引量：2
- 2001年
- 观察丙型肝炎患者外周血单个核细胞 (PBMC)体外转化培养后其中是否仍有丙型肝炎病毒 (HCV)存在。用EB病毒感染患者HCV阳性PBMC并使其转化 ,获得永生化B细胞 (EBVTB)。而后 ,用套式RT -PCR检测培养细胞和上清中的HCVRNA ,用免疫组化SP法观察HCV抗原在细胞中的表达。HCV在传代细胞中持续存在 ,而培养细胞中的HCVRNA负链和培养上清中的HCV间断阳性。免疫组化发现HCVNS3、NS5和C抗原分布于胞浆、细胞膜和核膜周围也可见阳性着色 ,细胞核阴性。HCV可以在体外EB病毒转化B细胞系中较长时间存在和复制。
- 程计林耿直仝文斌范涛高建恩马文彬冯百芳
- 关键词：B淋巴细胞EBV抗原
- 丙型肝炎病毒结构蛋白在哺乳动物细胞中的表达
- 2000年
- 目的 获得稳定表达丙型肝炎病毒 (HCV)结构蛋白的哺乳动物细胞系 ,以便对HCV结构蛋白的性质及其基因免疫效果作进一步的研究。方法 用RT PCR方法扩增HCV结构基因 ,并将其克隆入真核表达载体pcDNA3中 ,用磷酸钙转染法将其转入Sp2 / 0细胞 ,对目的蛋白获得稳定表达的细胞克隆进行免疫组化及细胞全蛋白的Westernblot分析。结果 克隆的基因片段全长约 1 9kb ,包括C及E2基因的全部和E1基因的部分。免疫组化显示表达蛋白位于胞浆中。Westernblot显示C蛋白为一条相对分子质量 (Mr)约 2 0× 10 3 的窄带 ,而E2蛋白为一条Mr 约 70× 10 3 的宽带 ,E1蛋白为一条Mr 约 17× 10 3 的较宽的条带。结论 HCV结构蛋白在哺乳动物细胞中得到稳定表达。
- 马文彬冯百芳
- 关键词：丙型肝炎病毒结构蛋白真核载体
- 白细胞介素-2基因对丙型肝炎病毒E2基因免疫效果的调节作用被引量：1
- 2000年
- 目的 研究白细胞介素 2 (IL 2 )基因对丙型肝炎病毒 (HCV)E2基因免疫小鼠后效果的调节作用。方法 构建Ⅱ型HCVE2基因的真核表达载体p3E2 ,免疫组化法检测其在哺乳动物细胞中的表达情况。用p3E2单独或连同IL 2真核表达质粒一起对BALB/c小鼠进行尾部皮下注射 ,酶联免疫吸附试验 (ELISA)法检测E2抗体的产生情况。结果 E2蛋白在哺乳动物细胞中得到瞬时表达。应用p3E2单独或连同IL 2真核表达质粒一起免疫小鼠均可刺激小鼠产生E2抗体 ;协同注射IL 2基因的小鼠产生的抗体滴度明显高于单独注射p3E2组的小鼠。结论 协同应用IL 2基因可明显加强小鼠对HCVE2基因的免疫反应 。
- 马文彬冯百芳
- 关键词：基因免疫丙型肝炎病毒白细胞介素2
- 丙型肝炎病毒高变区基因序列的变化被引量：1
- 2001年
- 目的 观察丙型肝炎患者外周血单个核细胞 (PBMC)体外长期存活状态下是否仍有丙型肝炎病毒 (HCV)存在及其不同时期高变区基因序列的变化。方法 用EB病毒感染并使HCV阳性PBMC转化 ,获得HCV的外周血永生化B细胞 (LCL)。而后 ,每个月应用逆转录 套式 聚合酶链反应 (RT net PCR)检测 1次培养细胞和上清液中的HCVRNA ,并用原位RT net PCR观察HCVRNA在细胞中存在的部位 ;应用基因测序技术分析LCL传代培养 1个月和 9个月后HCV高变区(HVR)核苷酸序列 ,并以原患者半年后血清作对照。结果 经连续 1年检测 ,HCV在传代细胞中持续存在 ,培养细胞中的HCVRNA负链和培养上清液中的HCV呈间断阳性 ;原位PCR发现HCVRNA阳性信号弥散性、簇状和团块状分布于胞浆中 ,细胞膜、核膜和细胞核阴性 ;患者血清HCV核苷酸变异集中在第 1491～ 15 83位核苷酸 (即 384～ 414位氨基酸 )和第 176 1～ 1781位核苷酸 (即 473～479位氨基酸 )两个区域 ,而LCL传代培养 1个月和 9个月后细胞中HCVHVR核苷酸同源性为99 .37%。结论 HCV可以在LCL中较长时间存在 。
- 程计林刘宝玲马文彬仝文斌高建恩冯百芳陶其敏魏来
- 关键词：丙型肝炎病毒B淋巴细胞高变区基因序列PBMC
