方美姑
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：安徽农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 枯草杆菌CobA和NasF的重组表达及活性研究
- 尿卟啉原Ⅲ甲基化酶/(S-adenosyl-L-methionine: Uroporphyrinogenmethyltransferase, SUMT/)是西罗血红素、维生素B12等卟吩烷类化合物分支合成的第一个酶，SU...
- 方美姑
- 关键词：枯草杆菌活性
- 文献传递
- 玉米尿卟啉原Ⅲ脱羧酶同功酶生物信息学分析、基因克隆和原核表达被引量：1
- 2010年
- 尿卟啉原Ⅲ脱羧酶是生物卟啉类化合物分支合成的关键酶。从GenBank中搜寻到4种玉米尿卟啉原Ⅲ脱羧酶:Les22、UROD1、UROD2和截短UROD,氨基酸序列比对显示N端的同源性较差;玉米les22基因比urod1基因在开放阅读框的上游少3个碱基,导致阅读框移码。植物除玉米外存在高度同源的UROD1和UROD2,具有结构完整性。本文以玉米幼叶总RNA为模板,通过RT-PCR克隆了玉米les22和urod2基因,并对突变位点进行校正,同时通过定点突变获得urod1基因,它们都编码去除叶绿体导肽的尿卟啉原Ⅲ脱羧酶。再分别将les22、urod2和urod1基因插入大肠杆菌的不同表达载体,转化表达菌株BL21(DE3),16℃诱导表达18h,SDS-PAGE分析显示,Les22的N端含有组氨酸标签或SUMO蛋白,重组蛋白表达为包涵体,UROD2的N端含有组氨酸标签或SUMO、TRX、GST或MBP蛋白,未检测到目的蛋白在上清液的特异表达,而UROD1和MBP融合为可溶性表达,表明玉米UROD的N端氨基酸残基可能参与蛋白在大肠杆菌的折叠。这为研究玉米UROD的种类和功能奠定基础。
- 汪苗方美姑亓振国张宽亮程备久范军
- 关键词：玉米基因克隆原核表达生物信息学分析
