杜凯
- 作品数：8 被引量：28H指数：3
- 供职机构：华中农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目更多>>
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- 利用套式PCR检测牛羊乏质体
- 2011年
- 为同时检测和鉴定牛边缘乏质体、中央乏质体及绵羊乏质体,根据这3种病原体的msp4基因核苷酸序列,自行设计、合成了针对3种乏质体的2对通用引物,及分别针对三者的特异引物,通过PCR条件优化,建立了检测乏质体及分别鉴定3种乏质体的套式PCR方法,并与OIE推荐的msp5半套式PCR比较。结果显示:该方法对牛巴贝斯虫、双芽巴贝斯虫、羊莫氏巴贝斯虫、山羊泰勒虫、温氏附红细胞体、东方巴贝斯虫、刚地弓形虫、伊氏锥虫均未扩增出特异性片段。套式PCR检测乏质体DNA量为0.2pg(相当于6个感染红细胞)。检测1 119份来自6个不同地区的奶牛、肉牛、水牛及羊的临床样品,阳性106份,经鉴定边缘乏质体46份,中央乏质体15份,绵羊乏质体35份,混合感染中央乏质体和绵羊乏质体4份,混合感染边缘乏质体和绵羊乏质体3份,混合感染边缘乏质体和中央乏质体3份。首次在分子生物学水平证明中央乏质体存在于中国。同时,证明牛可以混合感染边缘乏质体和中央乏质体或绵羊乏质体,以及混合感染中央乏质体和绵羊乏质体。上述848份样品用OIE推荐的msp5半套式PCR同时检测,两者符合率为98.5%(835/848)。检测结果表明,msp4套式PCR特异、敏感,可用于边缘乏质体、中央乏质体、绵羊乏质体的检测和鉴定。
- 李树清王贵强陈志飞赵俊龙王巧全张子群由轩胡永强杜凯姚宝安
- 关键词：套式PCR
- 温氏附红细胞体病PCR诊断方法的建立及其应用被引量：2
- 2007年
- 为建立特异、敏感、快速的温氏附红细胞体诊断方法,根据温氏附红细胞体16S rRNA基因序列(GenBank登录号为AY946266),设计1对种特异性引物,建立了温氏附红细胞体的PCR诊断方法。特异性试验和敏感性试验结果表明,该方法能特异性地扩增温氏附红细胞体16S rRNA基因序列的特异性片段,检测温氏附红细胞体最低DNA量为0.178 fg。利用该方法对湖北省、江苏省和黑龙江省温氏附红细胞体病感染情况进行了流行病学调查,结果显示阳性感染率分别为10.3%、5.3%、45.8%,说明温氏附红细胞体在湖北省、江苏省和黑龙江省均存在,流行病学调查显示湖北省感染率较高、流行较广。
- 李树清杜凯胡永强陈声国陈志飞周艳琴赵俊龙
- 关键词：温氏附红细胞体PCR
- 实时荧光PCR检测牛边缘无浆体方法的建立及应用被引量：5
- 2007年
- 根据牛边缘无浆体表面蛋白4的保守基因序列设计特异引物AMOC9/AMOC5、AMOC10/AMOC12和特异性探针MP,首次建立了牛边缘无浆体的实时荧光PCR检测方法,检测DNA的最低限度为200 fg。对中央无浆体、绵羊无浆体、牛巴贝斯虫、双芽巴贝斯虫、羊莫氏巴贝斯虫、山羊泰勒虫、温氏附红细胞体、东方巴贝斯虫、刚地弓形虫和伊氏锥虫进行检测,无荧光检测信号。本研究用所建立的方法检测采自江苏和哈尔滨的180份抗凝血(奶牛和肉牛),其阳性率为8.9%。结果表明,建立的实时荧光PCR检测牛边缘无浆体的方法具有较高的特异性和敏感性,可用于牛边缘无浆体病的流行病学调查、检疫和监测。
- 王贵强李树清张子群陈志飞由轩王巧全杜凯姚宝安
- 关键词：实时荧光PCRTAQMAN-MGB探针
- 边缘无浆体MSP5基因片段的克隆与原核表达被引量：2
- 2007年
- 目的克隆边缘无浆体MSP5基因,构建重组质粒,并进行表达与鉴定。方法根据GenBank公布的边缘无浆体MSP 5基因序列(AY714547)设计一对引物,无菌颈静脉采集边缘无浆体阳性的牛血,用PCR方法从4血的DNA模板中扩增MSP 5基因582bp的片断。将该片段克隆到原核表达载体pGEX-KG中,构建原核表达载体KG-MSP5,转化BL21,经IPTG的诱导表达蛋白。利用BugBuster GST Bind Purification Kit将其纯化,经Western blotting进行分析。结果重组质粒KG-MSP5,转化BL21,在IPTG的诱导下表达大小约46 kPa蛋白。western blotting分析表明其具有很好的免疫原性。结论本研究为边缘无浆体的血清学诊断试剂盒的研制奠定了基础。
- 杜凯李树清陈志飞周艳琴王贵强王巧全姚宝安赵俊龙
- 关键词：边缘无浆体原核表达纯化
- 猪附红细胞体病及其最新研究进展被引量：8
- 2007年
- 猪附红细胞体病是由猪附红细胞体附着于猪红细胞或游离于血浆中而引起的一种以贫血、黄疸、发热为主要临床特征的传染性疾病。发病对象以保育仔猪为主，亦可见母猪流产和产死胎。本病常常和其他疾病混合感染，表现不同的交叉症状．是严重影响畜牧业的传染病之一。本实验室一直致力于对附红细胞体病的研究．结合国际国内研究进展情况，现将该病的一些情况综述如下：
- 杜凯赵俊龙杜占堂王学彬安慧
- 关键词：猪附红细胞体病传染性疾病猪红细胞保育仔猪母猪流产传染病
- 边缘无浆体病分子诊断ELISA和温氏附红细胞体PCR检测方法的建立
- 边缘无浆体病和附红细胞体病是影响养牛业的两种主要的寄生虫疾病。两种病的临床表现均表现为贫血、黄疸、食欲不振、消瘦等。边缘无浆体和附红细胞体都是寄生于血液中的寄生虫，染色镜检很难区分，因此本实验室分别建立边缘无浆体和附红细...
- 杜凯
- 关键词：附红细胞体病温氏附红细胞体间接ELISA
- 文献传递
- 温氏附红细胞体16S rRNA基因的序列测定和分析被引量：9
- 2006年
- 从自然感染附红细胞体的湖北黄牛无菌采集血液,分离附红细胞体并提取病原基因组,用血营养菌的16SrRNA基因的通用引物进行PCR扩增,得到长约1.5 kb的扩增片段,将其克隆到pMD18-T载体后进行测序和分析。结果表明该片段全长为1 471 bp(GenBank收录号为AY946266),同源性分析表明该序列与Neimark公布的温氏附红细胞体(AF016546)的16S rRNA基因序列同源性达到98.7%,证实该病原为温氏附红细胞体,从分子生物学水平证实了温氏附红细胞体在湖北省的存在。将该序列与5种支原体、14种血营养菌及边缘无浆体等的相应序列进行比较,建立系统发育树,结果表明温氏附红细胞体同边缘无浆体的关系较远,而与肺炎支原体组的亲缘关系较近。
- 付媛李树清杜凯刘琴周艳琴刘恩勇姚宝安赵俊龙
- 关键词：温氏附红细胞体RRNAPCR
- 温氏附红细胞体病PCR诊断方法的建立及应用
- 本文根据温氏附红细胞体16SrRNA基因序列(Genbank登陆号为AY946266),设计一对种特异性引物,建立了温氏附红细胞体的PCR诊断方法.特异性试验和敏感性试验表明,此诊断方法与猪附红细胞体、东方巴贝斯虫、牛巴...
- 李树清杜凯赵俊龙胡永强王巧全姚宝安
- 关键词：温氏附红细胞体PCR基因序列
- 文献传递
