谭鹏
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金卫生部卫生公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- RANKL浓度对破骨细胞形成与活性的影响被引量：1
- 2014年
- 目的探讨不同浓度RANKL对骨髓单核细胞向破骨细胞分化和活性的影响。方法 50、100和150μg/L三种RANKL浓度诱导骨髓单核细胞向破骨细胞分化。抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察破骨细胞形态并计数,抗酒石酸酸性磷酸酶活性检测试剂盒检测上清中的抗酒石酸酸性磷酸酶活性,骨板吸收实验检测破骨细胞骨吸收活力。结果 100μg/L和150μg/L RANKL浓度组在破骨细胞数量、细胞大小、核数目,抗酒石酸酸性磷酸酶活性和骨吸收率方面均明显高于50μg/L组(P<0.01),而100μg/L和150μg/L组间没有明显差异。结论100μg/L RANKL浓度下破骨细胞形成和活性能力强且相对较经济,是破骨细胞诱导培养的理想浓度值。
- 李勇吴婷婷程豪谭鹏糜宝国张勇关邯峰熊伟廖晖陈安民李锋
- 关键词：骨髓细胞破骨细胞核因子ΚB受体活化因子配体
- 阳离子通道阻断剂-钌红促进破骨细胞分化的影响被引量：1
- 2013年
- 目的探讨阳离子通道阻断剂钌红对破骨细胞分化的影响及其机制。方法钌红处理Raw246．7后，50μg／L核因子．KB受体活化因子配体（RANKL）诱导6d，抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色观察TRAP＋（核93）细胞的形成；TRAP试剂盒检测细胞中TRAP酶的活性；实时定量逆转录聚合酶链反应（FIT—qPCR）检测破骨细胞特异性标志基因TRAP、组织蛋白酶K（CK）和金属基质蛋白酶-9（MMPO）mRNA表达量；RT．qPCR、Westernblot分别检测核因子-κB受体活化因子（RANK）在mRNA和蛋白水平上的表达。结果钌红促进RANKL诱导Raw246．7细胞形成TRAP阳性多核细胞，对照组TRAP吸光度（A）值为0．33±0．04，而钌红组TRAPA值为0．43±0．03；同时也上调了破骨细胞标志性基因TRAP、CK和MMPO的mRNA表达以及RANK在mRNA和蛋白水平的表达。各指标在两组中的差异有统计学意义（P〈0105）。结论钌红促进Raw246．7向破骨细胞分化，这一过程与钌红上调RANK表达有关，即与RANK—RANKL轴相关。
- 糜宝国关邯峰吴巍李勇谭鹏李锋
- 关键词：钌红破骨细胞分化
- 带有雌激素受体编码区的KLF4表达载体的构建及其转染后对细胞的可调控表达
- 2013年
- 目的构建KLF4-ER基因表达的带有加强型绿色荧光蛋白(EGFP)的博来霉素抗性的pCGF5 IEGZ载体,利用其对小鼠巨噬细胞系RAW264.7进行稳定转染株的筛选并鉴定。方法以pEGFP-KLF4质粒为模板,设计带有酶切位点的KLF4上下游引物,以PCR扩增获得编码序列,其产物电泳鉴定后纯化回收,并将改良型小鼠雌激素受体的激素链接区序列与之融合,KLF4-ER片段纯化回收后插入pCGF5-IEGZ载体中;重组体转化细菌,筛选扩增后酶切鉴定;重组质粒转染细胞,倒置荧光显微镜观察EGFP的表达,使用zeocin筛选稳定株,流式细胞术检测转染率;Western Blot、RT-PCR检测转染后的KLF4表达;经Tamoxifen诱导后,DAPI核染色观察重组载体转运胞核中的表达以及抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色检测目的基因表达的效应。结果电泳鉴定KLF4全长片段及pCGF5 IEGZ-KLF4ER重组体双酶切结果符合设定要求,重组质粒构建成功;目的载体成功转入细胞中,转染19 d后流式细胞测定稳定株转染效率达95.31%;20 d KLF4蛋白及mRNA水平均明显高于空转组和阴性组(P<0.01)。Tamoxifen诱导靶基因的表达生物效应优于对照组。结论该实验成功地用pCGF5 IEGZ型载体将带有可受调控的雌激素受体编码区的目的基因导入通用的小鼠巨噬细胞系中,为今后研究靶基因在破骨细胞中可诱导性过表达提供了新的途径。
- 吴巍关邯峰李勇谭鹏李锋
- 关键词：基因表达调控诱变力试验
