曹荣华
- 作品数：24 被引量：65H指数：4
- 供职机构：华中科技大学同济医学院附属同济医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 大鼠供心转染CTLA4-Ig基因抑制心脏移植后排斥反应被引量：2
- 2005年
- 目的研究大鼠供心转染CTLA4-Ig基因抑制心脏移植术后排斥反应的可行性。方法以BN大鼠为供者,Lewis大鼠为受者,建立心脏移植模型。将实验分为2组。对照组:供心获取过程中不给予任何干预处理;实验组:在供心获取的过程中,以质粒载体携带CTLA4-Ig(pUF1-CTLA4-Ig)经过冠状动脉灌注供心。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测供心组织中CTLA4-IgmRNA的表达,观察移植心存活时间;酶联免疫法(ELISA)检测血清γ-干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)水平;观察移植心的组织学改变;用免疫组织化学SABC法检测移植心组织中CD4+和CD8+T细胞的浸润。结果实验组移植心存活时间较对照组明显延长[(11.70±1.24)dvs(5.62±0.74)d,P<0.05]。移植后5d,实验组移植心组织中可见CTLA4-IgmRNA的表达;对照组病理学检查可见心肌间质出现弥漫性的炎性细胞浸润,伴有局部的心肌坏死,组织间质水肿,实验组仅有局灶性血管外周及心肌间质内炎性细胞浸润,未见坏死;对照组移植心组织中浸润的CD4+和CD8+T细胞数量明显高于实验组(P<0.01);实验组血清IFN-γ水平明显低于对照组(P<0.01),但血清IL-4水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论经冠状动脉灌注转染CTLA4-Ig基因,可以抑制心脏移植后排斥反应。
- 陈栋沈世乾李锦文曹荣华郭晖张伟杰陈实
- 关键词：CTLA4-IG基因心脏移植排斥反应
- 小分子干扰RNA转染猪血管内皮细胞优化体系的建立
- 2008年
- 目的探索建立高效、稳定的小分子干扰RNA（SiRNA）转染方案并建立优化的猪血管内皮细胞RNA干扰（RN～）转染体系。方法针对猪α1，3-半乳糖苷转移酶（α1，3-GT）基因合成数对SiRNA分子，运用不同转染体系（DOSPA、RiboJuice及Lipofectamine 2000）转染永生化猪血管内皮细胞系（PED）。分别应用流式细胞术、台盼蓝拒染试验及乳酸脱氢酶释放试验评价干扰α1，3-GT作用下PED的α1，3一半乳糖残基（α-Gal）表达情况以及SiRNA-脂质体转染对PED生长的影响。结果PED能有效发生特异性RNA干扰现象，且呈明显的剂量依赖性特征。SiRNA-1与脂质体Ribo—Juice在12nmol／L：6μl时，干扰效果最佳（67．3％～89．5％），整体量效优于DOSPA及Lipo—fectamine 2000转染体系。靶细胞转染SiRNA-1后48h时的α-Gal相对表达水平为10．5％，而SiRNA-2转染组则未见明显干扰现象。脂质体转染体系在转染后6～12h对靶细胞生长稍有影响，24h后细胞活性逐渐恢复。结论猪血管内皮细胞存在RNA干扰机制，RiboJuice转染体系是一种高效、低毒的SiRNA转染方式，为研究RNAi在抑制异种排斥反应中的应用奠定了基础。
- 朱珉曹荣华祁洪刚王璐胡枫陈栋刘斌陈刚张伟杰陈实
- 关键词：RNA干扰内皮细胞
- HLA-G1抑制人自然杀伤细胞杀伤猪血管内皮细胞的研究被引量：1
- 2003年
- 目的 研究HLA G1基因抑制人自然杀伤细胞 (NK细胞 )对猪血管内皮细胞杀伤的作用。方法 利用脂质体介导的基因转染技术将 pcDNA3 HLA G1转入原代培养的猪血管内皮细胞 ,以间接免疫荧光技术在蛋白质水平上检测HLA G1分子在猪内皮细胞上的表达 ;以NK细胞系(NK92 )和外周血单个核细胞为效应细胞 ,用四甲基偶氮唑盐 (MTT)法检测转染细胞对NK细胞杀伤活性的抑制效应。结果 与未转染HLA G1的对照组相比 ,NK92和外周血单个核细胞对转有HLA G1的猪血管内皮细胞的杀伤效率均有明显降低 (P <0 .0 5 )。结论 HLA G1分子可以明显抑制人NK细胞对猪血管内皮细胞的杀伤。
- 王树森韩军艳曹荣华祁洪刚夏振雄陈栋吴雄文龚非力陈实
- 关键词：自然杀伤细胞异种移植
- 成年人先心病房间隔缺损超声诊断体会
- 2002年
- 石小红曹荣华石小燕
- 关键词：先天性心脏病房间隔缺损超声诊断成年ASD
- 猪-猕猴延迟性异种移植排斥反应的发生机制被引量：4
- 2005年
- 目的 :探讨猪 猕猴延迟性异种移植排斥反应 (DXR)的发生机制。方法 :建立湖北白猪 云南猕猴的腹腔异位心脏移植模型 ,应用中华眼镜蛇毒因子 (Y CVF)完全清除受者体内补体 ,并应用环孢素A(CsA)、环磷酰胺 (CTX)和甲泼尼龙 (M .P)三联免疫抑制治疗。检测血清C3、C4、抗猪内皮细胞天然抗体 ,免疫组化方法染色检测移植物中C3、C5b 9、IgG、IgM、细胞间黏附分子 1(ICAM 1)、肿瘤坏死因子 α(TNF α)、单核巨噬细胞 (CD6 8)、NK细胞 (CD5 7)、CD4 +T细胞和CD8+T细胞的表达。结果 :移植心存活时间分别为 8、10、13和 13天 ,血清C3和补体总活性均下降为 0 ,抗猪内皮细胞天然抗体水平在移植后则有一个更为明显的下降 ,在移植心失功前 2～ 4天开始天然抗体稍有回升 ,但较术前正常时仍明显偏低。移植心有程度不等的C3、C4、C5b 9、IgG及IgM沉积 ,大量的单核细胞 (5 0 % ) ,少量的NK细胞 (8%～ 10 % )、CD4 +T细胞 (15 % )和CD8+T细胞(2 5 % )。移植物血管内皮细胞表面出现ICAM 1的表达上调 ,移植物间质中出现TNF α的表达增加。结论 :体液免疫和细胞免疫参与猪 猕猴DXR排斥反应的发生。
- 陈栋曹荣华郭晖陈刚王西墨沈世乾孙乾云王虹陈丽君吴瑛朱建国王婉瑜熊郁良陈实
- 关键词：猕猴心脏移植
- 新生猪胰岛细胞的HLA-G_1基因转染被引量：1
- 2005年
- 目的探讨HLA-G1基因转染新生猪胰岛细胞的可行性,检测其表达和功能状况。方法体外分离纯化新生猪胰岛细胞,脂质体载体转染HLA-G1基因。免疫荧光法检测HLA-G1基因在胰岛细胞上的表达状况;51Cr释放实验分析其对人NK细胞细胞毒的抑制作用。结果新生猪胰岛细胞HLA-G1基因表达率大约为50%,体外转染24-48 h达高峰;混合淋巴细胞培养(胰岛细胞+ NK细胞)后,空质粒转染组的胰岛细胞溶解率为71.57%,而转染组胰岛细胞溶解率为53.5%。结论利用脂质体Genejammer转染体外培养的新生猪胰岛细胞,可以获得靶基因的瞬时高效表达; HLA-G1基因转染可以有效抑制NK细胞对异种胰岛的细胞毒作用。
- 曹荣华韩军艳吴雄文王树森陈栋祁洪刚夏振雄陈实
- 关键词：猪胰岛细胞基因转染混合淋巴细胞培养脂质体载体人NK细胞异种胰岛
- 重组腺相关病毒载体介导CTLA4Ig转染延长同种大鼠心脏移植存活时间
- 2005年
- 目的研究重组腺相关病毒载体介导CTLA4Ig(rAAV-CTLA4Ig)全身转染对大鼠同种心脏移植的影响.方法以BN大鼠为供者,Lewis大鼠为受者,建立心脏移植模型.实验分为两组.对照组:供、受者不给予任何处理;转染组:受者于心脏移植前30d,通过尾静脉全身注射1×109斑点形成单位(PFU)的rAAV-CTLA4Ig.观察移植心存活时间;ELISA法检测血清CTLA4Ig、干扰素γ(IFN γ)和白细胞介素4(IL-4)水平;免疫组织化学法(SABC法)检测移植心组织中CD4+和CD8+T细胞的浸润.对移植心存活时间明显延长的受者,用其脾细胞与供者脾细胞进行混合淋巴细胞培养,观察受者对供者的免疫反应状态.结果转染组移植心存活时间较对照组明显延长(P＜0.05);转染组血清CTLA4Ig蛋白一直维持在26.67～35.47 mg/L,移植后转染组血清IFN-γ水平下调,血清IL-4水平上调(P＜0.05);对照组出现典型的急性排斥反应表现,转染组心肌组织基本正常,间质内无炎性细胞浸润或血管外周及心肌间质内有局灶性炎性细胞浸润,未见坏死:对照组移植心组织中浸润的CD4+和CD8+T细胞数量明显高于转染组(P＜0.01);转染组受者对供者的脾细胞增殖反应明显低于对照组(P＜0.05).结论重组腺相关病毒载体可以介导CTLA4Ig基因的持续表达,通过全身途径转染受者可以明显延长同种移植心的存活时间,降低受者对供者的免疫反应性.
- 陈栋沈世乾李锦文曹荣华郭晖孔强汪道文陈实
- 关键词：重组腺相关病毒载体介导CTLA4IG心脏移植
- 异位妊娠保守治疗声像图分析及其临床价值(附64例报告)被引量：1
- 2001年
- 目的 分析 64例异位妊娠氨甲喋呤成功保守治疗前经腹、经阴道超声声像图特征及其临床价值。方法常规经腹检查 ,排尿后经阴道检查 (TVS)。结果 经腹部探查包块检出率 69% (4 4 64 ) ,TVS检出率 88% (5 6 64 )。异位妊娠包块 <5 .0cm占 93 % (5 2 5 6) ,>5 .0cm占 7% (4 5 6)。异位娠妊包块低回声 (未破裂型 )占 5 2 % (2 9 5 6) ,强回声和混合回声 (流产型 )占 48% (2 7 5 6)。结论 TVS明显优于常规经腹探查 ,可更早期确诊异位妊娠。异位妊娠包块
- 石小红郭少文曹荣华石小燕
- 关键词：超声波诊断异位妊娠声像图TVS
- 免疫活性细胞在异种移植急性血管性排斥反应中的意义被引量：2
- 2005年
- 目的探讨免疫活性细胞在异种移植急性血管性排斥反应(AVR)中的意义。方法猪到猕猴腹腔内异位心脏移植,使用高纯度的眼镜蛇毒因子完全清除受体体内补体,建立AVR模型。常规病理检查,并采用免疫组化法检测移植心CD4+T细胞、CD8+T细胞和巨噬细胞浸润程度,检测细胞间黏附分子1(ICAM1)和肿瘤坏死因子α(TNFα)的表达水平。结果移植心内大量淋巴细胞浸润,其中50%为巨噬细胞,CD4+T细胞占15%,CD8+T细胞占25%;ICAM1和TNFα表达明显上调。结论细胞机制在异种移植AVR发生、发展过程中发挥重要作用。
- 曹荣华陈栋郭晖陈刚王西墨沈世乾陈实
- 关键词：急性血管性排斥反应淋巴细胞
- 小鼠胰岛的分离纯化和培养被引量：3
- 2003年
- 曹荣华陈实
- 关键词：小鼠胰岛纯化胰岛细胞移植I型糖尿病
