李宝玉
- 作品数：78 被引量：219H指数：8
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划“九五”国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生化学工程更多>>
- 一种抗体检测用胶体金试纸条的制备方法及应用
- 本发明公开了一种抗体检测用胶体金试纸条的制备方法，包括以下步骤：制备免疫兔血清沉淀的IgG抗体的制控带；胶体金溶液的制备；金标抗体的制备；胶体金试纸条的制备。本发明的抗体检测用胶体金试纸条包括底板、样品垫、涂覆胶体金标记...
- 柳纪省王蒲张韵杨彬兰喜李志勇殷相平李学瑞李宝玉
- 文献传递
- 截短的猪繁殖与呼吸综合征ORF5基因及重组蛋白的原核表达被引量：3
- 2010年
- 通过PCR方法从重组质粒pGEM-ORF5扩增得到缺失N端疏水序列的基因片段dORF5(deleting ORF5)。将dORF5克隆至原核高效表达载体pGEX-4T-1,在E.coliRosetta细胞中成功表达了重组蛋白GST-dORF5。用Western blotting鉴定表达蛋白,证明dORF5基因得到表达。本试验得到的重组蛋白,为进一步研究PRRS病毒结构蛋白的结构和功能奠定了基础。
- 李国娟柳纪省李宝玉娄忠子田永强
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征ORF5基因原核表达
- 双表达的AAV重组病毒的制备方法
- 本发明公开了一种双表达的AAV重组病毒的制备方法，采用基因克隆技术将合成的特异性PRRSV RNA干扰寡核苷酸序列克隆至AAV Helper Free System中的表达质粒pAAV-U6-IRES-hrGFP的U6启...
- 柳纪省杨彬兰喜邱燕殷相平李学瑞李宝玉白银梅张韵李志勇方玉萍
- 文献传递
- 动物重大疫病可持续控制的大分子基础研究
- 柳纪省杨彬殷相平兰喜李宝玉
- 1、该项目完成了5种重大动物传染病病原8个病毒株的全基因组序列测定和分子结构特征分析，是中国动物病原流行株的第一手珍贵资料。该课题已将大多数病毒株的全基因组序列登陆Genbank，为国内外广大学者和疾控中心人员对重大动物...
- 关键词：
- 关键词：动物疫病动物疫苗
- 猪树突状细胞表面分子CD103的表达及其抗血清的制备
- 2021年
- 为制备抗猪树突状细胞表面分子CD103蛋白的多克隆抗体,首先从NCBI基因库中获取查找猪源CD103的基因序列,并设计引物;其次,采集猪呼吸道淋巴结样品,提取RNA反转录为cDNA,通过PCR的方法扩增得到CD103基因片段;然后将所获扩增的CD103基因克隆入原核表达载体pET-30a(+)并构建表达重组质粒pET-30a-CD103,将构建的重组质粒转化入BL21(DE3)感受态细胞,利用IPTG诱导蛋白表达,用NI-NTA亲和层析的方法纯化目的蛋白;最后,将纯化的目的蛋白与ISA206佐剂混合乳化后通过背部皮下免疫途径免疫BALB/c小鼠,经3次加强免疫后收集血清获得多克隆抗体。利用ELISA、Western blot和间接免疫荧光(IFA)试验评价制备的多克隆抗体的效价和反应性。结果表明,本研究成功扩增得到猪CD103基因并成功构建重组表达质粒;利用原核表达系统成功表达了猪CD103目的蛋白。Western blot以及IFA结果显示,本研究制备的多克隆抗体特异性高,能与CD103蛋白发生特异性结合;经ELISA滴定结果显示,制备的多克隆抗体在稀释至1∶25 600倍时依旧具有良好的反应性。综上表明,本研究成功制备抗猪CD103蛋白多克隆抗体,为后期制备抗CD103单克隆抗体及研究黏膜免疫过程中CD103阳性树突状细胞的相关研究奠定了基础。
- 张韬付钰广李宝玉王金泉刘光亮
- 关键词：树突状细胞多克隆抗体
- 禽流感病毒H5N2亚型A/Chicken/Gansu/2003株HA+NA基因重组腺病毒的构建
- 2008年
- 目的基于腺病毒可感染禽类呼吸道和肠道上皮黏膜的特性,本文构建了包含有禽流感病毒H5N2亚型HA和NA基因的重组腺病毒,为进一步研制口服禽流感活载体疫苗奠定基础。方法通过RT-PCR方法分别扩增出AIV的HA和NA全基因片段,利用拼接接头将HA和NA定向串联并插入到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV之中,然后在大肠杆菌中实现腺病毒骨架载体pAdEasy-1和重组腺病毒穿梭载体的同源重组,获得插有外源基因的重组腺病毒质粒,进而通过转染HEK293细胞,得到含有目的基因HA和NA的重组腺病毒。结果在pAdTrack-CMV载体中成功克隆了HA+NA双基因,并与腺病毒骨架载体在大肠杆菌中实现了同源重组;线性化后的重组腺病毒质粒转染HEK293细胞后可观察到典型的细胞病变和绿色荧光蛋白的表达。结论成功获得了含有HA+NA双基因重的组腺病毒,为口服活载体疫苗的研制提供了依据。
- 李宝玉殷相平李学瑞兰喜杨斌方玉萍柳纪省
- 关键词：禽流感病毒重组腺病毒
- 猪源冠状病毒TGEV中国分离株纤突蛋白生物信息学分析被引量：4
- 2009年
- 以猪源冠状病毒(Porcine coronavirus)TGEV纤突蛋白基因序列为基础,利用生物软件对TGEV中国分离株纤突蛋白进行N-糖基化位点、跨膜螺旋、进化树、二级结构及抗原位点的预测和分析。结果显示所有TGEV毒株可分为3个基因型,4株中国分离株分别归属于以上3个基因型,属于Ⅰ型的中国株TSX在跨膜螺旋的氨基酸及二级结构上与其他中国株有明显的差异,而同属于Ⅲ型中国毒株SC-Y和TH-98在跨膜螺旋的氨基酸及二级结构上非常接近,而所有中国分离株抗原表位没有明显差别,表明TGEV在中国没有显著的变异。
- 李建强柳纪省程杰兰喜殷相平李宝玉李学瑞杨彬娄忠子吴润
- 关键词：猪传染性胃肠炎纤突蛋白生物信息学分析
- 一种利用植物油佐剂制备动物病毒性、细菌性疫苗的方法
- 一种利用植物油佐剂制备动物病毒性、细菌性疫苗的方法，其特征在于它包括以下步骤：(1)制作抗原剂，将制苗毒(菌)株用敏感细胞或培养基复制，灭活后，获得抗原；并将所述的抗原制成抗原剂；(2)制作植物油佐剂；(3)混匀，将所述...
- 柳纪省殷相平黄银君白银梅牟克斌李宝玉杨联李志勇王辉兰喜张兴旺
- 文献传递
- 猪圆环病毒2型cap基因与猪γ-干扰素基因双表达载体的构建及稳定表达
- 2010年
- 通过PCR方法分别从含有猪圆环病毒2型(PCV-2)核衣壳蛋白(Cap)基因和猪,γ-干扰素(PoIFN-γ)基因的重组克隆载体pMD18-PCV-2Cap和pMD18-PoIFN-γ中扩增出Cap和PoIFN-γ的基因,将两基因亚克隆到真核表达载体pBudCE4.1中,构建重组真核双表达载体pBud-IFNPCV。重组质粒转染BHK-21细胞后进行Zeocin^(TM)抗性筛选建立细胞系,阳性细胞通过间接免疫荧光(IFA)和Western blot检测cap和PoIFN-γ在BHK-21细胞中的表达。结果显示,试验中筛选出1株Zeocin^(TM)抗性阳性BHK-21细胞,cap和PoIFN-γ均在该细胞中获得稳定高效表达,这将为猪圆环病毒病的防治提供新的方法。
- 娄忠子杨彬兰喜李学瑞李志勇殷相平李宝玉柳纪省
- 关键词：CAP干扰素基因BHK-21细胞CAP质粒转染克隆载体
- 猪传染性胸膜肺炎血清抗体检测被引量：30
- 2001年
- 应用间接血凝试验对来自甘肃、陕西、宁夏、河南、湖北、湖南和海南 7个省 (区 )的 14 70份猪血清进行猪传染性胸膜肺炎血清抗体检测和分型鉴定。结果猪传染性胸膜肺炎平均抗体阳性率为 2 0 % ,其范围为 0— 60 % ;分型鉴定表明 ,各省 (区 )的血清型不尽相同 ,主要为 1、3、7型。
- 逯忠新柳纪省赵萍李宝玉
- 关键词：传染性胸膜肺炎分型鉴定血清抗体检测间接血凝试验胸膜肺炎放线杆菌
