石瑞君
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
- 供职机构：安徽农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：安徽省高校省级自然科学研究项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 家蚕吡哆醛激酶cDNA的克隆、表达和基因结构分析被引量：2
- 2008年
- 吡哆醛激酶(pyridoxal kinase,PLK,EC2.7.1.35)是维生素B6关键代谢酶,其cDNA的克隆在昆虫类还未见报道。利用生物信息学原理和使用PCR方法,克隆出编码家蚕Bombyx mori吡哆醛激酶的cDNA(GenBank登录号DQ452397),体外原核表达成功,并对表达粗提产物进行了酶活检测。克隆到的cDNA含有一894bp的完整可读框,编码一条分子量为33.1kD,含298个氨基酸残基的蛋白质。序列比对显示此蛋白质与人类吡哆醛激酶具有52.84%的同一性,包含吡哆醛激酶家族共有的特征保守序列,但比哺乳动物和植物克隆到的吡哆醛激酶均少10多个氨基酸残基,几个有关键功能且在哺乳动物和植物中均保守的氨基酸残基在此蛋白中被替换。依据家蚕基因组数据库信息和PLK的cDNA,家蚕PLK基因包含5个外显子和4个内含子,跨越10kb DNA序列,所有外显子/内含子交接点都遵从gt/ag剪接规则,基因的5′端启动子调控区发现有TATA-box和CAAT-box保守基序。
- 张剑韵石瑞君黄龙全
- 关键词：家蚕吡哆醛激酶CDNA克隆基因结构分析
- 家蚕磷酸吡哆醇氧化酶cDNA克隆、鉴定及基因结构分析被引量：2
- 2008年
- 【目的】了解家蚕维生素B6关键代谢酶磷酸吡哆醇氧化酶(PNPO)的基因结构。【方法】利用生物信息学原理和PCR方法,克隆出编码家蚕(Bombyx mori)PNPO的cDNA(GenBank登录号:DQ452398);采用T7启动子/T7RNA聚合酶原核表达系统对cDNA进行体外表达,并通过酶活检测进行表达产物的功能鉴定;依据家蚕基因组数据库信息和得到的cDNA,对家蚕PNPO基因结构进行分析。【结果】克隆到的cDNA含有771bp的完整可读框,编码一条分子量为29.86kD、含257个氨基酸残基的蛋白质。序列比对显示此蛋白质与人类PNPO具有51.44%的同源性,包含PNPO家族共有的保守序列,但在人和大肠杆菌PNPO中具有重要作用的几个氨基酸残基在此蛋白质中被替换。在以磷酸吡哆醇(PNP)为底物时,表达产物Pro-PNPO的酶活力约为17nmol·min-1·mg-1。家蚕PNPO基因包含5个外显子和4个内含子,跨越3.5kbDNA序列,所有外显子/内含子交接点都遵从gt/ag剪接规则,基因的5’端启动子调控区发现有TATA-box和CAAT-box保守基序。【结论】获得家蚕PNPO基因,可利用该基因在分子水平上研究家蚕的VB6代谢特征,弄清PNPO家族的特征及其在生物进化过程中的演变规律。
- 张剑韵石瑞君黄硕豪黄龙全
- 关键词：家蚕磷酸吡哆醇氧化酶CDNA克隆酶活力基因结构分析
- 家蚕磷酸吡哆醛激酶cDNA的克隆和酶活表征(英文)被引量：1
- 2007年
- 吡哆醛激酶 (EC 2.7.1.35) 在 ATP 和 Zn2+的存在下,催化吡哆醛的磷酸化反应生成磷酸吡哆醛 (PLP)。在生物体内许多酶促反应中,PLP 是一种重要的辅酶因子。家蚕和哺乳动物一样,需依赖食物中的维生素 B6前体来合成 PLP。文章描述了利用家蚕基因组数据库序列信息及使用 PCR 方法,克隆出编码家蚕吡哆醛激酶的 cDNA (GenBank 登录号:DQ452397)。克隆到的 cDNA 含有一个 894 bp 的完整可读框,编码一条分子量为 33.1 kDa,含 298 个氨基酸残基的蛋白质。序列比对显示此蛋白质序列与人类吡哆醛激酶蛋白序列具有 48.6%的同一性,包含吡哆醛激酶家族共有的特征保守序列,但其氨基酸残基数比哺乳动物和植物克隆到的吡哆醛激酶残基数均少 10 多个残基。多序列比对结果显示,吡哆醛激酶中几个有关键功能且在哺乳动物和植物中均保守的氨基酸残基在此蛋白中被替换为其他种类氨基酸残基。采用 T7 启动子和 T7 聚合酶表达系统对克隆到的 cDNA 进行了原核表达并对表达粗提产物进行了酶活检测。实验结果显示表达得到的可溶性蛋白产物占其总蛋白量为 10%,细胞粗提物具有活力为 30 nmol/min/mg 的吡哆醛激酶活性,结果证实了克隆到的 cDNA 编码家蚕中的吡哆醛激酶。
- 石瑞君张剑韵江昌俊黄龙全
- 关键词：吡哆醛激酶家蚕基因组数据库
- 家蚕VB6代谢中两个关键酶cDNA克隆、原核表达、酶学鉴定及基因结构研究
- 维生素B6是一类化合物的总称，包括吡哆醇(Pyridoxine，PN)、吡哆胺(Pyridoxine，PM)、吡哆醛(Pyfidoxal，PL)，及三者相应的磷酸酯形式，磷酸吡哆醇(Pyridoxine-5’-phosp...
- 石瑞君
- 关键词：吡哆醛激酶磷酸吡哆醇氧化酶基因组数据库原核表达
- 文献传递
