陈宗伦
- 作品数：15 被引量：109H指数：5
- 供职机构：中国计量学院生命科学学院更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金浙江省重大科技专项基金杭州市重大科技创新项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生化学工程更多>>
- 农杆菌介导Bt基因遗传转化高粱被引量：17
- 2009年
- 高粱是全球仅次于小麦、水稻、玉米、大豆和马铃薯等的重要作物之一。以高粱幼穗愈伤组织为转化受体,通过农杆菌介导法和含有抗潮霉素和gus基因的双元载体将杀虫晶体蛋白基因cry1Ab导入高粱品种115、ICS21B和5-27,经Hyg筛选共获得21个独立的转基因株系,52株转基因植株,平均转化率为1.9%。经PCR、Southern杂交和RT-PCR分析表明cry1Ab基因已整合入高粱基因组中并得到正确转录。Bt蛋白Westernblotting分析和ELISA定量测定显示,cry1Ab基因在转基因高粱植株中表达,但不同转基因植株表达量有差异。饲虫试验表明,转基因高粱对大螟(Sesamiainferens)具有一定抗性。
- 张明洲唐乔陈宗伦刘军崔海瑞舒庆尧夏英武I.Altosaar
- 关键词：BT基因农杆菌高粱
- 恩诺沙星人工抗原及多克隆抗体的制备被引量：4
- 2012年
- [目的]制备恩诺沙星人工抗原及多克隆抗体。[方法]采用活性酯法合成恩诺沙星的人工抗原,并通过紫外光谱扫描和SDS-PAGE电泳对其进行鉴定。利用免疫原(ENR-BSA)免疫新西兰大白兔,制备抗恩诺沙星的高亲和力和高特异性的多克隆抗体。[结果]恩诺沙星成功地偶联到载体蛋白上。通过动物免疫,获得了高效价的抗血清,最高效价达到1∶100 000,说明人工抗原成功地诱导机体产生免疫应答。[结论]恩诺沙星的人工抗原合成路线简单易行,可为进一步建立恩诺沙星的免疫检测方法奠定了基础。
- 邹晓楠龚云飞奚茜李沐洁张晓峰方结红陈宗伦王唯芬张明洲
- 关键词：恩诺沙星人工抗原多克隆抗体
- CdTe/ZnSe核壳量子点免疫层析试纸条检测克伦特罗的研究被引量：32
- 2010年
- 采用巯基丁二酸作为表面修饰剂,水相法合成水溶性的CdTe/ZnSe核壳量子点,然后在N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)的作用下,将CdTe/ZnSe核壳量子点与抗克伦特罗多克隆抗体(Anti-CLE pAb)连接。通过凝胶电泳和斑点杂交实验,验证CdTe/ZnSe核壳量子点与Anti-CLE pAb连接成功,并且CdTe/ZnSe-Anti-CLE pAb偶联物能识别克伦特罗-BSA抗原(CLE-BSA)。光谱分析表明,量子点与抗体连接后荧光增强,荧光峰位从628nm红移至635nm。将合成的CdTe/ZnSe-Anti-CLE pAb偶联物作为指示克伦特罗(CLE)分子的荧光标记物,制备出一种用于检测CLE的免疫层析试纸条,其最低检测量可达1μg/L。与ELISA法的对比实验表明,此试纸条能应用于CLE残留的快速检测。
- 胡华军付涛付涛张明洲陈宗伦洪治
- 关键词：克伦特罗琥珀酰亚胺荧光增强凝胶电泳斑点杂交ELISA法
- 转基因高粱Cry1Ab蛋白含量的比较研究被引量：3
- 2009年
- 通过农杆菌介导法将杀虫晶体蛋白基因cry1Ab导入高粱恢复系115中,共获得13个独立的转基因株系,26株转基因植株,转化率为5.1%;GUS活性、PCR、Southern和Western杂交分析表明,此基因已整合进高粱基因组并得到正确表达。利用ELISA试剂盒测定Cry1Ab蛋白含量,结果表明,不同转基因植株的Cry1Ab蛋白含量有明显差异,最高可达0.850μg/g,占可溶性蛋白的0.016%,还有一些转基因植株中不能表达;同一转基因植株的不同组织中表达量有明显差异,其顺序为:叶>颖壳>籽粒>根>茎;不同部位的叶片也有差异,其顺序为:中部叶>基部叶>新叶。
- 张明洲陈宗伦方美明崔海瑞夏英武
- 关键词：CRY1AB基因农杆菌
- 农杆菌介导水稻sbeIIb基因转化体系的建立被引量：1
- 2006年
- 本文对水稻愈伤组织再生体系及其转化影响因子进行了研究。以水稻品种秀水11的幼胚和成熟胚为外植体,以M S+肌醇0.1g/L+2,4-D 2mg/L+6-BA 0.2mg/L+脯胺酸2.8g/L+水解酪蛋白0.3g/L作诱导培养基,愈伤组织诱导率最高为73.45%,愈伤组织在M S+6-BA2 mg/L+NAA 0.5mg/L的分化培养基上,分化频率达53.33%;在此基础上对农杆菌介导水稻愈伤组织转化的因子进行了优化,获得较高转化频率的条件为:预培养时间3d,在OD600值为0.6农杆菌菌液中感染10m in,共培养3d。
- 陈宗伦张明洲方结红刘军俞晓平孙传兴Christer Jansson
- 关键词：农杆菌水稻
- 禽类食品中磺胺二甲嘧啶间接竞争ELISA检测方法的建立被引量：4
- 2011年
- 试验采用高碘酸钠法合成了磺胺二甲嘧啶的人工SMZ-BSA和SMZ-OVA,紫外扫描和SDS-PAGE电泳鉴定证明抗原耦联成功。在此基础上,建立间接竞争ELISA法,将磺胺二甲嘧啶添加到鸡蛋和鸡肉样品中,分别用ELISA和高效液相色谱（HPLC）分析方法检测。结果表明,在0.1~50 ng/mL浓度范围内,方法的检测灵敏度IC10=0.18 ng/mL。鸡蛋实际样品的检出限可达到2.0 ng/g,鸡肉实际样品检出限可达到5.0 ng/g。研究建立的ELISA方法与HPLC方法具有较高的相符性,可用于鸡蛋与鸡肉样品中磺胺二甲嘧啶残留含量分析的大量样品的筛查。
- 龚云飞王唯芬张明洲陈宗伦奚茜李沐洁
- 关键词：ELISA鸡蛋鸡肉
- 磺胺二甲嘧啶人工抗原的合成与鉴定被引量：3
- 2009年
- 采用重氮化法将磺胺二甲嘧啶(SM2)与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)交联合成人工抗原SM2-BSA与SM2-OVA,并通过紫外扫描、SDS-PAGE电泳、凝胶层析和红外光谱等方法扫描进一步检测合成效果.紫外扫描检测结果显示,SM2与BSA、OVA偶联成功,SM2-BSA与SM2-OVA的特征波长分别为2762、77 nm;经计算SM2-BSA与SM2-OVA的分子结合比例分别为5.3∶1和18.4∶1;SDS-PAGE电泳迁移率、凝胶层析出峰时间和红外光谱曲线特征均显示SM2与BSA、OVA偶联成功.
- 张明洲胡华军华加宁方结红陈宗伦俞晓平
- 关键词：磺胺二甲嘧啶人工抗原重氮化牛血清白蛋白
- 玉米赤霉烯酮单克隆抗体制备及免疫分析被引量：3
- 2013年
- 采用活泼酯法将玉米赤霉烯酮（Zaralenone，ZEN）分别与牛血清白蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）偶联合成免疫原ZEN—BSA和包被原ZEN—OVA，经紫外扫描和聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定后免疫BALB/c小鼠；挑选产生高效价和高敏感性抗体的小鼠进行抗原超强免疫．取脾细胞与SP2／0细胞融合获得1株稳定分泌抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体的杂交瘤细胞（3D8）。经鉴定，该抗体亚类为IgG1，轻链为k型。经体内诱生腹水并纯化获得效价为l：2．048x106的单克隆抗体。建立了基于单克隆抗体的ZEN间接竞争ELISA法（ic—ELISA），该方法ic50和检出限分别为22．89pg／mL和10．07pg/mL。与a-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮、a-玉米赤霉醇和β-玉米赤霉醇的交叉反应率分别为95％、8％、12％、6％和5％，而与黄曲霉毒素B1、呕吐毒素、伏马毒素B1和赭曲霉毒素A未见有交叉反应。在玉米、大麦、小麦和燕麦中加标的回收率在86．4％～104．8％之间。该方法灵敏特异。可作为快速检测谷物中玉米赤霉烯酮的初筛方法。
- 李沐洁张明洲奚茜陈宗伦王唯芬龚云飞
- 关键词：玉米赤霉烯酮单克隆抗体间接竞争ELISA
- sbeIIb基因hpRNA结构植物转化载体的构建被引量：1
- 2006年
- hpRNA介导基因沉默技术是一种下调某个内源目的基因表达的有效技术.本研究将淀粉分支酶基因sbeIIb启动子控制下的sbeIIb基因的hpRNA结构构建于植物双元表达载体pCAMBIA1305.1中,并将该重组载体导入农杆菌超毒力菌株AGL1中,构建了一种适于禾本科的植物转化载体.
- 张明洲方结红陈宗伦刘军胡华军孙传兴Christer Jansson
- 关键词：HPRNA
- 三聚氰胺人工抗原及多克隆抗体的制备被引量：4
- 2011年
- 采用戊二醛法将三聚氰胺(Melamine,MEL)偶联到牛血清白蛋白(BSA)上合成免疫原三聚氰胺-牛血清白蛋白(MEL-BSA).三聚氰胺甲醛树脂法对三聚氰胺衍生化,再偶联到鸡卵清蛋白(OVA)合成包被原三聚氰胺-鸡卵清蛋白(MEL-OVA).对纯化后的合成抗原进行紫外扫描、红外扫描和SDS-PAGE电泳鉴定.免疫新西兰大白兔,检测抗体的生成.结果表明,免疫兔血清的效价达到了1∶20 000,从而为进一步建立三聚氰胺的免疫检测方法奠定了基础.
- 龚云飞王唯芬张明洲陈宗伦彭雪李沐洁奚茜
- 关键词：三聚氰胺人工抗原多克隆抗体
