高彦飞
- 作品数：22 被引量：19H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院国家生物医学分析中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生理学更多>>
- CUEDC2突变体的构建及在原核和昆虫表达系统中的表达被引量：1
- 2011年
- 为构建CUEDC2的突变体并在原核和昆虫表达系统中表达验证,根据人cuedc2序列设计引物,以其突变体质粒为模板PCR扩增目的片段,酶切后连接至pET28a原核表达载体以及pFastBac1-Flag-N和pFastBac-HTA昆虫表达系统的表达载体。转化至DH5α后提取质粒,经菌液PCR、测序鉴定后,转入大肠杆菌BL21(DE3)及DH10Bac感受态细胞中。原核表达载体在E.coli中表达后用Ni-NTA亲和纯化,SDS-PAGE检测。昆虫表达载体提取杆粒,转染至昆虫细胞Sf9中表达。最后用western进行鉴定。结果成功构建了CUEDC2的突变体,并在原核和昆虫表达系统中表达。说明在原核和昆虫表达系统中,成功表达的CUEDC2突变体蛋白为CUEDC2的结构和功能研究奠定了基础。
- 王玉博高彦飞李腾常艳穆蕊徐金敬王芊艺巩伟丽于鸣李慧艳
- 关键词：CUEDC2昆虫突变体
- AWP1抑制TNFα诱导的NF-κB转录活性
- 2011年
- AWP1含有A20样锌指蛋白结构域。在人乳腺文库中克隆了AWP1 cDNA序列。双荧光报告基因检测系统证明过表达AWP1抑制TNFα诱导的NF-κB转录激活,并且AWP1与TNFα受体复合物中的TRAF2、IKKγ存在外源相互作用,为AWP1抑制TNFα信号通路的机制研究提供线索。
- 穆蕊高彦飞陈亮李腾甄诚于鸣巩伟丽潘欣夏晴
- 关键词：TNFΑNF-ΚB
- HeLa/GFP—H2B细胞系的构建及对其有丝分裂进程的动态观察被引量：3
- 2011年
- 准确的染色体分离依赖于有丝分裂过程的精确调控,包括有丝分裂的时间,及纺锤体检查点的正确调控等。通过动态观察有丝分裂染色体的运动可对上述研究进行精确定量。结果显示,利用逆转录病毒系统成功构建了稳定融合表达绿色荧光蛋白GFP—H2B的HeLa细胞系,结合细胞同步化方法,建立了一套利用活细胞荧光共聚焦显微镜观察HeLa细胞有丝分裂的实验体系。
- 李腾高彦飞常艳王玉博穆蕊陈亮甄诚韩秋影于鸣巩伟丽张维娜李慧艳
- 关键词：有丝分裂细胞同步化
- 体外APC/C活性体系的建立及其影响因素的研究
- 2011年
- 为获得具有细胞周期后期促进复合物(APC/C)活性的细胞裂解液并建立APC/C体外活性检测体系,以其底物Cyc-lin B及Securin的降解为检测指标,分别从细胞阻滞于有丝分裂期的时间,UBCH10(APC/C的E2酶)的浓度以及裂解液浓度等几个方面研究了各种处理因素对APC/C活性的影响,并且用体外翻译底物验证了其活性及相关结论。此项工作为进一步探索APC/C相关分子事件奠定了基础。
- 高彦飞李腾常艳王玉博穆蕊陈亮甄诚韩秋影于鸣巩伟丽张维娜李慧艳
- 关键词：CYCLINSECURINUBCH10活性
- Mad2蛋白在有HeLa细胞有丝分裂期的动态定位
- 2011年
- 在细胞有丝分裂中纺锤体检查点对保证遗传信息的稳定性有着重要的调控意义。其中Mad2蛋白作为纺锤体检查点蛋白在前中期被招募到未与微管正确结合的着丝粒上,从而保证纺锤体检查点的激活并抑制后期的开始。通过活细胞荧光共聚焦显微镜对Mad2的定位动态追踪,定量了其在有丝分裂过程中位于着丝粒上的光强变化,从而为研究纺锤体检查点的功能提供了依据。而Mad2本身的蛋白表达过强过弱均可导致肿瘤的发生,因此通过对其有丝分裂中光强的定量也为研究肿瘤的发生机制提供了线索。
- 李腾高彦飞常艳王玉博穆蕊陈亮甄诚韩秋影于鸣巩伟丽张维娜李慧艳
- 关键词：MAD2有丝分裂
- 表皮生长因子效应评价细胞模型的建立
- 2011年
- 为了筛选表皮生长因子(EGF)信号通路的未知调控分子,利用人正常乳腺上皮细胞系MCF10A建立了EGF效应评价模型,包括细胞增殖、迁移以及细胞周期的进程等。结果显示,EGF能有效促进MCF10A细胞的增殖。饥饿同步化后,EGF能促进细胞从G1期进入S期,开始DNA的合成。此外,Transwell实验显示EGF能明显促进MCF10A细胞的迁移。
- 陈亮穆蕊甄诚高彦飞李腾于鸣巩伟丽李爱玲
- 关键词：表皮生长因子细胞周期
- ROCK1与CD40相互作用的质谱分析及在CD40信号通路中功能的初探
- 2010年
- 为鉴定和验证ROCK1和CD40的相互作用,探索ROCK1在CD40通路中可能发挥的作用,应用HD质谱分析ROCK1和CD40的相互作用,用免疫共沉淀实验验证其相互作用,用ROCK1抑制剂研究ROCK1对CD40通路的影响。结果ROCK1与CD40存在相互作用;并参与CD40介导的信号通路。说明ROCK1能与CD40发生相互作用,为CD40信号通路的研究提供了新的线索。
- 秋昕方迪峰高彦飞甄诚满江红梁冰周涛李卫华
- 关键词：CD40质谱相互作用信号通路
- 体外反应体系中APC/C活性及相关研究
- 2011年
- 为利用体外反应体系研究纯化的细胞周期后期促进复合物(APC/C)相关的分子事件,以其底物泛素化为检测指标,分别从来源细胞裂解液浓度,不同底物间泛素化强度,以及与纺锤体检查点复合物的解离等几方面进行了研究。结果显示,由浓度高的细胞裂解液纯化出的APC/C活性高,其对底物Geminin的泛素化活性较Cyclin B高,在APC/C活性由被抑制到释放过程中,APC/C与Mad2,BubR1结合减少且Cdc20泛素化增强。
- 高彦飞李腾常艳王玉博穆蕊陈亮甄诚韩秋影于鸣巩伟丽张维娜李慧艳
- 关键词：底物活性解离
- SOX11结合p53并上调其转录活性被引量：1
- 2010年
- 目的:研究SOX11对p53转录活性的影响,并检测二者的体外相互作用。方法:在H1299(p53缺失)和H460(含野生型p53)2种细胞中分别过表达SOX11和p53,用双萤光素酶方法测定p53的转录活性;用大肠杆菌DH5α表达GST和GST-p53融合蛋白并将其纯化,用GST pull-down实验检测SOX11与p53在体外是否存在相互作用。结果:萤光素酶实验结果表明,在H1299和H460细胞中,过表达SOX11分别能促进外源p53和内源p53的转录活性;GST pull-down实验表明SOX11能在体外与p53发生相互作用。结论:SOX11能在体外与p53发生相互作用并促进p53的转录活性,为进一步研究p53的功能提供了新的线索。
- 常艳张维娜李腾高彦飞李慧艳满江红梁冰巩伟丽于鸣潘欣
- 关键词：P53相互作用转录活性
- 溴化氰裂解结合电喷雾串联质谱测定电泳分离蛋白的C端序列被引量：1
- 2008年
- C端测序是蛋白质及多肽一级结构确认的重要组成部分,也是重组蛋白药物质量控制的重要依据。建立了溴化氰裂解结合电喷雾串联质谱测定蛋白质C端序列的方法,并应用于重组人肿瘤坏死因子受体和纽兰格林的C端测序。首先根据待测蛋白序列进行溴化氰理论裂解,如果C-端肽段理论分子量在500~5000U之间,则将待测样品进行SDS-PAGE分离,考马斯亮兰染色,然后进行胶内溴化氰裂解,最后应用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）测定C-端肽段的分子量,电喷雾串联质谱对C端肽段进行测序。应用本方法分别测定了这两个蛋白质C端19个和11个氨基酸残基序列。研究结果表明：本方法灵敏、有效、实用性较强,可适用于部分重组蛋白药物的质量控制和蛋白质的结构确证,是对目前蛋白质C端测序方法的有效补充。
- 高彦飞李萍王鸿丽刘炳玉魏开华张学敏杨松成王红霞
- 关键词：电喷雾串联质谱重组蛋白
